2025年粤教版选择性必修3生物下册月考试卷含答案

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A.改变通入气体种类，可以研究呼吸作用类型对发酵的影响B.果酒发酵中酵母菌进行厌氧呼吸，所以需要关闭气体出入口C.果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关D.气体入口与气体出口不可以交换使用2、某种物质S（一种含有C；H、N的有机物）难以降解；会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲，乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y下列分析错误的是（）

A.Y物质是琼脂，甲和乙均需采用高压蒸汽灭菌B.若摇瓶甲细菌细胞估算数为2×107个/mL，每个平板接种量为100μL，菌落平均数为200个，则摇瓶内菌液至少稀释104倍C.③过程所使用的接种环，需采用灼烧灭菌法进行灭菌D.⑤过程中若S的浓度超过某一浓度时，菌株对S的降解量可能会下降3、上海医学遗传研究所成功培育出第一头携带人白蛋白的转基因牛，他们还研究出一种可大大提高基因表达水平的新方法，使转基因动物乳汁中的药物蛋白含量提高30多倍。下列有关的叙述中，正确的是（）A.提高基因表达水平是指设法使牛的乳腺细胞中含有更多的人白蛋白基因B.运用基因工程技术让牛合成人白蛋白，该技术将导致定向变异C.人们只在转基因牛的乳汁中才能获取人白蛋白，是因为只在转基因牛的乳腺细胞中才有人白蛋白基因D.转基因动物是指体细胞中出现了新基因的动物4、下列关于转基因生物安全性的叙述中，错误的是（）A.我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度B.国际上大多数国家都在转基因食品标签上警示性注明可能的危害C.开展风险评估、预警跟踪和风险管理是保障转基因生物安全的前提D.转基因技术有利有弊，我们要理性看待转基因技术的安全性问题5、下列关于传统发酵技术的叙述，错误的是（）A.传统发酵技术制葡萄酒必须添加酵母菌菌种B.制作果醋时，必须向发酵装置不断地补充空气，以保证醋酸菌的生长C.制作腐乳时，加盐腌制可使豆腐块变硬且能抑制杂菌生长D.腌制的酸菜不酸且发酵液表面出现了一层菌膜，其原因可能是密封不严6、下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是（）。成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊红美蓝青霉素琼脂蒸馏水含量10g10g2g0．4g0．065g1万单位适量1000ml

A.此培养基属于天然鉴别培养基，其中的氮源来自于牛肉膏B.能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因C.此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准D.此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中7、自新冠疫情暴发以来，“勤洗手”已成为全民共识。为验证洗手的重要性，实验者将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下，然后用“七步洗手法”洗手后，再将5个手指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下，最后将这两个培养皿放入恒温培养箱中，经过37°C、24h培养后发现贴有“洗手后”标签的培养基上的菌落较少。下列叙述错误的是（）A.“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的“接种”B.该实验需增设一组未接种的培养基，以判断培养基是否被污染C.培养结束后可根据肉眼观察到的菌落特征判断培养基上的菌体类型D.由实验结果可以看出实验者在“七步洗手法”后可以直接进行无菌操作评卷人得分二、多选题(共7题，共14分)8、下列关于人早期胚胎发育过程中桑椹胚和囊胚的叙述中，正确的是（）A.囊胚与桑椹胚相比，每个细胞内DNA总量增加B.囊胚期出现了细胞分化，但遗传物质未发生改变C.囊胚期内细胞团和滋养层细胞差异不是复制水平上的差异，而是转录水平上的差异引起D.桑椹胚的形成在卵巢，囊胚的形成在输卵管9、下列属于生物武器的是（）A.致病菌B.病毒C.抗生素D.生化毒剂10、为有效防范由各类生物因子、生物技术误用滥用等引起的生物性危害，生物安全已纳入国家安全体系。下列不符合生物技术的安全性和伦理问题的是（）A.利用生物技术改造工程菌获得大量的抗生素B.克隆技术可应用到器官移植但不能进行人体克隆C.中国反对生物武器，但在特殊情况下可以生产生物武器D.基因编辑技术不仅可用于疾病预防领域研究，也可用于编辑婴儿11、关于我国对转基因技术的方针，叙述正确的是（）A.我国对转基因技术的方针是随着国家的政治、经济、科学发展水平的提升不断变化的B.研究上要大胆，坚持自主创新C.推广上要慎重，做到确保安全D.管理上要严格，坚持依法监管12、下列说法错误的是（）A.因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同C.只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D.牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落13、图甲为培育转基因生物时选用的载体，图乙是含有目的基因的一段DNA序列，图中标注了相关限制酶的酶切位点。下列叙述错误的是（）

