种公猪鲜精生产技术规范-规范性审查稿

ICSFORMTEXT65.020.30FORMTEXTB43FORMTEXTDBFORMTEXT37DBFORMTEXT37/TFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXTFORMTEXT种公猪鲜精生产技术规范FORMTEXTBoarsfreshspermproductiontechnicalspecificationFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施FORMTEXT山东省质量技术监督局发布前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省畜牧总站、山东省种公猪站、济南市畜牧技术推广站。本标准主要起草人：牛志河、闫先峰、柴士名、李淑花、赵桂省、周希春、尹雪、王丹丹、邱淑霞。种公猪鲜精生产技术规范范围本标准规定了种公猪鲜精生产的精液采集、检查、稀释、分装、保存和方法。本标准适用于种公猪鲜精生产与保存。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB23238—2009种猪常温精液GB/T25172—2010猪常温精液生产与保存技术规范术语和定义下列术语和定义适用于本文件。种公猪breedingboar生产性能和体型外貌特征符合种用要求的用于配种或采精的公猪。台猪teaser引诱公猪产生性欲、以供其爬跨的同种动物或模型。采精semencollection用人工的方法体外获取种公猪精液的过程。采精频率frequencyofsemencollection种公猪每周采精的次数。每剂量中直线前进运动精子数prineachdose每剂精液中呈直线前进运动精子的总数。器械清洗与消毒新购置或使用后的玻璃器皿，用自来水浸泡。洗涤时，先在加有洗涤剂的温水中进行刷拭，然后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗，直至器皿光亮、无水滴附着为止。将洗净的玻璃器皿送入干燥箱，加热至160℃后再恒温60min，自然冷却后待用。器械应进行消毒。塑料量杯、塑料量筒、瓷漏斗、金属镊子、药匙、吸管滴头等用75%酒精棉球擦拭消毒，待酒精挥发尽后方能使用。载玻片和盖玻片，用后立即浸泡予水中，洗净后用柔软的布擦拭干净备用。包装用的塑料瓶、塑料袋用紫外线消毒30min后方可使用。稀释液配制天平称取药品时，盘内垫以称量纸，校零后方可称重。化学药品取用后，应立即将瓶口盖严，并妥善保存。所用试剂均为分析纯，用双重蒸馏水溶解。配方参见附录A（常见几种公猪精液稀释液配方）。商品稀释剂按说明书使用。不得使用过期或吸潮变色的稀释剂。自配稀释液配制后应及时加入抗生素，稀释液的PH值为6.4～7.2。使用前1h配制，配置后应及时贴上标签，标明品名、配置日期和时间、经手人。剩余稀释液应密封后置于冰箱中冷藏，时间不超过24h。采精公猪应来源于国家或省级种猪场，体型外貌和生产性能符合种用要求，三代系谱资料齐全，体质健康的种猪。采精室应建在精液处理室附近，应设置采精区和安全区。采精区设置台猪，地面防滑，并保持清洁、安静。采精前准备采精员应着洁净工作衣、帽，带一次性无毒塑料手套、穿长胶鞋。采精杯内应置无毒塑料袋并覆盖四层纱布或一层精液过滤纸。显微镜载物台恒温板、精液处理器皿和稀释液应预热至36℃～38℃。精子密度仪应提前1h预热。采精步骤剪去包皮部长毛，清洁体表，擦干水渍。挤净包皮积液，先用0.1%高锰酸钾溶液清洗腹部和包皮，再用温水清洗后擦干。手握法采精时，应一只手戴双层一次性无毒塑料手套，按摩公猪包皮部，待公猪爬跨台猪并伸出阴茎，脱去外层手套，握紧龟头，使其不能旋转，顺势将阴茎的“S”状弯曲延直。另一只手持采精杯，弃去最初射出的少量精液（约5mL），收集精液至射精完毕。假阴道法采精时，应向假阴道内注入45℃～50℃的温水，使其采精时保持在38℃～42℃。再用润滑剂将内胎由内到外涂均匀，后用双联球充气加压使内胎具备母猪阴道壁的功能，一端为入口，另一端装胶管漏斗与集精杯。采精时右手持假阴道，左手将阴茎导入入口端使其射精，收集精液至射精完毕。采精频率成年公猪：2～3次/周，青年公猪：1～2次/周。精液检查精液处理室精液处理室应设精液检查、稀释和分装3个区域，室温宜在20℃～25℃，避免阳光直射或紫外灯照射。配置仪器和用品参见附录B（精液处理室配置仪器和用品）。原精液品质原精液品质应符合附录C1(原精液品质)的规定。检测方法外观、气味目测、鼻嗅。采精量采用电子天平称量法计算采精量（1g相当于1mL）。精子活力取中层精液约25µL于载玻片上，加盖盖玻片后在37℃条件下用200倍～400倍显微镜检查，活力用百分率标示。每份精液取样两次，每个样观察三个视野，并观察不同液层内的精子运行状态，进行全面评定，计算平均值。精子密度按精子密度仪或可见光分光光度计的操作规程准确进行精液的密度测定。应定期用血细胞计数法校正。