分子病理学原理和实践

分子病理学原理和实践PrinciplesandPracticeofMolecularPathologyThedevelopmentofmolecularandgeneticapproachestothediagnosisandclassificationofhumantumoursThedesignandvalidationofpredictivebiomarkersfortreatmentresponseanddiseaseprogressionThesusceptibilityofindividualsofdifferentgeneticconstitutiontodevelopcancer一、分子病理学诊断的定义开发分子和遗传学方法用于人类肿瘤诊断和分类设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性二、常用分子病理学诊断方法PCR聚合酶链反应FISH荧光原位杂交Microarray基因芯片PCR发明者获得诺贝尔化学奖三、PCR(结合DNA测序)技术在

分子病理诊断中的应用基因突变检查EGFRc-kitPDGFRAk-rasB-rafPIK3CAEGFR基因突变与肺癌的靶向治疗什么是EGFR基因及其突变？表皮生长因子受体erbB1HER1肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？西妥昔单抗（爱必妥）易瑞沙（吉非替尼）特罗凯（厄罗替尼）非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变耐药EGFR－突变检查及其临床意义易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要靶向药物EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，18，19，21外显子。19外显子约占45％，21外显子约占40％突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性EGFR突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标c-kit和PDGFRA突变检测在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义c-kit

基因第11、9、13和17外显子存在突变PDGFRA基因第12和18外显子存在突变大多数GIST（65－85％）的基因突变发生在c-kit的第11或9外显子突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性髓性白血病，最近才用来治疗c-kit异常表达的GIST在突变的患者中，相对于第9号外显子突变和野生型，第11号外显子突变患者疗效最佳第9号外显子突变患者一线治疗应用800比400md/d明显延长中位无进展生存期C-kit突变与临床治疗k-ras基因检测及其临床应用k-ras基因突变k-ras基因被激活最常见的方式是点突变,多发生在N端第12,13和61密码子,其中又以第12密码子突变最常见,为GGT突变成GAT或GTT20－50％结直肠癌发生K-ras基因突变第12和13密码子突变占90％，第61密码子占5％k-ras突变的临床意义K-ras基因突变型患者不能从抗EGFR治疗中获益，反而增加不良反应危险和治疗费用只有k-ras基因野生型患者才能接受EGFR抑制剂（如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗但并不是所有k-ras基因野生型对靶向治疗都有效石蜡组织中基因突变检测流程小

结分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗

和诊断中具有重要价值基于PCR的多种生物学技术和方法用于

突变检测，各有利弊，需要合理选择四、FISH荧光原位杂交技术及其应用

荧光原位杂交(FISH)技术的简介：

发展历史、原理和实验操作程序FISH检查在肿瘤靶向治疗中的应用：

乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK）FISH检查在病理诊断中的应用：

宫颈癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等FISH检查在其他方面的应用：

流产、遗传病等基本原理碱基互补配对原则，同源的DNA-DNA，DNA-RNA,RNA-RNA两条单链在一定条件下能结合成双链。用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针，与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示目的基因存在和定位。基本原理组织切片脱蜡酶消化杂交过夜清洗DAPI染细胞核荧光显微镜观察FISH检查实验流程图乳腺癌和胃癌HER2FISH检查荧光原位杂交探针制备典型的乳腺癌HER2FISH结果ABCD结

果

判

断Ratio=Her2信号总数/CEP17信号总数

HER2:CEP17胃癌乳腺癌无扩增<2.0<1.8意义不明（Equivocal）1.8-2.2扩增>2.0>2.2FISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用

淋巴瘤类型探针名称涉及基因发生率临床意义B细胞淋巴瘤GLPICHIGH50%-85%鉴别B细胞恶性淋巴瘤和淋巴组织良性增生性病变滤泡性淋巴瘤GLPIGH/GLPBCL2IGH/BCL2﹥90%辅助诊断滤泡性淋巴瘤套细胞淋巴瘤GLPIGH/GLPCCND1IGH/CCND1~95%辅助诊断套细胞淋巴瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤GLPBCL6BCL6~40%辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤GLPC-MYCC-MYC~100%辅助诊断伯基特淋巴瘤粘膜相关淋巴组织淋巴瘤GLPMALT1MALT110%-20%辅助诊断MALT淋巴瘤GLPAPI2/GLPMALT1API2/MALT1~40%指导抗HP治疗间变性大细胞淋巴瘤GLPALKALK60%-80%评估预后淋巴瘤FISH检测试剂盒IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FL）IGH/BCL2基因FISH检测IgHBcl2IGH/BCL2探针14（灰）号和18号（黑）染色体IgH基因Bcl-2基因杂交正

常

异

常融合基因扩增双色双融合易位探针(IGH/BCL2）正常融合基因拷贝数增加双色融合易位探针(IGH/BCL2）FISH检查在其他方面的应用产前染色体异常诊断遗传病染色体分析自然流产染色体异常诊断膀胱癌、前列腺癌肺癌靶向治疗小

结FISH技术给乳腺癌、胃癌肿瘤靶向

治疗提供了金标准为某些疾病诊断提供了无创性检查手段

病理诊断提供了有用的辅助指标

为开展科学研究提供了重要实验技术美国斯坦福大学病理科»AutopsyPathology»ClinicalBiochemicalGenetics»ClinicalChemistry»ClinicalMicrobiology»ClinicalVirology»Cytogenetics»Cytopathology»Dermatopathology»Hematopathology/ClinicalHematology»Immunodiagnosis»MolecularGeneticPathology»Neuropathology»RenalPathology»SurgicalPathology(generalandconsultationservices