A.若通过PCR技术提取该目的基因，应该选用引物a和引物cB.构建表达载体时应选用BamHⅠ和HindⅡ这两种限制酶C.图乙中一个DNA分子在PCR仪中经过四轮复制得到所需目的基因的分子数为8个D.只利用含四环素的培养基就可以直接筛选出成功导入表达载体的受体细胞14、大肠杆菌能在基本培养基上生长；X射线照射后产生的代谢缺陷型大肠杆菌不能在基本培养基上生长，但可以在完全培养基上生长。利用夹层培养法可筛选代谢缺陷型大肠杆菌，具体的操作是：在培养皿底部倒一层基本培养基，冷凝后倒一层含经X射线处理过的菌液的基本培养基，冷凝后再倒一层基本培养基。培养一段时间后，对首次出现的菌落做好标记。然后再向皿内倒一层完全培养基，再培养一段时间后，会长出形态较小的新菌落。下列说法正确的是（）A.X射线诱发染色体变异进而导致大肠杆菌代谢缺陷B.首次出现的菌落做标记时应标记在皿盖上C.夹层培养法可避免细菌移动或菌落被完全培养基冲散D.形态较小的新菌落可能是代谢缺陷型大肠杆菌评卷人得分三、填空题(共9题，共18分)15、哺乳动物核移植可以分为______核移植（比较容易）和______核移植（比较难）。16、本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选。但是，这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有___________和___________发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的__________进行________的测定。17、DNA连接酶与DNA聚合酶作用的异同:

DNA聚合酶只能将______加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接_____的末端，形成磷酸二酯键。18、重组DNA或重组质粒导入受体细胞后，筛选______的依据是______。19、对于DNA的粗提取而言，就是利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在__________方面的差异，提取DNA，去除杂质。（人教P54）20、应用分析与比较的方法，对生殖性克隆与治疗性克隆进行列表阐述｡

生殖性克隆与治疗性克隆的比较。比较项目生殖性克隆治疗性克隆含义__________用到的技术__________目的__________21、第四步：_____22、首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了______，方法是采用______。23、有时还需进行______的鉴定。如转基因抗虫植物是否出现______。评卷人得分四、实验题(共2题，共10分)24、单克隆抗体技术在生物工程中有着广泛的应用；下图1是单克隆抗体制备流程图，下图2是我国科研人员为了准确筛选没有明显表型特征的某种微生物所采用的流程图，图3是某双特异性抗体作用示意图，双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表位相结合。

（1）据图2分析，科研人员利用目标微生物编码膜蛋白的基因序列，构建____________________，并导入用__________处理的大肠杆菌细胞中；获取大量膜蛋白。

（2）已知细胞合成DNA有“D途径”和“S途径”两条途径，其中“D途径”能被氨基嘌呤阻断。兔子的已免疫的淋巴细胞有上述两种途径，但一般不分裂增殖；兔子的骨髓瘤细胞中只有“D途径”，但能不断分裂增殖。据此，图1所示的__________（填“HAT培养基”或“多孔板”）中添加氨基嘌呤可以达到筛选目的，其原理是______________________________。

