（高清版）DB12∕T 862-2019 水产微生态制剂乳酸菌生产技术规程

水产微生态制剂乳酸菌生产技术规程2019-01-14发布天津市市场监督管理委员会发布I本标准依据GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。1水产微生态制剂乳酸菌生产技术规程1范围本标准规定了乳酸菌生产中所涉及的术语和定义、生产环境和设备要求、生产技术流程、质量检测和储运。本标准适用于水产微生态制剂乳酸菌的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB3095环境空气质量标准GB3838地表水环境质量标准GB20287农用微生物菌剂3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。能利用碳水化合物产生乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，在水产养殖中可作为饲料添加剂和水质净化剂。注：本标准中涉及的乳酸菌主要包括植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)、嗜酸乳杆菌(lactobacillus由单菌落分离纯化，并在试管上穿刺繁殖保存的菌种。原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至玻璃瓶中，并厌氧培养的菌种。玻璃瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中厌氧放大培养的菌种。4生产环境和设备要求4.1生产环境24.1.1厂区空气质量应符合大气环境质量标准GB3095中Ⅱ类要求。4.1.2发酵用水应符合地表水环境质量标准GB3838中Ⅲ类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准5.2.2发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退5.2.3菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿级以上，发酵菌液pH<4.0。5.3.1原菌种和一级菌种的培养基应保5.4.1液体发酵，发酵罐的装液量60%～70%,液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为115℃~121℃,0.1MPa～0.15MPa,灭菌20min～30min。5.4.2固体物料含水率为50%±5%,灭菌条件为115℃~121℃,0.1MPa~0.15MPa,灭菌1.0h~5.4.3灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说复5.3的工作。一级种子到二级种子接种量为3%～5%,二级种子到发酵罐接种量为5%～7%。接种时需要无菌操作，调节进、排气阀(通入的气体为氮气或其它惰性气体),使接种口有气体排出。5.6.1乳酸菌的发酵温度控制在25℃~35℃。5.6.2发酵过程中不通气，或通入氮气，搅拌转数50r/min～100r/min。5.6.3当有效活菌数达到每毫升十亿级，并pH降低到4.0以下，结束发酵。5.6.4发酵周期为24h～48h。3发酵后的液体菌剂、固体菌剂密封包装，包装容器经过灭菌处理。6质量检测6.1检测指标每个批次的产品抽样检测包括感官、水分、pH、有效活菌数和杂菌率等指标，检验合格方可出厂。6.2感官检测6.2.1取菌液250mL(或固体菌剂250g)于无色玻璃杯中，采用目测、鼻嗅的方法进行检验。6.2.2菌液为浅棕至深棕色的悬浊液，有特殊的酸香味。固体菌剂因培养基原料不同呈现不同颜色，有特殊的酸香味。6.3pH测定6.4有效活菌数检测乳酸菌有效活菌数的测定按GB20287规定检测。6.5杂菌率的测定(好氧或兼性厌氧杂菌)从用来测定有效活菌数且已经过10倍系列稀释的样品中，选取3个稀释度(10⁶、10⁶、10⁷)进行杂菌率测定。平板计数法，按GB20287操作。6.6固体菌剂水分含量测定7.1应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及腐蚀性化学物品，远离热源。7.2长途运输时