DB11-T 677-2009 动物防疫抽样规范

ICS65.020.30

B41

备案号：26850-2010DB

北京市地方标准

DB11/T677—2009

动物防疫抽样规范

Samplingspecificationsforanimalepidemicprevention

2009-12-12发布2010-04-01实施

北京市质量技术监督局发布

DB11/T677—2009

动物防疫抽样规范

1范围

本标准规定了动物防疫抽样的一般要求，抽样前准备，抽样动物种类，抽样范围，抽样数量，抽样，

抽样的记录及样本的保存运输。

本标准适用于动物疫病实验室血清学监测、分子生物学监测、病原学监测等抽样工作。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1

无菌操作asepticoperation

用于防止微生物进入动物体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。

2.2

动物防疫抽样Samplingforanimalepidemicprevention

为了预防和控制动物疫病，按照一定的规则采集动物体液、脏器等样本的行为。

2.3

份portion

动物个体中1个组织的1个样本的数量单位。

3一般要求

3.1根据国家和北京市动物防疫的抽样计划，设定常规监测、疫点、疫区、受威胁区疫病监测抽样种

类、数量、范围。

3.2抽样人员应是兽医技术人员，能够正确掌握抽样方法，熟练使用采样器具。

3.3根据不同的疫病或检验目的，采其相应的组织脏器、内容物、分泌物、排泄物或其他材料。在无

法估计病因时，要选取有代表性的样品，进行多点、全面的采集。

3.4凡发现动物有急性死亡，在排除炭疽病情况下，方可剖检采样。

3.5防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和病害尸体的处理。

3.6采集一份样本，使用一套器械与容器，使用过的用具应先消毒后清洗。

3.7一次性消毒用品不得超期使用。

4抽样前准备

4.1准备口罩、帽子、防护眼镜、防护服、手套、胶靴等人员防护用品。

4.2准备灭菌处理的解剖刀、镊子等抽样用器具。

4.3准备消毒液及样本的记录、保存、运输物品。

5抽样动物种类

5.1家禽。

5.2家畜（马属动物、猪、牛、羊）。

5.3宠物（犬、猫）。

5.4野生动物。

1

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6抽样范围

6.1养殖区域包括规模化种畜禽场、商品畜禽场、养殖小区、养殖户等。

6.2流通区域包括从事动物及动物产品交易活动的批发市场、零售市场、宠物交易市场及动物隔离场

点等。

6.3其它区域包括畜禽屠宰场、公园、动物园、野禽栖息地等。

7抽样数量

7.1常规监测抽样数量

常规监测抽样数量应符合表1的规定。

表1常规监测抽样数量

存栏数

＞50001000～5000500～1000100～500＜100

种类

家禽≥30份/场≥20份/场≥10份/场≥10份/场≥10份/场

家畜≥30份/场≥30份/场≥30份/场≥20份/场≥10份/场

宠物（犬、猫）≥25份/地区、20份/场

野生动物≥25份/地区、10份/动物园、10份/野禽栖息地

7.2疫点监测抽样数量

疫点监测抽样数量应符合表2的规定。

表2疫点监测抽样数量

存栏数

≥10000＜10000

种类

家禽≥100份/场≥50份/场

家畜马属动物100%；猪、牛、羊≥200份/场

宠物（犬、猫）≥20份/场

野生动物≥20份/地区

7.3疫区监测抽样数量

疫区监测抽样数量应符合表3的规定。

表3疫区监测抽样数量

种类家禽家畜宠物（犬、猫）野生动物

猪、牛、羊≥200份；

数量≥300份≥50份≥30份

马属动物100%

7.4受威胁区监测抽样数量

受威胁区监测抽样数量应符合表4的规定。

表4受威胁区监测抽样数量

种类家禽家畜宠物（犬、猫）野生动物

猪、牛、羊≥200份；

数量≥300份≥50份≥30份

马属动物100%

8抽样

8.1血液

8.1.1抽样部位

翅静脉、颈静脉、尾静脉、心脏、耳尖或耳壳外侧静脉。

8.1.2抽样方法

2

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8.1.2.1抽血部位的皮肤先剃毛、清洁，再用75%的酒精消毒。