（3）将上述带有荧光的单克隆抗体与待分离微生物群体混合，目的是______________________________。

（4）与直接使用抗肿瘤药物相比，将抗肿瘤药物与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是________________________________________，体现的是双特异性单克隆抗体在__________方面的用途。25、【生物技术实践】

科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白；这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。

（1）分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的______________、大小及形状不同，在电场中的________不同而实现分离。

（2）可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供_________和_______________。

（3）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的_____________；确定该蛋白质的抗菌效果。

（4）细菌培养常用的接种方法有_______和___________。实验结束后，对使用过的培养基应进行_____________处理。评卷人得分五、综合题(共4题，共20分)26、德尔塔变异株是目前新冠肺炎传播的主要变异株；中国研究员团队最新发现针对德尔塔变异株有效的单克隆抗体，为治疗新冠带来新希望。如图是单克隆抗体制备流程示意图，回答下列问题：

（1）上述实验前必须给小鼠注射减毒或灭活的新冠病毒抗原，注射抗原的目的是_____

（2）骨髓瘤细胞与某些淋巴细胞融合，融合的方法除了电激外，还可以用_______。细胞融合完成后，融合体系中有__________种杂交细胞。

（3）单克隆抗体制备经过了两次筛选。利用HAT培养基进行筛选①，能在该培养基上正常生长的细胞的特点是_________________。因为同一种抗原可能激活_____细胞，还需经过筛选②才能获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，筛选所依据的基本原理是__________________。

（4）与普通抗体相比较，单克隆抗体最主要的优点在于它的__________。目前，单克隆抗体的主要用途有_______________(至少举出两例)，该技术也为新冠肺炎的治疗提供了思路。27、如图表示利用胚胎干细胞(ES细胞)所作的一系列研究；请据图分析回答：

（1）图示中的胚胎干细胞(ES细胞)可以从____________或____________中分离获取。

（2）过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上，并加入动物血清、抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的________，加入抗生素是为了_________。该过程对于研究细胞分化和细胞凋亡的机理具有重要意义。

（3）过程Ⅱ将带有遗传标记的ES细胞注入早期胚胎的囊胚腔，通过组织化学染色，用于研究动物体器官形成的时间、发育过程以及影响因素，这项研究利用了胚胎干细胞具有________________的特点。在哺乳动物早期发育过程中，囊胚的后一个阶段是________。

（4）过程Ⅲ是培育转基因小鼠，将获得的目的基因导入胚胎干细胞之前需构建基因表达载体，基因表达载体中被RNA聚合酶识别结合的部位是_______。将构建好的表达载体导入胚胎干细胞最常用的方法是______________。28、某科研小组将抗虫基因（图甲）与农杆菌Ti质粒（图乙）重组，PstI、SmaI、AluI表示限制酶切割位点；AmpR为氨苄青霉素抗性基因；tet为四环素抗性基因。利用人工破损处理的水稻幼苗细胞，借助农杆菌转化法获得抗虫水稻品种，农杆菌侵染植物细胞如图丙所示。

请回答下列问题：

(1)据图分析，构建基因表达载体时，最佳方案是使用______分别切割目的基因和Ti质粒，原因是______；再用DNA连接酶连接。

(2)经过基因表达载体构建形成的重组DNA分子，需要与______（填“有AmpR和tet”“有AmpR和无tet”“无AmpR和有tet”或“无AmpR和tet”）的农杆菌混合，进而使重组DNA进入农杆菌体内，其原因是__________________________。

(3)图丙中，植物受损信号传导到农杆菌细胞内激活Ti质粒上的Vir区多个基因表达，其表达的蛋白质功能有______（至少写出两种）。

(4)将导入目的基因的水稻细胞经过______技术培养成幼苗，该过程利用的原理是______，获得的植株还需要进行______才能鉴定转基因水稻是否培育成功。29、水蛭是我国的传统中药材；主要药理成分水蛭素为水蛭蛋白中重要成分之一，具有良好的抗凝血作用。拟通过蛋白质工程改造水蛭素结构，提高其抗凝血活性。回答下列问题:

