《医学微生物学》课件-细菌的形态与结构实验课

实验目的1.了解革兰染色法的实验原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。2.学习并掌握革兰染色技术，掌握光学显微镜油镜的使用技术。3.观察并绘制球菌、杆菌、螺旋菌的图形。革兰染色法的机理G+细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高和其分子交联度较紧密故在用乙醇洗脱时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，因不含脂类，故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙。因此，结晶紫与碘复合物仍牢牢阻留在其细胞内，使其呈现紫色。G-细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联松散，故遇乙醇后，肽聚糖网孔不易收缩，加上它的类脂含量高，所以当乙醇把类脂溶解后在细胞壁上就会出现较大的缝隙，结晶紫与碘的复合物极易被溶出细胞壁，因此，通过乙醇脱色后，细胞又呈无色。这时再经番红复染，就使G-细菌染成红色，而G+细菌仍呈紫色。结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色番红复染全部细胞紫色全部细胞紫色G-菌无色G+菌紫色G-菌红色G+菌紫色革兰氏染色各步骤时细菌的外观实验材料试剂：蒸馏水、石炭酸复红染料、香铂油、二甲苯光学显微镜、灭菌牙签、载玻片口腔微生物的染色观察实验方法1.制片⑴涂片:取清洁玻片一张,在玻片的中央滴一小滴生理盐水(滴加生理盐水不宜过多).用无菌牙签挑取牙垢少许,与玻片上的水滴混匀,涂布成一厘米大小的均匀薄膜。⑵干燥:将涂片放室温中自然干燥,切勿紧靠火焰烘烤,以免标本烤焦,损害菌体结构。⑶固定:持玻片一端,标本面向上,迅速通过火焰三次(约2～3秒),以玻片温度

达到皮肤能耐受的温度为宜.固定的目的是杀死细菌,使其固定于玻片上,并能增强细菌对染料的通透性。2.革兰染色(1)初染:将已固定的涂片标本,加结晶紫染液于涂面上染色1min,然后水洗。(2)媒染:加革兰氏碘液媒染1min,水洗。

(3)脱色:滴加95%酒精,频频摇动载玻片,斜持载玻片,使脱下的染液流下,再次滴加酒精脱色,直至流下酒精无色或稍呈淡紫色为止,水洗。

(4)复染:用稀释复红复染30s至1min,水洗,自然干燥或吸水纸印干。油镜的保护与使用插上电源插头，打开显微镜电源开关。调节显微镜光源。先用低倍镜、高倍镜查找标本视野，下降载物台约2cm，将物镜旋转成八字形，加香铂油一滴于标本的待检部分，换用油镜观察。（不要快速下降镜头，以免压碎玻片而损坏镜头）换用油镜后，眼睛从侧面注视油镜头，缓慢上升载物台至油圈不再扩大为止，此时镜头几乎与玻片接触，但不可压及玻片。观察标本时，双眼同时睁开，左眼观察，右眼画图。油镜用毕，转动粗准焦螺旋将载物台下降，取下标本，用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦净，然后再用擦镜纸擦去二甲苯。将各部分还原，物镜镜头呈八字形，光源强度调至最暗，关于电源，罩上防尘罩，收拾干净台面。油镜观察原理1、口腔细菌：牙垢中的细菌主要为口腔细菌，包括链球菌属、乳杆菌属、放线菌属、丙酸杆菌属等。这些细菌在口腔内定植、生长、繁殖，并与食物残渣等混合，形成牙菌斑。2、厌氧菌：牙垢中的厌氧菌包括拟杆菌属、梭杆菌属、梭菌属等。这些细菌在缺氧环境下生长繁殖，产生有害物质，可能导致牙周病等口腔问题。3、致病菌：一些牙垢中的细菌可能是致病菌，如牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、具核梭杆菌等。这些细菌可能导致龋齿、牙髓炎、牙周炎等口腔疾病。1.玻片一定要清洁无油。2.加生理盐水切莫贪多以免难于干燥,涂片要均匀且薄，不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性;自然干燥后再进行火焰固定(以玻片不烫手为宜)，切勿过热,以免菌