8.1.2.2用灭菌真空采血器、注射器或针头穿刺抽取。

8.1.3处理方法

8.1.3.1全血

将全血注入装有抗凝剂的试管中，轻轻摇动，充分混合。可选用以下三种方法：

1）10mL全血加入0.1mL～0.2mL的1%肝素溶液。

2）1份全血加入2份阿氏液，阿氏液配制方法见附录A.1。

3）4份全血加入1份3.8%枸橼酸钠。

8.1.3.2血清

方法一：全血凝固后，在室温下静置至自然析出。

方法二：全血凝固后，1500r/min～2500r/min，离心10min，吸取上清液。

8.1.3.3血浆

容器内先加抗凝剂，血液与抗凝剂充分混合，然后静置，待细胞下沉后，吸取上清液。

8.2一般脏器

8.2.1抽样部位

8.2.1.1心脏。

8.2.1.2肝脏。

8.2.1.3脾脏。

8.2.1.4肺脏。

8.2.1.5肾脏。

8.2.1.6胰脏。

8.2.1.7淋巴结。

8.2.2抽样方法

采集死亡动物的内脏样本，最迟不超过死亡后6h，按无菌操作方法采集相关脏器的部分组织或整个

脏器。

8.2.3处理方法

8.2.3.1用于细菌分离的组织，单独放在无菌容器内。

8.2.3.2用于病毒分离的组织，放在装有病毒保存缓冲液的容器内,病毒保存缓冲液的配制见附录

A.2。

8.2.3.3用于病理学检查的组织，放入装有10倍于样本体积的10%中性福尔马林溶液的容器内。

8.3脑组织

8.3.1抽样部位

8.3.1.1大脑。

8.3.1.2小脑。

8.3.1.3脑干。

8.3.1.4延脑。

8.3.2抽样方法

按无菌操作方法采集部分脑组织或全脑。

8.3.3处理方法

方法一：全脑用浸过消毒液的纱布包裹后，浸入含30%甘油盐水溶液中,30%甘油盐水溶液配制见附

录A.3。

方法二：将组织样本-20℃～-70℃冷冻。

方法三：将组织样本放入装有10倍于样本体积的10%中性福尔马林溶液的容器内。

8.4食道/咽部刮取物（O-P液）

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8.4.1抽样部位

8.4.1.1食道。

8.4.1.2咽部。

8.4.2抽样方法

8.4.2.1被检动物在抽样前禁食（可饮少量水）12h，探杯用0.2%柠檬酸浸泡5min，再用接近动物体

温的清水冲洗探杯后使用，每采完一份样本，探杯要进行消毒并充分清洗。

8.4.2.2动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10cm～15cm处，轻轻来回移动2～3次，然