(1)蛋白质工程流程如图所示，物质a是_______，物质b是_______。

(2)蛋白质工程是基因工程的延伸，基因工程中获取目的基因的常用方法有________、_________和___________。

(3)将提取的水蛭蛋白经甲、乙两种蛋白酶水解后，分析水解产物中的肽含量及其抗凝血活性，结果如图所示。推测两种处理后酶解产物的抗凝血活性差异主要与肽的_____(填“种类”或“含量”)有关。

参考答案一、选择题(共7题，共14分)1、B【分析】【分析】

根据题意和图示分析可知：图示是利用酵母菌和醋酸菌制作果酒和果醋的装置示意图；其中培养基入口能补充营养物质；气体入口能通入气体；气体出口能排出发酵过程中产生的气体。果酒发酵为无氧环境，醋酸发酵为有氧环境。

【详解】

A；改变通入气体种类如通入氧气或氮气；可以研究有氧呼吸和无氧呼吸对发酵的影响，A正确；

B；果酒发酵中酵母菌进行厌氧呼吸会产生酒精和二氧化碳；故应关闭入口，打开出口，B错误；

C；由于温度能影响微生物酶的活性；所以果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关，C正确；

D；由于气体入口的导管长；能伸到培养液中，而气体出口的导管短，没有伸到培养液中，所以气体入口与气体出口不可以交换使用，D正确。

故选B。2、C【分析】【分析】

由题图信息分析可知；通过过程①获得菌悬液，此过程中的淤泥不需要灭菌操作，过程②可以使分解X的细菌大量繁殖（选择培养），过程③通过稀释涂布获得分解X物质的单菌落，过程④再次对各种单菌落进行筛选，经过过程⑤多次筛选后获得高效降解X的菌体。

【详解】

A；甲和乙的培养基均需采用高压蒸汽灭菌；乙与甲不同的是Y，乙的培养基上有菌落生长，说明是固体培养基，因此Y是凝固剂琼脂，A正确；

B、利用稀释涂布平板法对细菌进行计数，要保证每个平板上长出的菌落数为200个，假设稀释倍数为a，在每个平板上涂布100μL（0.1ml）稀释后的菌液，则有200×a÷0.1=2×107，则稀释倍数a=104；B正确；

C；③过程采用的是稀释涂布平板法；其接种工具为涂布器，C错误；

D；⑤过程中若S的浓度超过某一浓度时；会导致细菌细胞由于渗透作用失水过多，会抑制菌株的生长，使得菌株对S的降解量可能会下降，D正确。

故选C。3、B【分析】【分析】

基因工程技术的基本步骤。

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取；利用PCR技术扩增和人工合成；

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤；基因表达载体包括目的基因；启动子、终止子和标记基因等；

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细疤不同；导入的方法也不一样。①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法；基因枪法和花粉筥通道法；②将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；③将目的基因导入生物细胞的方法是感受态细胞法；

（4）目的基因的检测与签定：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译出蛋白质--抗原-抗体杂交技术；④个体水平上的鉴定：抗虫签定；抗病签定、活性签定等。

【详解】

A；提高基因表达水平“是指设法使牛的乳腺细胞中的人白蛋白基因合成出更多的蛋白质；A错误；

B；基因工程可定向改造生物的性状；即基因工程技术导致定向变异，B正确；

C；转基因牛细胞中都含有人白蛋白基因；人们只在转基因牛的乳汁中才能获取人白蛋白，是因为人白蛋白基因只在转基因牛的乳腺细胞中表达，C错误；

D；转基因动物是指以实验方法导入外源基因；在染色体组内稳定整合并遗传给后代的一类动物，D错误。

故选B。

【点睛】4、B【分析】【分析】

1；转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。

2；中美联合声明在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器；并反对生物武器及其技术和设备的扩散。

