（高清版）DB12∕T 863-2019 水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程　

水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术Aquaticprobiotics---TechnicalregulationforproductionofBacillus2019-02-15实施2019-02-15实施天津市市场监督管理委员会发布I本标准依据GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。1水产微生态制剂解淀粉芽胞杆菌生产技术规程件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T26428饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测4.1.1厂区空气质量符合大气环境质量标准GB3095中Ⅱ类要求。4.1.2发酵用水符合地表水环境质量标准GB3838中Ⅲ类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准中4.1.3生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏25.2.2在发酵前应先检测菌种的纯5.2.3菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿5.3.1原菌种和一级菌种的培养基应保5.3.3发酵培养基在保证菌体生长旺盛，利于芽胞5.4.1液体发酵，发酵罐的装液量50%~70%,液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为121℃~125℃,0.1MPa～0.15MPa,灭菌20min～30min。5.4.2固体物料含水率50%～60%,121℃~130℃,灭菌1.0h～2.0h。5.4.3灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，复5.3的工作。摇瓶种子到发酵罐种子接种量为1%～5%,种子罐到发酵罐接种量为5%～7%。5.6.1芽胞杆菌的发酵温度为25℃~37℃。5.6.2液体发酵在发酵过程中通入无菌空气，通气量为10m³/h·t～20m³/h-t,搅拌转数80r/min~5.6.3芽胞率达到80%以上终止发酵。5.6.5发酵过程加入天然油脂类或有机硅类消泡剂，可采用蠕动36质量检测6.1检测指标每个批次的产品抽样检测包括感官、水分、有效活菌数、芽胞率、杂菌率等指标，检验合格方可出6.2感官检测6.2.1取液体菌剂约250mL(固体菌剂约250g)于无色玻璃杯中，采用目测、鼻嗅的方法进行检验。6.2.2液体菌剂为淡黄色或棕黄色，存放过程中可能出现沉淀，具清淡的腥味；固体菌剂棕色或浅棕色，具有明显的发酵气味。6.3有效活菌数、芽胞率检测6.3.1样品稀释液体菌剂用灭菌0.85%的生理盐水梯度稀释，固体菌剂稀释方法按照GB26428规定执行。6.3.2涂平板有效活菌测定直接用2～3个梯度稀释液(10⁶、10”、10⁸)在含淀粉的培养基(参见附录B)上涂平板，每个梯度涂3个平板，芽胞数则将2～3个梯度稀释液80℃处理10min后在含淀粉的培养基(参见附录B)上涂平板。将涂好的平板在室温中放置15min,使接种物完全被琼脂吸收，倒置于培养箱中37℃培养48h。选取菌落数在30～300个之间的平板计数，典型的解淀粉芽胞杆菌菌落表面粗糙，不透明，边缘不规则，呈浅米黄色，消耗培养基中的淀粉在菌落周围产生透明圈。芽胞数除以菌数即为芽胞率。6.4杂菌率的测定(好氧或兼性厌氧杂菌)从用来测定有效活菌数且已经过10倍系列稀释的样品中，选取10⁵、10°、10⁻73个稀释度进行杂菌率测定。平板计数法，按GB20287执行。6.5固体菌剂水分含量测定7储运7.1应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及有腐蚀性的化学物品，远离热源。7.2长途运输时，防止日晒、雨淋，避免长期受压和机械损伤。产品不应和易燃、易爆、易腐蚀的物品同车(或其他运输工具)装运。4(规范性附录)解淀粉芽胞杆菌生产技术流程图图A.1解淀粉芽胞杆菌生产技术流程图5(资料性附录)计数用培养基含淀粉培养基成分(每升培养基含量):——可溶性淀粉：10g;