后将探杯拉出，采集8mL～10mLO-P液。

8.4.3处理方法

倒入含有等量Earle细胞培养液的灭菌广口瓶中，Earle细胞培养液配制见附录A.4。

8.5呼吸道分泌物

8.5.1抽样部位

8.5.1.1鼻腔。

8.5.1.2咽喉。

8.5.1.3气管。

8.5.2抽样方法

用拭子采集粘膜分泌物，放入装有2mL保存液的试管。

8.5.3处理方法

方法一：将拭子浸入pH7.2～7.4的灭菌肉汤保存液中，灭菌肉汤配制见附录A.5。

方法二：将拭子浸入0.04mol/L磷酸盐缓冲液中，磷酸盐缓冲液配制见附录A.6。

方法三：接种组织培养用的拭子浸入0.5%乳蛋白水解物的汉克氏（Hanks）营养液中，乳蛋白水解

物的汉克氏液配制见附录A.7。

8.6眼睛

8.6.1抽样部位

8.6.1.1眼结膜表面。

8.6.1.2眼病变组织。

8.6.2抽样方法

8.6.2.1眼结膜表面用拭子轻轻擦拭后，放入灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中。

8.6.2.2取病变组织碎屑，置载玻片上，制成玻璃触片。

8.7皮肤及粘膜

抽样方法：

1)用于一般检测的样本，用灭菌剪子和镊子直接采自病变部位。加适量抗菌素于30%甘油盐水缓

冲液中，加盖密封。

2)用于检测核酸的样本，不得使用酒精、碘酒等消毒剂消毒。

8.8脊髓液

抽样方法：

1)抽样使用特制的专用消毒穿刺针。

2)颈椎穿刺点为环枢孔，垂直缓慢刺入蛛网膜下腔，立即拔出针芯，脑脊髓液自动流出，取适量

液体，盛入消毒容器内。

3)腰椎穿刺部位为腰荐孔，垂直缓慢刺入蛛网膜下腔，立即拔出针芯，脑脊髓液自动流出，盛入

消毒容器内。腰椎穿刺一次抽取量15mL～30mL。

8.9乳汁

8.9.1抽样部位

乳房。

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8.9.2抽样方法

用消毒药水洗净取乳者的手和动物乳房，弃去最初所挤的3mL～4mL乳汁，采集10mL乳汁于灭菌

试管中。

8.9.3处理方法

进行血清学检验的乳汁不应冻结、加热或强烈震动。

8.10胃内容物

8.10.1抽样部位

动物胃内。

8.10.2抽样方法

8.10.2.1将多孔胃管送入单胃胃内，其外露端接在吸引器的负压瓶上，加负压后，胃液即可自动流入

瓶内。

8.10.2.2在反刍动物反刍时，在食团从食道逆入口腔时，立即开口拉住舌头，另一只手深入口腔取出

少量的瘤胃内容物。

8.10.2.3对死亡的动物直接剖检采集。

8.10.3处理方法

取出的胃内容物应即放在0℃～4℃中保存。

8.11肠内容物

8.11.1抽样部位

选择病变最明显的部分。

8.11.2抽样方法

8.11.2.1用灭菌生理盐水将肠管外表轻轻冲洗三遍，烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取

内容物。

8.11.2.2将肠管双结扎，从两端剪断，单独放在已消毒的容器内。

8.11.3处理方法。

将肠内容物放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中。

8.12粪便

8.12.1抽样部位

肛门。

8.12.2抽样方法

用拭子小心地插到直肠粘膜表面转一圈采集。

8.12.3处理方法

将粪便拭子放入盛有灭菌的30%甘油盐水缓冲保存液中。

8.13胎儿

抽样方法：将流产后的整个胎儿，装入不透水的塑料袋，放入有冰袋的冷藏箱。

8.14动物尸体

抽样方法：将病死动物尸体装入两层不漏水的塑料袋内，放入有冰袋的冷藏箱。

8.15精液

8.15.1抽样方法

用消毒药水洗净阴茎，用假阴道挤压阴茎或人工刺激的方法采取精液。

8.15.2处理方法

8.15.2.1将集精杯从假阴道取下，装入灭菌容器中。

8.15.2.2样本中不得加入防腐剂。

8.16生殖道分泌物

8.16.1抽样方法

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8.16.1.1扩开阴道后，用缠有灭菌纱布条的长钳子采取阴道粘液。