【详解】

A；为了加强对农业转基因生物的标识管理；保护消费者的知情权，我国对农业转基因生物实行了标识制度，A正确；

B；转基因食品上只标明原料来自转基因生物；并未标明其危害，B错误；

C；为了保障现代生物技术的安全性；需要开展风险评估、预警跟踪和风险管理等措施，C正确；

D；对于转基因技术；我们应该趋利避害，理性看待，D正确。

故选B。5、A【分析】【分析】

1；传统的发酵技术制葡萄酒的菌种来自葡萄皮表面的野生型酵母菌。

2；参与果醋制作的微生物是醋酸菌；其新陈代谢类型是异养需氧型；泡菜制作的菌种为乳酸菌，代谢类型为异养厌氧型。

【详解】

A；用传统的发酵技术制葡萄酒时；菌种是来自葡萄皮表面的野生型酵母菌，不需要添加酵母菌菌种，A错误；

B；由于用作果醋制作的醋酸菌是好氧菌；因此制作果醋时，必须向发酵装置不断地补充无菌空气，以保证醋酸菌的生长，B正确；

C；在腐乳的制作中；加盐腌制的目的是析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，并可以抑制杂菌的生长，C正确；

D；若腌制的酸菜不酸且发酵液表面出现了一层菌膜；菌膜是由产膜酵母产生的，最可能原因是发酵瓶密封不严导致漏气造成的，D正确。

故选A。6、D【分析】【分析】

据表分析：该培养基中加有伊红美蓝；可用于鉴别大肠杆菌，同时加的青霉素还使该培养基具有选择作用。培养微生物的培养基的营养成分主要有碳源；氮源、水和无机盐，有的还会有生长因子等。

【详解】

A；牛肉膏可为培养的微生物提供氮源；根据分析可知，此培养基可用于鉴定大肠杆菌，由于牛肉膏中的具体成分不确定，所以属于天然培养基，另外其中的青霉素还使该培养基具有选择作用，A错误；

B；抗青霉素的抗性基因一般位于大肠杆菌的质粒上；B错误；

C；此培养基只能用来检测自来水中大肠杆菌含量是否符合饮用水标准；不能检测其它细菌含量，C错误；

D；大肠杆菌常作为基因工程的工程菌；此培养基含有青霉素，能筛选含有青霉素抗性基因的生物，可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中，D正确。

故选D。7、D【分析】【分析】

灭菌的方法有湿热灭菌（高压蒸汽灭菌法）；干热灭菌和灼烧灭菌。

培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求；配制出供其生长繁殖的营养基质。

【详解】

A；由题意可知；实验是为了探究洗手的重要性，“将手指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的“接种”，A正确；

B；为判断培养基是否被污染；可增设一组未接种的培养基，若未接种的培养基上没有菌落长出，则培养基没有被污染，B正确；

C；不同微生物形成的菌落的大小、颜色、形状不同；故可根据肉眼观察到的菌落特征判断培养基上的菌体类型，C正确；

D；虽然实验者在“七步洗手法”后手上微生物较少；但进行无菌操作前依然要进行消毒，D错误。

故选D。二、多选题(共7题，共14分)8、B:C【分析】【分析】

胚胎发育过程：（1）卵裂期：细胞进行有丝分裂；数量增加，胚胎总体积不增加；（2）桑椹胚：32个细胞左右的胚胎；（3）囊胚：细胞开始分化，其中个体较大的细胞叫内细胞团将来发育成胎儿的各种组织；而滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘；胚胎内部逐渐出现囊胚腔；（4）原肠胚：内细胞团表层形成外胚层，下方细胞形成内胚层，由内胚层包围的囊腔叫原肠腔。

