多花黄精组织培养育苗技术规程

1DB43/TXXXXX—2022多花黄精组织培养育苗技术规程本文件规定了多花黄精组织培养育苗过程中组培室消毒处理、外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装运输、档案管理等技术要求。本文件适用于湖南省多花黄精组织培养育苗。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4285农药安全使用标准GB/T8321农药合理使用准则（所有部分）LY/T1882林木组织培养育苗技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1多花黄精PolygonatumcyrtonemaHua百合科黄精属的多年生草本植物，中药材黄精基源植物。根状茎肥厚，少有近圆柱形，茎高可达100cm，叶互生，椭圆形、卵状披针形至矩圆状披针形，伞形花序，花被黄绿色，浆果黑色，5月-6月开花，8月-10月结果。4组培室消毒处理组培室用84消毒液稀释至1000倍或75%乙醇喷洒洗涤组培室地面，保持室内清洁。超净工作台用紫外灯照射30min，随后关闭紫外灯通风20min以上，用湿拖把轻轻打扫超净工作台四周，降低尘埃，接着用75％乙醇擦拭台面操作区域。5外植体采集5.1取种子萌发形成的幼芽，用解剖刀从芽的萌发的基部切下；5.2取无病害，无腐烂，根系发达的多花黄精根状茎健壮芽头，在芽点以下2cm-3cm处，用解剖刀切下。6外植体处理2DB43/TXXXXX—20226.1清洗放入器皿中用洗衣粉等清洁剂冲洗20min。6.2灭菌清洗好的外植体转入超净工作台进行操作，将芽块放入灭菌后的烧杯内，用75%酒精清洗30s，无菌水冲洗3-5次，0.1%HgCl溶液浸泡10min-15min，最后用无菌水冲洗5次-6次。7培养基制备7.1培养基配方诱导培养基、增殖培养基、生根培养基的配方见附录A。7.2培养基配置、灭菌与保存参照LY/T1882执行。8组织培养8.1培养条件培养温度25℃±2℃培养室中，光照时间12h/d，光照强度1500lx-2000lx。8.2诱导培养黄精芽块灭菌后在接种盘中切掉芽块下部，只留取0.5cm-1cm大小的芽点，迅速接种到诱导培养基中，培养30d-50d，分化产生5个左右丛生芽时，转入增殖培养基中进行培养。8.3增殖培养切取其丛生芽转入增殖培养基中进行增殖培养，反复接种继代培养4-5次后，转入生根培养基中进行生根培养。增殖培养的周期以30d-45d为宜，增殖率为4-7，可继代4-5次。8.4生根培养将诱导形成的大小相近的继代苗，在超净工作台上切割为单株，接种到生根培养基中培养，培养25d-30d根系铺满培养瓶底部即进行炼苗移栽。8.5炼苗8.5.1炼苗标准当组培苗拥有1个以上的健壮芽点，生长4条-5条根以上时，可进行炼苗处理。8.5.2驯化将装组培苗的培养瓶从培养架上取下，转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20℃-25℃,封口炼苗3d-5d，开瓶炼苗1d-2d后即可移栽。9移栽9.1容器3DB43/TXXXXX—2022选用穴盘或底部有空的育苗盘。9.2基质按照体积比珍珠岩:蛭石:泥炭土=1:2:3。9.3方法取出生根苗，自来水冲洗干净根部培养基，用1000倍甲基托布津或多菌灵溶液浸泡根部5min~8min，放置于通风阴凉处晾干水分至根系发白变软，再移栽入已准备好的基质中。移栽前将基质浇~透水，移栽完成后用花洒进行浇水定根。9.4管理9.4.1环境条件将移栽的组培苗置于有自动喷雾设备和遮阳网的大棚中，保持棚内光照强度在1000～2000lx，空气湿度在75%～85%之间，定期浇水，保持基质湿度为30%-50%。9.4.2追肥每隔15d～20d用氮磷钾（N20-P20-K20）或（N25-P10-K20）水溶性肥600倍～800倍溶液浇苗1次。9.4.3病害管理对苗期病虫害以预防为主，综合防治。施用农药应符合GB4285和GB/T8321（所有部分）的规定。当组培苗根状茎长3cm以上，重15g以上时可以出苗。11包装、标志、运输11.1包装包装应用干燥、清洁、无异味、不影响质量、容易回收和降解的材料，外包装应用纸箱。11.2标志每箱应贴上标签，注明品种、数量、产地、出苗日期等。11.3运输装车时切勿倒置，用有蓬车辆运输以避免日晒、雨淋，高温和严寒季节装运的车厢应该有控温设施，温度调节至25℃,不低于5℃,到目的地后应立即进行种植或假植。12档案管理多花黄精组织培养育苗培育过程中外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装等内容，应逐项如实记载，记载表格见附录B。4DB43/TXXXXX—202212.2保存档案采用纸质档案和电子档案2种方式保存，保存时间3年。5DB43/TXXXXX—2022（资料性）组织培养配方表A.1多花黄精组织培养育苗培养基配方培养基成分类别培养基成分诱导培养基mg/L增殖培养基mg/L生根培养基mg/L大量元素NH4N03825825950950MgS04•7H20370KH2PO4CaCl2•2H20440220220铁盐FeS03•7H2027.827.827.8Na2-EDTA37.337.337.3微量元素MnS04•4H2022.322.322.3ZnS04•7H208.68.68.6CuS04•5H200.0250.0250.025Na2Mo04•2H200.250.250.25CoC12•6H200.0250.0250.025KI0.830.830.83H3BO36.26.26.2有机营养成分烟酸0.50.50.5盐酸硫胺素0.10.10.1盐酸吡哆醇0.50.50.5甘氨酸2.02.02.0肌醇防褐变剂抗坏血酸植物生长调节剂6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.04.0/2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）/0.2/吲哚丁酸(IBA)//0.8萘乙酸（NAA）0.5/0.5糖蔗糖300003000030000凝固剂琼脂500050005000pH值5.85.85.86DB43/TXXXXX—2022（资料性）生产档案表B.1