8.16.1.2把龟头牵引到包皮外面，用清水洗净后以纱布缠好固定，将缠有纱布条（用灭菌生理盐水浸

湿）的尿道敷料钳或尿道探子插入尿道轻轻转动采尿道黏液。

8.16.1.3用宫颈或尿道拭子，蘸取阴道或包皮冲洗液。

8.16.2处理方法

8.16.2.1粘液、拭子放于灭菌试管中。

8.16.2.2制成玻璃触片。

8.17环境病原微生物

8.17.1抽样地点

抽取垫草、饲料通道、下水道、遗弃物、通风管、孵化厂、屠宰场有代表性样本。

8.17.2抽样方法

8.17.2.1空气样本

方法一：用空气采样器直接采集。

方法二：用平板沉降法，将琼脂平板置于各采样点，打开平皿盖，暴皿于规定时间后立即盖好盖采

集。

8.17.2.2水样本

方法一：手工采样，将水样瓶用铁架固定，塞住瓶口，待瓶沉入到一定深度时拉开瓶塞，让水样进

入。

方法二：用自动采样器在一定间隔时间中或连续采集样品，分别放入样品瓶或合并于一个样品瓶中

成为混合样。

8.17.2.3土壤样本

用灭菌工具先除去地表枯枝落叶，再铲除1cm左右表层土，以避免地面微生物与土样混杂，用烧灼

过的勺或铲取土样约200g～300g，装于灭菌容器内，混合后送检。

8.17.3处理方法

样本放入金属饭盒，送实验室置37℃培养。

9抽样的记录

9.1对所有样本统一编号，确保统一编号与原始编号相对应，每份样本上标注唯一标识，疑似人畜共

患病样品还应作特殊标记。

9.2记录应有一式二份的说明单，一份随样本送实验室，另一份留存备案。

9.3各类动物样本的记录，可按照附录表B.1～表B.3的格式填写。

10样本的保存运输

10.1样本送抵实验室的时间为：冬季不得超过24h，夏季不得超过4h～6h，采集后应立即放入4℃左

右的容器中冷藏。

10.2须冷冻或长期保存的样本，应置于-20℃以下冷冻，但要尽量避免反复冻融。

10.3做病毒中和试验的血清应避免使用化学防腐剂。

10.4样本运送应符合生物安全要求，应遵循世界卫生组织对传染性物质和诊断性标本的安全运送指

南。

10.5应避免样本泄漏。样本密封后置于保温箱中运送，并在保温箱中放置填充物固定样本，防止容器

倾倒。

10.6制成的涂片、触片、玻片两端用细木条分隔开，层层叠加，底层和最上一片涂面向内，在保证不

被压碎的条件下运送。

10.7在样品包装箱上贴标签并做“上、下”标记箭头。

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附录A

（规范性附录）

抽样常用溶液的配制

A.1阿（Alserer）氏液

葡萄糖（C6H12O6·2H2O）2.05g

柠檬酸钠（Na3C6H5O7·2H2O）0.8g

氯化钠（NaCl）0.42g

蒸镏水（或无离子水）加至100.0mL。

溶解后，以10%柠檬酸调至pH为6.1分装后，70KPa10min灭菌，冷却后4℃保存，用时1份血液加

2份阿氏液。

A.2病毒保存缓冲液（0.01mol/L、PH7.2磷酸盐缓冲盐水）的配制

A液

0.2mol/L磷酸二氢钠水溶液

磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)27.6g，溶于蒸馏水中，最后稀释至1000mL。

B液

0.2mol/L磷酸氢二钠水溶液

磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O)53.6g，（或Na2HPO4·12H2O71.6g或Na2HPO4·2H2O35.6g）加蒸馏