【详解】

A；由桑椹胚发育到囊胚进行的是有丝分裂；形成的每个细胞内DNA总量不变，A错误；

B；囊胚期细胞出现了细胞分化；但细胞分化的实质是基因的选择性表达，因此其遗传物质未发生改变，B正确；

C；囊胚期内细胞团和滋养层细胞的差异不是DNA复制水平上的差异；而是转录水平上的差异，即基因的选择性表达，C正确；

D；受精卵在输卵管中形成；后在子宫中发育，故胚胎发育的早期不可能在卵巢，D错误。

故选BC。9、A:B:D【分析】【分析】

生物武器包括致病菌类；病毒类和生化毒剂类等；例如，天花病毒、波特淋菌、霍乱弧菌和炭疽杆菌，都可以用来制造生物武器。生物武器的致病能力强、攻击范围广。它可以直接或者通过食物、生活必需品和带菌昆虫等散布，经由呼吸道、消化道和皮肤等侵人人、畜体内，造成大规模伤亡，也能大量损害植物。

【详解】

生物武器的种类包括致病菌类；病毒类、生化毒剂类；而抗生素不属于生物武器，C错误，A、B、D正确。

故选ABD。10、C:D【分析】【分析】

1；转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应、过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）。

2；对待转基因技术的利弊；正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。

【详解】

A；可以通过生物合成法、全化学合成法、半化学合成法来产生抗生素；其中生物合成法中可以通过工程菌制造法来产生，A正确；

B；克隆技术是可以克隆器官的；但是不可以人体克隆，禁止生殖性克隆，B正确；

C；中国声明：在任何情况下；不发展、不生产、不储存生物武器，并反对生物武器及其技术和设备的扩散，C错误；

D；基因编辑技术可用于疾病预防领域研究；但不能用于编辑婴儿，D错误。

故选CD。11、B:C:D【分析】【分析】

转基因生物的安全性问题：食物安全（滞后效应；过敏源、营养成分改变）、生物安全（对生物多样性的影响）、环境安全（对生态系统稳定性的影响）．对待转基因技术的利弊；正确的做法应该是趋利避害，不能因噎废食。

【详解】

我国对转基因技术的方针是一贯的；明确的；不会随着国家的政治、经济、科学发展水平的提升不断变化的，就是研究上要大胆，坚持自主创新；推广上要慎重，做到确保安全；管理上要严格，坚持依法监管，A错误，BCD正确。

故选BCD。12、B:C【分析】【分析】

1；从土壤中筛选目的微生物的流程一般为：土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定。当样品的稀释庋足够高时；培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。

2、统计菌落数目的方法：（1）显微镜直接计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数；③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法）：①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b；为了保证结果准确；一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

【详解】

AB；样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目；土壤中各类微生物数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离，A正确；B错误；

C；在同一稀释度下只要得到两个或两个以上的菌落数目在30～300的平板；就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，C错误；

D；验证选择培养基是否具有选择作用；需设立牛肉膏蛋白胨固体培养基作为对照，若后者的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用，D正确。

故选BC。

【点睛】13、B:D【分析】【分析】

分析题图：构建表达载体时；不能选用限制酶BamHⅠ，否则会导致两种抗性基因都被破坏，因此应该选择Bc1I和HindⅢ这两种限制酶，根据引物的延伸方向，所用的引物为图乙中引物a和引物c。

【详解】

A；PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合；根据引物的延伸方向，所用的引物为图乙中引物a和引物c，A正确；

B；根据图甲可知；BamHⅠ会导致两种抗性基因都被破坏，同时为防止目的基因自身环化，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割，B错误；

C；图乙中一个DNA分子在PCR仪中经过四轮复制可得到16个DNA片段；其中所需目的基因的分子数为8个，C正确；

D；由于选择BclI和HindⅢ这两种限制酶；破坏了氨苄青霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，因此应该先用含四环素的培养基筛选出含有基因表达载体和普通质粒的大肠杆菌，再用含氨苄青霉素的培养基筛选含重组质粒的大肠杆菌，培养基加氨苄青霉素含普通质粒的大肠杆菌能生存，而含重组质粒的不能生存，从而筛选出成功导入表达载体的受体细胞，D错误。

