实验四微生物大小的测定显微镜直接计数法

试验四微生物大小测定与显微镜直接计数法第1页(一）、微生物大小测定目标要求1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小方法。2.增强微生物细胞大小感性认识。第2页试验原理镜台测微尺为中央部分刻有准确等分线载玻片，将1mm等分100格，每格长0.01mm。只用于校正目镜测微尺。目镜测微尺是可放入目镜内圆形小玻片，准确等分50小格或100小格。因为不一样显微镜或不一样目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格所代表实际长度也不一样。所以，测量前需先用镜台测微尺进行校正。

球菌以直径表示大小；杆菌用宽×长表示。第3页试验器材菌种：啤酒酵母仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺第4页试验步骤安装目镜测微尺校正目镜测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。分别在低、高倍镜、油镜下用镜台测微尺校正目镜测微尺计算镜台测微尺：将1mm等分为100小格，每小格长0.01mm（即10μm）。目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格数×10）/两重合线间目镜测微尺格数第5页菌体大小测定取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，在高倍镜下测定酵母菌长和宽。选择有代表性10个细胞进行测定，取平均值。试验结果统计（书P50）1）将目镜测微尺校正结果填入下表接目镜放大倍数：——接物镜接物镜倍数目镜测微尺格数镜台测微尺格数目镜测微尺每格代表长度/um低倍镜高倍镜油镜第6页2）将啤酒酵母测定结果填入下表测定次数目镜测微尺每格代表长度/um宽长菌体大小/um目镜测微尺格数宽度/um目镜测微尺格数长度/um123456789１０平均值第7页第8页第9页目标要求1.明确血细胞球计数板计数原理。2.掌握使用血细胞计数板进行微生物计数方法。（二）酵母菌显微镜直接计数第10页血球计数板结构血球计数板是一块特制载玻片，其上由4条槽组成3个平台；中间较宽平台又被一短横槽隔成两半，每一边平台上各有一个方格网。每个方格网共分9个大方格，中间大方格即为计数室。计数室刻度有两种规格：一个是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一个是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但不论哪种规格，每个大方格都由400个小方格组成。每个大方格边长为1mm，则每个大方格面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间高度为0.1mm，所以计数室容积为0.1mm3。基本原理第11页第12页试验器材菌种：啤酒酵母仪器：显微镜、血球计数板第13页制备适当浓度菌悬液取洁净血球计数板盖上盖玻片静置5分钟用高倍镜计数加样品设5个中方格总菌数为A，菌液稀释倍数为B计数板为25个中方格(此次试验)

：1ml菌液总菌数=A/5×25×104×B计数板为16个中方格：1ml菌液总菌数=A/5×16×104×B第14页注意事项取样时先要摇匀菌液；加样时计数室不可有气泡；普通样品稀释度要求每小格内约有5-10个菌体为宜；每个计数室选5个中格（4个角和中央）计数；位于格线上菌体普通数上不数下，数右不数左；若芽体大小到达母细胞二分之一，则作为两个菌体计数。血球计数板使用完成，用水冲洗洁净，切勿用硬物洗刷，以免损坏网格刻度；洗净后自行晾干或吹风机吹干。第15页试验结果（书P５５）测定你所制备样品含菌量。A表示五个中方格中总菌数；B表示菌液稀释倍数各中格中菌数AB二室平均值菌数/mＬ12345第一室第二室第16页思索题为何更换不一样放大倍数目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？在不改变目镜和目镜测微尺