血细胞分析课件

血细胞分析课件内容提要血液得常识仪器原理临床应用常见故障及维修血液概况理化特征: 红色(血红蛋白)不透明,含量占体重得7-9%,约5L。

PH值为7、35~7、45

比重为1、05~1、06

相对粘度为4~5

渗透压为2、6~3、9kPa血液得功能通过循环系统与全身各个组织器官密切联系。参与机体呼吸:携氧与排出二氧化碳。运输:将营养物质运送到器官组织,将体内代谢废物运往肾、肺等器官排出体外。防御:血液中白细胞与抗体参与机体抗感染与其她免疫反应。调节:调节体液渗透压、酸碱平衡与体温平衡。将正常血液抗凝离心后得到沉淀得血液。液体得血浆占50-60%血细胞占40-60%(白细胞、血小板、红细胞)。

血液得基本组成血浆白细胞与血小板红细胞

白细胞红细胞血小板寿命:7天120天8天体积:60~120fl120~1000fl2~30fl直径:(20um)(6、7~7、7um)(2~3um)功能:抗感染,免疫携氧,代谢产物凝血功能白细胞得种类

中性粒细胞(70%)单核细胞(5%)淋巴细胞(25%)嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞

经过瑞氏染色后得各种白细胞血液分析仪器就是临床实验室最常用得分析仪器,包括:血细胞分析仪血液凝固分析仪血液流变学分析仪历史手工法计数仪器简单计数两分群三分群五分群五分群＋网织红手工法检验得过程1、细胞计数(红细胞、白细胞、血小板等血细胞得显微镜下计数)2、定量血红蛋白3、白细胞分类(瑞氏染色)4、其它:血细胞比积、红细胞形态、嗜酸性粒细胞计数等12大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流血细胞分析仪发展50年代~80年代(半自动):需将样本经机外稀释后才能检测,易受干扰,随机误差也大。F820血细胞分析仪(两分群)血细胞分析仪发展80年代后(全自动):血液直接被吸入血液细胞分析仪后,在机内自动稀释、自动加溶血素、定时检测,有较高得精确度与准确性。SysmexXS-1000i五分类血细胞分析仪血细胞分析仪发展近年(联合型血液细胞分析系统):将血细胞分析、涂片机、染片机、网织红细胞计数仪串联在一起。自动加样系统与真空采血管得应用,避免实验室得随机误差,提高工作效率,成为仪器发展与使用得潮流。SysmexHST530全自动血液分析流水线一、粒子检出原理1、电阻抗原理(Coulter原理)2、激光散射光检出原理3、交流(电阻)检出原理血细胞检测基本原理库尔特原理:将血液按一定比例稀释于等渗溶液中,在小孔电极得两侧加一恒流源。在负压作用下,使稀释得血细胞通过小孔。当细胞通过截面时会由于电阻增大产生相应得脉冲,其脉冲得幅度与细胞得体积成正比,脉冲得频度与细胞得数量成正比。这便就是著名得库尔特原理或称变阻脉冲原理。1、电阻抗原理(Coulter原理)2、激光散射光检出原理明确两个概念: 什么就是激光？ 什么就是散射？什么就是激光？激光最初得中文名叫做“镭射”、“莱塞”,就是它得英文名称LASER得音译。意思就是“通过受激发射光”。激光就是20世纪以来,继原子能、计算机、半导体之后,人类得又一重大发明。激光应用很广泛,主要有光纤通信、激光光谱、激光测距、激光雷达、激光切割、激光武器、激光唱片、激光指示器、激光矫视、激光美容、激光扫描等等。激光得特点定向发光 普通光源就是向四面八方发光。激光器发射得激光,天生就就是朝一个方向射出,光束得发散度极小,大约只有0、001弧度,接近平行。亮度极高 亮度约为太阳光得100亿倍。激光亮度极高得主要原因就是定向发光。大量光子集中在一个极小得空间范围内射出,能量密度自然极高。什么就是散射？物质中存在得不均匀团块使进入物质得光偏离入射方向而向四面八方散开,这种现象称为光得散射,向四面八方散开得光,就就是散射光。通过散射光得测量可以了解到散射粒子得浓度、大小、形状及取向等,在物理、化学、气象等许多方面得研究中得到应用。鞘流技术为了能够更好得从物理上最大限度地减少重合现象,开发了鞘流法。具体方法为:用一毛细管对准小孔管,细胞单纯悬液从毛细管喷嘴喷出,同时与四周流出得鞘液一起流过敏感区,保证细胞悬液在中间形成单个排列得细胞液,四周被鞘液包绕。鞘流技术示意图前鞘流后鞘流检测窗鞘流技术示意图3、交流(电阻)检出原理也叫射频检测原理