故选BD。14、C:D【分析】【分析】

微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板；接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养基表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】

A；大肠杆菌是原核生物；没有染色体，A错误；

B；首次出现的菌落做标记时应标记在皿底上；B错误；

C；夹层培养法不需要对大肠杆菌进行再次接种；可避免细菌移动或菌落被完全培养基冲散，C正确；

D；由于代谢缺陷型大肠杆菌不能在基本培养基上生长；所以形态较小的新菌落可能是代谢缺陷型大肠杆菌，D正确。

故选CD。三、填空题(共9题，共18分)15、略

【解析】①.胚胎细胞②.体细胞16、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】液体发酵固体发酵葡萄糖定量17、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】单个核苷酸两个DNA片段18、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】含有基因表达载体受体细胞标记基因是否表达。19、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】物理和化学性20、略

【分析】【详解】

生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎；并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术，其目的是用于生育，获得人的复制品；治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术，其目的是用于医学研究和疾病的治疗。

据概念可知，实现生殖性克隆和治疗性克隆都会用到的技术有体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等；治疗性克隆在获取胚胎干细胞后，根据治疗目的诱导干细胞分化形成各种组织和器官，供患者移植用，故治疗性克隆还会应用到的技术为干细胞培养技术。【解析】生殖性克隆指利用克隆技术获得胚胎，并将胚胎孕育成为人类个体的克隆性技术治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定细胞或组织等，用于治疗性移植的克隆性技术体细胞核移植技术、动物细胞培养技术、早期胚胎培养技术、胚胎移植技术等体细胞核移植技术，早期胚胎培养技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术、干细胞培养技术等用于生育，获得人的复制品用于医学研究和疾病的治疗21、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】目的基因的检测和鉴定22、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】目的基因DNA分子杂交技术。23、略

【分析】【分析】

【详解】

略【解析】个体生物学水平抗虫性状。四、实验题(共2题，共10分)24、略

【分析】【分析】

单克隆抗体制备过程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应；之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（1）

据图分析，科研人员利用基因工程将目标微生物编码膜蛋白的基因序列，构建基因表达载体，并导入用CaCl2处理的大肠杆菌细胞中；使目的基因增殖并表达可获取大量膜蛋白。

（2）

杂交瘤细胞由淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成；其合成DNA有“D途径”和“S途径”两条途径。“HAT培养基”有筛选作用，在添加了氨基喋吟的HAT培养基中，杂交瘤细胞“D途径”虽然被氨基嘌呤阻断，但可通过“S途径”合成DNA，不断分裂增殖；而淋巴细胞和淋巴细胞自身融合细胞因缺乏在体外培养液中增殖的能力，而不能在HAT培养基中生长；骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合细胞在HAT培养基中因DNA合成途径被氨基嘌呤阻断而不能进行DNA复制，也不生长。

（3）

带有荧光的单克隆抗体与待分离微生物群体混合；可起到标记目标微生物的作用。

（4）

双特异性单克隆抗体借助单克隆抗体的导向作用；能将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，这样既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。体现的是双特异性单克隆抗体在治疗疾病方面起到运载药物的用途。

【点睛】

本题考查单克隆抗体的制备过程和动物细胞的培养，意在考查学生对所学知识的理解与掌握程度，培养了学生分析图示、获取信息、解决问题的综合应用的能力。【解析】（1）基因的表达载体Ca2+或CaCl2

（2）HAT培养基淋巴细胞和淋巴细胞自身融合细胞因缺乏在体外培养液中增殖的能力；故不能在HAT培养基中生长；骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合细胞在HAT培养基中因DNA合成途径被氨基嘌呤阻断而不能进行DNA复制，而不生长。

