第二章仪器检测技术色谱法讲解

第二章仪器检测技术色谱法一、概述1、色谱法：利用不同物质在不同的两相中所表现的物理化学性质上的差异来进行分离、分析的方法。（1）相：指一个均匀的体系（2）固定相：固定在一定支持物上的相。在色谱分析中固定不动，对化学成分产生保留的相。（3）流动相：色谱过程中与固定相处于平衡状态，携带待测组分向前移动的物质。又称洗脱剂或展开剂2、色谱法分类（1）根据分离方法分类1）纸色谱PC2）薄层色谱TLC3）柱色谱CC4）气相色谱法GC5）高效液相色谱法HPLC（2）根据两相所处的状态分类1）液—固色谱2）液—液色谱3）气—液色谱（3）根据色谱过程的机制分类1）吸附色谱2）分配色谱3）离子交换色谱4）凝胶色谱二、薄层色谱法1、薄层色谱法：系指将供试品溶液点于薄层板上，经展开、检视所得的色谱图，与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对比，用于药物的鉴别、杂质检查和含量测定。2、常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺目数：150-200目3、展开剂的选择应具有良好的化学稳定性，不与展开系统内所有的物质发生化学反应。Rf值：0.2-0.8各Rf值之差＞0.054、操作（1）薄层板制备铺板：1份固定相+3份水（或0.5%CMC-Na）在研钵中向一个方向研磨混匀、铺板，在空气中自然干燥，110℃活化30分钟，置于干燥器中备用。（2）点样在距离薄板的一端2cm处用铅笔轻轻地划一条直线，作为起始线，在线上做点样位置的记号，用毛细管0.5mm或微量注射器点样，点样斑点＜3mm，各点间距离1-2cm（以不影响斑点检出），反复点样时应吹干后再点第二次。（3）展开展开剂浸入薄层板下端的高度不宜超过0.5-1.0cm（注意：点样点不得浸入展开剂中），展距一般约15cm。（4）显色、检视5、应用（1）定性西咪替丁片的薄层色谱法鉴别。鉴别方法：取本品的细粉适量（约相当于西咪替丁0.1g），加甲醇10ml，振摇使西咪替丁溶解，滤过，作为供试品溶液；另取西咪替丁对照品，加甲醇制成每1ml中含西咪替丁10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（5∶1）为展开剂，展开后，晾干，置饱和的碘蒸气中显色，供试品溶液所显主斑点的颜色和位置应与对照品溶液的主斑点相同。CompanyLogo（2）杂质检查枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查方法。方法：取本品，加甲醇制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液；另取N-甲基哌嗪对照品，加甲醇制成每1ml中含50μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用三氯甲烷-甲醇-氨溶液（13:5:1）为展开剂，展开后，晾干，置碘蒸气中显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。（3）定量1）目视定量法2）洗脱定量法3）薄层扫描法三、高效液相色谱法1、常用术语（1）理论塔板数（n）柱效指标（2）保留时间（t）定性依据（3）峰面积（A）定量依据（4）分离度

R应≥1.52、液相色谱仪的基本组成（1）输液系统（2）进样系统（3）分离系统常用固定相：C18柱（十八烷基硅烷键合硅胶）（4）检测系统（5）记录系统贮液器和吸滤器：贮液器:1-2L的玻璃瓶溶剂吸滤器:Ni合金，孔约0.45

m，防止颗粒物进行泵内。

用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。常用检测器：紫外检测器（最常用的通用型检测器）、蒸发光散射检测器（适于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测）、荧光检测器等色谱工作站在线显示自动采集处理储存自动控制

HPLC仪器3、应用（1）定性1）与纯物质比较例：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照溶液主峰的保留时间一致。2）加入纯物质增加峰高（2）杂质检查例：…..各杂质峰面积的和不得大于对照对照溶液的主峰面积。（3）定量四、气相色谱法1、