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文档简介
1凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所2将普遍率和病害严重度相结合，用一个数值全面反映植株群体发病程度，NI——各级发病枝条数；4接种体制备4.1病原菌分离纯化、保存及扩繁馏水煮沸30min，纱布过滤，滤液定容至1328℃条件下培养至分生孢子萌发，在10倍光学显微镜下镜检，挑取萌发的单个分生孢子置于新的制作1.5mLPDAEppendorf离心管斜面，将待保存菌株接种至斜面，28℃恒温培养待菌丝长满斜4.1.7接种体扩繁5.4接种后的管理4级别病斑大小0接种后烫伤部位不发病10cm＜病斑长度≤2.0cm32.0cm＜病斑长度≤3.5cm53.5cm＜病斑长度≤4.5cm74.5cm＜病斑长度≤5.0cm95.0cm＜病斑长度测量方法为：在接种点处向上向下测量病斑的扩展长度，即为病斑级别抗性评价病情指数I免疫Immune(I)0高抗Highlyresistant(HR)0＜病情指数≤10III抗病Resistant(R)10＜病情指数≤20IV中感ModeratelySusceptible(MS)20＜病情指数≤30V感病Susceptible(S)30＜病情指数≤40Ⅵ高感HighlySusceptible(HS)40＜病情指数5A.1学名和形态学描述我国苹果树上存在3种腐烂病菌：Valpersoonii(Nitschke)Hhn。在PDA培养基苹果树腐烂病菌菌丝、初期为白色、生长后期菌丝为白色、黄褐色，菌丝分支、分枝处溢缩不明显，菌落平坦边缘呈放射状，气生菌丝丰富，后期部分菌A.2分子生物学鉴定将待提DNA的苹果树腐烂病菌菌株置于PDA培养基上，28℃下，光暗交替签刮取培养基表面菌丝，收集到灭菌的1.5mL离心管引物名称引物序列ITSITS15’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’ITS45’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’β-tubulinBt2a5’-GGTAACCAAATCGGTGCTGCTTTC-3’Bt2b5’-ACCCTCAGTGTAGTGACCCTTGGC-3’EF1-αEF1-728F5’-CATCGAGAAGTTCGAGAAGG-3’EF1-986R5’-CATCGAGAAGTTCGAGAAGG-3’6扩增产物用浓度为0.8%的琼脂糖凝胶电泳并用凝胶成像仪观察，切胶回收目的基因扩增产物，片段连入PMD18-T载体，由公司进行序列测定，获得的序列在NC分别将同一菌株的ITS，BT和EF1-α基因序列整合后，以苹果树腐烂病菌的标准菌株序列作为参考，以Diaporthevaccinii为外围菌株进行多位点系统发育分析。整合好的序列首先用ClustalW软件进行比对，然后利用BioEdit（V7.0.8）软件对序列进行人工调整。在PAUP（V4.0）软件中，利用最大似然法进行遗传发育分析，构建遗传进
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