（3）标记目标微生物。

（4）双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到肿瘤细胞所在位置，在原位杀死癌细胞治疗疾病（运载药物）25、略

【分析】【详解】

（1）电泳法分离蛋白质；是根据蛋白质分子的电荷；大小及形状不同，在电场中的迁移速度不同而实现分离。

（2）牛肉膏和蛋白胨中蛋白质较多；可作为碳源和氮源。

（3）加入抗菌蛋白的培养基中；金黄色葡萄球菌应该不能生长或生长很少，未加入抗菌蛋白的培养基中金黄色葡萄球菌应该能生长，菌落较多。

（4）平板划线法、稀释涂布平板法都能使接种的菌种在固体培养上充分分散，对使用过的培养基应进行灭菌处理，是为了防止细菌扩散污染。【解析】①.电荷（带电情况）②.迁移速度③.碳源④.氮源⑤.数量⑥.平板划线法⑦.稀释涂布平板法（稀释混合平板法）⑧.灭菌五、综合题(共4题，共20分)26、略

【分析】【分析】

单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原；从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。

（1）

注射抗原的目的是诱导小鼠产生能够分泌抗新冠病毒抗体的B淋巴细胞；然后用于制作杂交瘤细胞。

（2）

骨髓瘤细胞与某些淋巴细胞融合；融合的方法除了电激外，还可以用聚乙二醇（PEG）或灭活病毒。融合体系中有3种杂交细胞，为骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞细胞杂交；淋巴细胞与淋巴细胞融合，以及所需的骨髓瘤细胞与淋巴细胞融合。

（3）

获得能分泌所需单克隆抗体的杂交瘤细胞至少需要两次筛选；第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。在HAT培养基上存活的细胞为杂交瘤细胞，特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。同一种抗原可能激活多种B细胞，还需经过两次筛选，才能获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，筛选所依据的基本原理是抗原与抗体的反应具有特异性。

（4）

单克隆抗体最主要的优点在于它的特异性强；灵敏度高，可大量制备。因为单克隆抗体的特异性强，主要用途有作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物。

【点睛】

单克隆抗体的制备是常见的考点也是难点，生产上应用也非常多，要在理解其原理的基础上熟悉相应的制备步骤。【解析】（1）诱导小鼠产生能够分泌抗新冠病毒抗体的B淋巴细胞。

（2）聚乙二醇（PEG）或灭活病毒3

（3）既能迅速大量繁殖；又能产生专一抗体多种B抗原与抗体的反应具有特异性。

（4）特异性强，灵敏度高，可大量制备作为诊断试剂、用于治疗疾病和运载药物27、略

【分析】【分析】

1；分析图解：过程Ⅰ中ES细胞饲养层细胞及其他物质条件下增殖过程；过程Ⅱ中胚胎干细胞（ES细胞）培养得到的早期胚胎进行组织染色；得到不同颜色的组织器官；过程Ⅲ将获得的目的基因导入胚胎干细胞之前需构建基因表达载体，导入受体细胞后培养转基因小鼠；过程IV是给免疫缺陷的小鼠注射ES细胞，得到畸胎瘤。

2；图示过程中；包含的生物技术有动物细胞培养、基因工程、早期胚胎培养、胚胎移植等。

3；胚胎干细胞：（1）哺乳动物的胚胎干细胞简称ES或EK细胞；来源于早期胚胎或从原始性腺中分离出来；（2）具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞；另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。

【详解】

（1）图中的胚胎干细胞（ES细胞）可以从早期胚胎和原始性腺中分离获取；在功能上具有发育的全能性。

（2）过程I将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上；并加入动物血清；抗生素等物质，维持细胞不分化的状态。在此过程中，饲养层提供干细胞增殖所需的营养物质，加入抗生素是为了防止杂菌污染。

（3）胚胎干细胞在功能上；具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞，故ES细胞能培养成小鼠个体，说明胚胎干细胞具有发育的全能性。在哺乳动物胚胎发育