精子畸形率采用吉姆萨染色检测法，在400倍～600倍显微镜下观察左、右两个区观察不少于200个精子。也可采用相差显微镜直接观察。每月抽检一次。鲜精精液品质检测方法参见GB23238—2009种猪常温精液，精液产品质量见附录C2（鲜精精液产品质量）。记录填写公猪鲜精精液品质检测登记表，登记表见附录D（公猪鲜精精液品质检测登记表）。精液稀释精液采集后应尽快稀释，放置时间不宜超过15min。采用等温稀释。精液与稀释液温差不得超过±1℃（在33℃～37℃范围内），根据精液温度调节稀释液温度，不得反向操作。将稀释液沿杯壁缓慢加入到精液中，轻轻摇动或沿一个方向慢慢搅拌，混合均匀。高倍稀释时，应先2倍稀释，30s后再加入余下的稀释液。精液稀释后应静置5min再作精子活力检测，活力不低于70%进行分装。稀释后精液要求。每剂剂量地方猪种40mL～50mL，瘦肉型猪种80mL～100mL，精子活力≥70%以上，每剂含总精子数地方猪种≥15亿个，瘦肉型猪种≥35亿个。稀释液总量以体积V计，数值以mL表示，按式（1）计算： (SEQ标准自动公式\*ARABIC1)式中：V1——采精量mL；c——精子密度亿个/mL；m——精子活力%；s——每剂含总精子数，单位为亿个；V2——每剂精液量mL。精液分装采用袋装和瓶装。装精液用的袋、瓶应选用对精子无毒害作用且灭菌的一次性塑料制品。按不同品种的剂量要求，将精液分装至精液袋、瓶中，排出空气后密封。精液包装应标明产品名称、剂量、生产单位、生产日期、批号、品种或类型、耳号、有效期和贮存温度。精液保存分装后的精液应放置1h～2h温度缓慢降至17℃左右时，平放入16℃～18℃恒温箱内避光保存；也可用12～15层纱布（或干毛巾）包严直接放入16℃～18℃恒温箱内。保存的精液应每隔4h～8h摇动1次并记录，摇动时应轻缓均匀。稀释后的精液应在3d内用完，超过保质期的精液不应使用。每批精液应留样备查。同批号的精液在保质期内应抽样检查并记录，公猪常温精液保存登记表见附录E（公猪常温精液保存登记表）。附录A：常见几种公猪精液稀释液配方单位：g/L成分配方一配方二配方三配方四保存时间/d3355D-葡萄糖37.1560.0011.5011.50柠檬酸三钠6.003.7011.6511.65EDTA钠盐1.253.702.352.35碳酸氢钠1.251.201.751.75氯化钾0.75——0.75青霉素钠0.600.500.60—硫酸链霉素1.000.501.000.50聚乙烯醇(PVP，TypeII)——1.001.00三羧甲基氨基甲烷(Tris)——5.505.50柠檬酸——4.104.10半胱氨酸——0.070.07海藻糖——1.00林肯霉素——1.00附录B:精液处理室配置仪器和用品名称规格（技术参数）用途17℃生化培养箱50L～200L保存种猪常温精液（任选）电子台称3000g/1g，6000g/2g称量精液、稀释液电子天平200g/0.01g称量化学试剂（选用）显微镜40X～1600X检查活力、精子数和畸形率电加热板室温至50℃（可调），工作面温差：≤0.5℃载玻片、盖玻片恒温预热精子密度仪50mill/mL～1400mill/mL测定精子密度（任选）可见光分光光度计波长范围350nm～820nm，带宽＜±5nm测定精子密度（任选）酸度计测量范围0.0～14.0，精度±0.1测定精液、稀释液的pH精液保存箱17℃±1℃保存精液干燥箱室温＋5℃～250℃，波动度＜±2℃预热器皿和消毒器械恒温水浴锅双孔或四孔稀释液保温恒温磁力搅拌器0℃～99℃，容量＜500mL稀释液搅拌、加热双重蒸馏水器2000mL～2500mL制作双重蒸馏水血球计数板25X16测定精子密度计数器0～999精子计数微量移液器100µL～200µL精液取样或稀释微量移液器100µL～1000µL精液取样或稀释量筒（或量杯）500mL～2000mL量取液体（选用）三角瓶1000mL配制稀释液放水瓶5L盛放双重蒸馏水烧杯1000mL、2000mL精液稀释温度计100℃测量精液、稀释液温度自动分装机分装精液（选用）热封口机袋装精液封口分装架分装精液载玻片精子活力的测定盖玻片精子活力的测定精液袋、瓶分装及保存精液稀释粉配制精液稀释液擦镜纸擦拭显微镜镜头玻璃棒稀释液配制或精液稀释移液枪吸嘴精液取样过滤纸过滤精液附录B：精液处理室配置仪器和用品（续）名称规格（技术参数）用途润滑剂用于采精采精袋（杯）盛放原精一次性无毒塑料手套用于采精标签纸精液、稀释液标签附录C1：原精液品质检查项目指标外观乳白色或浅灰色，无脓性分泌物，无皮毛等异物气味略带腥味，无异味采精量（mL）≥100精子活力（%）≥75精子密度（亿个/mL）≥1精子畸形率（%）≤15附录C2：鲜精精液产品质量检查项目指标外观乳白色，无杂质，包装封口严密。剂量（mL/剂）地方猪种40～50，瘦肉型猪种80～100精子活力（%）≥60每剂量中直线前进运动精子数（亿个/剂）地方猪种≥10，瘦肉型猪种≥25精子畸形率（%）≤18有效期≥72h附录D：公猪鲜精精液品质检测登记表品种采精日期公猪号采精员采精量（mL）色泽气味PH值精子活力（%）精子密度(亿/ml)每剂量中