水溶解，最后稀释至1000mL。

0.2mol/LA液14mL

0.2mol/LB液36mL

加氯化钠(NaCl)8.5g

用蒸馏水稀释至1000mL

A.330%甘油盐水缓冲液

甘油（CH2OHCHOHCH2OH）30.0mL

氯化钠（NaCl）4.2g

磷酸二氢钾（KH2PO4）1.0g

磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）3.lg

0.02%酚红（C19H14O5S）1.5mL

蒸馏水加至100mL

加热溶化，校正pH值为7.6，100KPa15min灭菌，4℃冰箱保存备用。

A.4Earle细胞培养液

甲液：

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氯化钠（NaCl）68.0g

氯化钾（KCl）4.0g

磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)1.4g

碳酸氢钠(NaHCO3)*22.0g

葡萄糖10.0g

双蒸水加至500mL

溶解后加氯仿1mL作为防腐剂，置0℃～4℃中保存备用。

*为便于调节pH和避免沉淀，碳酸氢钠可单独灭菌，使用前用以调整pH。

乙液：

氯化钙（CaCl2）2.0g

氯化镁（MgCl2·6H2O）1.7g

0.4%酚红液0.5mL

双蒸水加至500mL

溶解后加氯仿1mL作为防腐剂，置0℃～4℃中保存备用。

使用时按以下比例配成Earle细胞培养液

甲液：1份

乙液：1份

双蒸水18份

以70KPa10min灭菌，0℃～4℃中保存备用。用前以5.6%碳酸氢钠溶液调整pH为7.4～7.6。

A.5肉汤（broth）

牛肉膏3.5g

蛋白胨10.0g

氯化钠（NaCl）5.0g

充分混合后，加热溶解，校正pH为7.2～7.4，再用流通蒸气加热30min，用滤纸过滤，获黄色透明

液体，分装于试管或烧瓶中，以100KPa20min灭菌。保存于4℃冰箱中备用。

A.6磷酸盐缓冲液（0.04mol/L、pH7.4）

磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）12.22g

磷酸二氢钾（KH2PO4）0.77g

加双蒸水至1000.0mL，pH7.4～7.6

高压灭菌100KPa30min

A.7汉克氏（Hanks）液

甲液：

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溶液（1）

氯化钾（KCl）4.0g

氯化钠（NaCl）80.0g

硫酸镁（MgSO4·7H2O）1.0g

氯化镁（MgCl2·6H2O）1.0g

混合后加入双蒸水400mL

溶液（2）

氯化钙（CaCl2）1.4g溶于50mL双蒸水中

将上述（1）、（2）两种溶液混合后，加双蒸水至500mL，再加氯仿1mL作为防腐剂，放置0℃～4℃

中保存。

乙液：

磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）0.52g

磷酸二氢钾（KH2PO4）0.6g

葡萄糖（C6H12O6·2H2O）10.0g

0.4%酚红液0.5mL

将上述甲、乙二溶液混合后，加双蒸水至500mL，加氯仿1mL，置0℃～4℃中保存。

使用时按以下比例配成汉克氏液。

甲液：1份

乙液：1份

双蒸水18份

以100KPa10min灭菌

此溶液保存于0℃～4℃，可使用1个月。用前以5.6%碳酸氢钠液（70kPa10min灭菌）调整pH为

7.4～7.6。

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附录B

（规范性附录）

抽样记录表格

表B.1禽类抽样登记表

采样地点区县镇乡村街道小区存栏（只）

采样场名样品代次

联系人联系电话采样日期

□蛋鸡□肉鸡□肉鸭□蛋鸭□鹅

禽种类

□乌鸡□鸽□其它日龄

及日龄

血清份号

样品数量样品序号

粪或双拭子份号

采样场□规模种场□规模商品场□养殖小区□散养户□市场

监测种类□公园□野鸟栖息地□其它

疫苗

接种疫苗名称免疫时间，免疫次数疫苗接种类型批号

厂家

年月日次□型

年月日次□型

□型

年月日次

□型型

年月日次

年月日次

年月日次

年月日次

被采样场户负责人签字：采样人签字：区县站接样人签字：（公章）：

年月日年月日年月日

附：样本编号表

填表说明：1.样品代次指祖代、父母代、商品代；

2.规模化禽场指蛋禽存栏超1000只或肉禽存栏超2000只；

3.样本序号指采样管上所标示的号码。

4.疫苗接种类型填写单价、多价等型。

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表B.2畜类抽样登记表

采样地点区县镇乡村街道小区存栏（只）

采样场名样品代次

联系人联系电话采样日期

畜种类及日龄

□规模种场□规模商品场□养殖小区□散养户□屠宰场

□动物医院□犬场□其它日龄

血清份——号

淋巴份——号

涂片份——号

样品数量拭子份样品序号——号

OP液份——号

唾液份——号

其它份——号

接种疫苗名称免疫时间，免疫次数接种疫苗型疫苗厂家批号

□型

年月日次

□型

□型

年月日次

□型型

年月日次

年月日次

年月日次

被采样场户负责人签字：采样人签字：区县站接样人签字：（公章）：

年月日年月日年月日

附：样本编号表

填表说明：样品代次指祖代、父母代、商品代；规模化场指存栏超100头猪或100只羊或50头牛的场。

样本序号指采样管上所标示的号码。疫苗接种类型填写单价、多价等型。

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表B.3样本编号表

序号原始编号样本种类序号原始编号样本种类序号原始编号