PCR仪基础知识和实验室应用讲解

PCR仪基础知识和实验室应用01基础知识各类PCR仪对比0203实时荧光定量PCR仪应用04目录PCR仪相关配套仪器设备01基础知识基础知识PCR：聚合酶链式反应。是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。分子生物学技术PCR原理示意图：临床检验分析仪器二类医疗器械01基础知识基础知识PCR技术的应用：1、医学：病理科（癌症的诊断）；检验科（病原微生物的检测，如甲肝、乙肝、HIV、麻疹、HPV、SARS、炭疽、寄生虫等）；产前诊断；法医（犯罪现场标本分析），个体识别与亲子鉴定等2、食品农业：食品微生物检测（沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌等）；转基因食品检测（转基因大豆、转基因玉米等）、食品成分检测（动物源性成分、植物源性成分）等。3、生物制药：3、环境保护：气体检测、土壤监测、水监测等4、科研：肿瘤的诊断与研究（原癌基因/抑癌基因）、DNA测序、分析突变、中医药研究等。01基础知识基础知识一.PCR反应成分（PCR反应体系)：（五要素）1.模板DNA：含有需要扩增的DNA片段。2.引物：决定了需要扩增的起始和终止位置。3.脱氧核糖三磷酸（dNTP）：4种脱氧核糖核酸，用于构造新的互补链。4.耐热DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）：复制需要扩增的区域。5.Mg2+:用于激活DNA聚合酶的活性中心。01基础知识基础知识PCR反应的基本步骤：预变性：94℃~96℃1.变性：高温使双链DNA解离形成单链（

90～95℃）2.退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（

40～60℃）3.延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（

70～75℃）25~40次循环，目的基因扩增：

2n最后在72℃条件下延伸7~10min。01基础知识基础知识PCR分类：普通PCR仪

梯度PCR仪原位PCR仪荧光定量PCR仪02基础知识PCR仪对比仪器分类产品特点主要用途普通PCR仪一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪。（定性检测：PCR仪+电泳仪+凝胶成像系统）医学临床检验，食品检测，科研机构，高等院校教学对遗传变异，基因表达等进行研究。梯度PCR仪一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。主要：科研机构，医学临床研究，高等院校，病毒分析，疾控中心等。原位PCR仪主要是应用对细胞或组织内的DNA片段进行原位扩增分析-即定位分析。无需将细胞破碎提取DNA，细胞内有DNA酶的作用扩增受到一定的影响，使用不是很普遍。主要用于医学临床研究，如癌细胞等。

实时荧光定量PCR仪在普通PCR仪设计基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。与普通PCR仪，梯度PCR仪相比，无需做电泳分析，实验一步检测完成。动物疾病检测：禽流感、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。食品安全：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究、大学及研究所等。03基础知识荧光定量PCR仪应用（临床检验）实验：实时荧光定量PCR检测HPV-DNA在宫颈癌筛查中的应用目的：探讨HPV与宫颈病变的关系。实验方法：

样品采集DNA提取PCR检测结果判断移液器、混匀仪、金属浴、高速冷冻离心机、微型离心、生物安全柜荧光定量PCR仪03基础知识荧光定量PCR仪应用（临床检验）实验方法：

03基础知识荧光定量PCR仪应用（食品、农业）实验：水稻及其产品中转基因成分实时荧光PCR检测方法主要仪器：实时荧光定量PCR仪；天平；冷冻研磨仪；消毒灭菌锅；制冰机；核酸蛋白分析仪；高速冷冻离心机；台式小型离心机；Mini个人离心机；低温冰箱；旋涡振荡器；金属浴；微量移液器。实验流程：

制样DNA提取DNA浓度测定PCR反应结果分析DNA模板制备03基础知识荧光定量PCR仪应用（食品、农业）DNA模板的制备：

天平，微量移液器，制冰机，旋涡振荡器，高速冷冻离心机，金属浴，小型台式离心机，Mini个人离心机，低温冰箱（-20℃），DNA提取试剂盒03基础知识荧光定量PCR仪应用（食品、农业）DNA浓度测定：

核酸蛋白分析仪/紫外分光光度计03基础知识荧光定量PCR仪应用（食品、农业）PCR反应：1、阳性对照、阴性对照、空白对照2、PCR反应体系：

3、仪器设置：设置样品名称、报告基团和淬灭基团的种类、荧光信号收集等。03基础知识荧光定量PCR仪应用（食品、农业）PCR反应：4、PCR反应参数：实时荧光定量PCR的反应参数

5、PCR反应运行结果分析03基础知识PCR仪相关配套仪器设备PCR实验室布局图：

03基础知识PCR仪相关配套仪器设备

仪器设备主要用途天平（0.1mg）样品称量微量移液器试样、试剂的移取。（单道：0.2~2uL，2uL~10uL，20uL~100uL，100uL~1000uL；多道：50uL~300uL）纯水机提供试剂配制等实验用水（一级水）药品冷藏箱（2~8℃）用于药品、试剂的保存。低温冰箱（-20℃或-80℃）用于样品和试剂的保存。混匀仪震荡混匀超净工作台用于试剂的配置以及扩增区操作。（样品制备区/扩增区）紫外消毒车实验室空气及实验台灭菌。生物安全柜样本制备区的实验操作，防止样品污染，建议选B2）离心机（高速冷冻/普通/微型离心机）用于DNA提取过程中物质的分离漩涡振荡器用于DNA提取过程中试样的震荡混匀。制冰机为DNA提取提供冰浴环境。金属浴为实验提供恒温环境。核酸提取仪用于DNA/RNA的自动提取。03基础知识PCR仪相关配套仪器设备

仪器设备主要用途PCR仪用于基因扩增荧光定量PCR仪用于基因扩增与数据分析核酸蛋白分析仪用于DNA浓度和纯度的测定电炉/微波炉用于琼脂糖凝胶等的加热熔化。电泳仪/电泳槽/电泳仪电源用于PCR扩增后电泳分离纯化凝胶成像系统用于电泳结果的观察、分析。分子杂交箱