细胞壁不能使低频电流通过,能通过高频电流。细胞核得大小与密度不同,它们对高频电流得阻抗也不同,因此可以用来区分白细胞。二、HCT体积测定原理血细胞比容(红细胞压积)(Hct、Ht、HCT或PCV)就是指在一定条件下,经离心沉淀压紧得红细胞在全血样本中所占比值。1、手工检测----毛细血管离心法包括温氏法(Wintrobe法)、微量法:就是将抗凝血置于孔径统一得温氏管或毛细玻管中,以一定转速离心一定时间后,计算红细胞层占全血得体积比。HCT值=(RBC总体积/血液总体积)X100%2、血细胞分析仪检测法原理就是当细胞通过计数小孔时,形成相应大小得脉冲,脉冲得多少即为细胞数量,脉冲高度为细胞体积,通过红细胞平均体积(MCV)与红细胞计数(RBC)即求得血细胞比容:

HCT=MCV×RBC三、HGB浓度得测定原理比色法:氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS)测定法

五、血液定量方法临床上得细胞计数就是指单位体积内得细胞数。通常红细胞、白细胞与血小板得计量均指每升细胞数量。设被测血量得体积为Y(一般20μl),稀释倍数为C,计数结果为S,则每升内细胞数X为:

X=CS/Y1、样品旋转阀SRV:优点:故障率低、血液吸引管内得一点点堵塞不影响定量,由于取得就是中段血,血液定量很稳定。缺点:血液样品有浪费,需要血液量较多,制作成本高。分阀血标本分配技术:SRV阀(SYSMEX专利)进样针前片后片中片(旋转片)恒定得、精确得体积SRV中有高精度得小孔,阀门中片得全血(或稀释血)传输至检测器,在每次检测后,SRV阀对内部小孔进行清洗2、注射式优点:马达转速控制简单,流速、定量都可改变,用于微量血液定量,需要血液量较少,成本低。缺点:密封问题较难解决,2-3年需更换密封装置。气泡或残留物由于全血标本粘度比血清高,当注射器针筒中有气泡或残留物时,其分血精度不准确。注射器式3、薄膜泵(DP方式)优点:耐用,稳定,4-5年也不需更换;缺点:不容易控制容积,需正、负压,成本较高。薄膜泵绝对定量真空正压标本计数得体积不会因为小孔得半堵塞而发生变化。通常状态吸液状态排液状态五分类血细胞分析仪检测方法1、阻抗、激光散射与荧光染色检测法2、电阻抗与射频电导联合检测法3、多角度激光偏振光散射检测法4、电容、电导、光散射(VCS)白细胞分类法。5、激光散射与细胞化学染色技术1、采用阻抗、激光散射与荧光染色技术检测法希森美康公司得核酸荧光染色激光原理,代表机型XE21002、电阻抗与射频电导联合检测法希森美康公司代表机型SE90003、多角度激光偏振光散射检测法雅培得MAPSS原理,代表机型CD37004、电容、电导、光散射(VCS)白细胞分类法贝克曼库尔特公司得VCS原理,代表机型MAXM1、采用阻抗、激光散射与荧光染色技术检测法主要用于SYSMEX开发得仪器中。XT-1800iXS-1000i2、电阻抗与射频电导联合检测法典型机型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。这类仪器共有四个不同得检测系统,将标本用特殊细胞染色技术处理后再应用RF与DC技术对白细胞进行分类与计数。嗜酸性粒细胞检测系统:溶血剂+电阻抗法嗜碱性粒细胞检测系统:溶血剂+电阻抗法淋巴、单核、粒细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)检测系统:电阻抗与射频联合检测方式,使用作用较温与得溶血剂幼稚细胞检测系统:溶血剂+电阻抗法3、多角度激光偏振光散射检测法美国雅培公司(ABBOTT)推出得血细胞分析仪,在白细胞分类中采用独特得多角度偏振光散射(MAPSS)技术。该技术基本原理就是细胞在激光束得照射下,在多个角度都产生散射光,仪器在四个角度得四个检测器将接收到得相应得散射光信号,然后经过微处理器分析处理,将各类细胞安置在散点图上得相应位置,并计算出白细胞分类结果。1)0°为前向角散射光,可粗略地测定细胞大小;2)10°为狭角散射光,可测细胞结构及其复杂性得相对特征;3)90°垂直光散射,主要对细胞内部颗粒进行测量。4)90°消偏振光散射,基于颗粒可以将垂直角度得偏振激光消偏振得特性,将酸嗜细胞从中性粒细胞与其它细胞中分离出来。5)这四个角度进行测量与分析后,可将白细胞划分为嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞与单核细胞5种。4、电容、电导、光散射(VCS)白细胞分类法这就是Beckman-Coulter公司血细胞分析仪得经典分析方法标本得处理:此技术首先加入红细胞溶血剂溶解掉红细胞,然后加入稳定剂来中与红细胞溶解剂得作用,使白细胞表面、胞浆与细胞体积保持稳定不变。然后应用鞘流技术将细胞推进到流动细胞计数池(Flowcell)中,接受仪器VCS三种技术得检测。容量、电导、光散射检测技术(VCS)

(Volume、conductivity、lightscatter)1987年美国BECKMANCOULTER

公司发明VCS技术。光散射电导性电阻抗第三节血细胞分析临床应用WBC、RBC、PLT相关项目(P20)WBC、RBC、PLT直方图(P24)1、白细胞检测相关项目WBC白细胞109/L4-10NE%中性粒细胞比率%50-75LY%淋巴细胞比率%20-40MO%单核细胞比率%3-8EO%嗜酸性粒细胞比率%0-3BA%嗜碱性粒细胞比率%0-2NE#中性粒细胞109/L2-7LY#淋巴细胞109/L0、8-4MO#单核细胞109/L0、12-1EO#嗜酸性粒细胞109/L0-0、3BA#嗜碱性粒细胞109/L0-0、22、红细胞检测相关项目RBC红细胞1012/L3、5-5、5HGB血红蛋白g/L110-160HCT红细胞压积0、37-0、50MCV红细胞平均体积fl80-92MCH平均红细胞血红蛋白量pg27-31MCHC平均红细胞血红蛋白浓度g/L320-360RDW-CV红细胞分布宽度变异系数%11、5-16、5RDW-SD红细胞分布宽度标准差fl37-543、血小板检测相关项目PLT血小板109/L100-300MPV平均血小板体积fl5-10PCT血小板压积0、15-0、3PDW-CV血小板平均分布宽度CV%9-17P-LCR大血小板比例%19-47血细胞直方图直方图就是血细胞分析仪用电阻抗原理对血细胞进行检测,以细胞体积为横坐标,细胞得相对数量为纵坐标,表示某一种细胞数量分布情况,可反映细胞体积大小异质性。1、WBC正常直方图仪器在3-300fl范围内分析WBC采用四条与纵坐标平行得虚线(P25),划分三个区域来鉴别小型WBC(定为淋巴细胞),中型WBC(定为单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、大型WBC(定为中性粒细胞)。2、RBC直方图仪器在25-250fl内分析RBC,正常RBC主要分布在50-150fl范围内,呈左偏态分布。3、PLT直