《病原微生物实验室生物安全》

1病原微生物实验室生物安全

2概述实验室生物安全的法律法规要求病原微生物实验室设施和设备的要求病原微生物实验室的风险评估实验室生物安全管理的基本要求实验室生物安全工作人员的要求病原微生物实验室人员医学监督的要求病原微生物实验室意外事故应急处置的要求3第一节实验室生物安全的法律法规要求

截至2011年6月底，国家和各行政主管部门已颁布实施的与实验室生物安全相关法律法规、技术标准等18项。其中：国家：2个科技部：1个卫生部和药监局：6个农业部：6个环保部：1个国家质量监督检验检疫总局等：2个4第一节实验室生物安全的法律法规要求

这些法律法规和技术标准系统地规范和要求了病原微生物实验室建设标准、审批、管理、设施、安全设备、人员等要求，主要有：

病原微生物分类管理的要求实验室分级管理的要求高等级生物安全实验室的系列审批要求实验室生物安全管理的要求5第一节实验室生物安全的法律法规要求病原微生物分类管理的要求第一类病原微生物第二类病原微生物第三类病原微生物第四类病原微生物第一类、第二类病原微生物又统称为高致病性病原微生物。

6第一节实验室生物安全的法律法规要求实验室分级管理的要求一级生物安全防护实验室（BSL-1和ABSL-1实验室）二级生物安全防护实验室（BSL-2和ABSL-2实验室）三级生物安全防护实验室（BSL-3和ABSL-3实验室）四级生物安全防护实验室（BSL-4和ABSL-4实验室）BSL－1、BSL－2、ABSL－1和ABSL－2实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。BSL－3、BSL－4、ABSL－3和ABSL－4实验室可从事高致病性病原微生物实验活动。

7第一节实验室生物安全的法律法规要求高等级生物安全实验室的系列审批要求体系规划审查同意可行性论证工程建设工程验收环评验收生物安全许可活动资格授权实验室运行前期论证发改委科技部投资方+认可委＋建设单位设计方＋建设方有资质的建筑质量验收单位环保部或省级环保局认可委卫生部和农业部建设方环评论证环保部或省级环保局环境监测环保部建设期认可与授权期8第一节实验室生物安全的法律法规要求实验室生物安全管理的要求国家对实验室的生物安全管理模式省、自治区、直辖市的生物安全管理模式从事病原微生物工作机构的生物安全管理模式单位生物安全管理委员会实验室安全负责人实验室安全员生物安全手册

9第一节实验室生物安全的法律法规要求生物安全手册：（1）试验项目的申请、审批制度（2）病原微生物实验室的使用及管理制度（3）实验室设施安全检查和维护制度（4）试验操作技术规程的论证和审批制度（5）菌（毒）种使用和保存制度（6）试验设备的安全检测校准和使用程序（7）试验操作程序（8）紧急情况及意外事故处理和报告程序（9）污物及废弃物处理程序（10）个人安全防护器材使用程序10第二节病原微生物实验室设施和

设备的要求试验设施、设备要求应与所开展检测的微生物要求一致BSL-1：第四类病原微生物BSL-2：第三类病原微生物BSL-3：第二类病原微生物BSL-4：第一类病原微生物11适用范围结构、设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。如大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌等。安全设备个体防护无需生物安全柜；人员应穿工作服、戴防护眼镜。皮肤有破损或皮疹时应戴手套设计建造特殊要求应设洗手池；表面易于清洁；地面防滑不得铺地毯；台面不透水，耐腐蚀、耐热；家俱应牢固，与设备之间有间隙，易于清洁；有生物废弃物容器；纱窗。（一）BSL—1/P1实验室的设施要求12应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。每个实验室在靠近出口处应设洗手池。在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开设置。实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。应有适当的消毒设备。

（一）BSL—1/P1实验室的设施要求131415161718适用范围结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物，如沙门氏菌、HBV、麻疹病毒、弓形虫。安全设备个体防护需Ⅱ级生物安全柜；可能产生致病微生物气溶胶或溅出及处理高浓度或大容量感染性材料应使用Ⅱ级BSC，使用个体防护设备（面部用品可除外）设计建造特殊要求满足P1的条件。设置各种消毒的设施，如高压灭菌锅、化学消毒装置对废弃物进行处理；洗眼装置；实验室带锁、自动关闭；具有生物危害警示标识；可通风换气。（二）BSL—2/P2实验室设施要求1920满足BSL-1实验室要求。实验室门应带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室内应使用专门的工作服；应戴乳胶手套。在实验室所在的建筑物内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。应在实验室内配备II级生物安全柜。应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。

（二）BSL—2/P2实验室设施要求21三、生物安全柜1Ⅰ级生物安全柜可使气流由外向柜内流动以保护操作者，然后气流排向外界，配有高效微粒空气过滤器，仅能捕获0.1---0.3m以上的颗粒，而不能捕获化学烟气。2Ⅱ级生物安全柜气流可部分在柜内循环，部分外排，A1型30%排到室内，A2型30%排到室外，B1型70%排到室外，B2型全部排到室外。3Ⅲ级生物安全柜工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气，下部为手套箱式操作口，箱内负压，可确保人体与柜内物品完全隔绝。22II级生物安全柜防护特征比较柜子类型面速度（英尺/分）气流方式应用非挥发性化学毒物/放射性物质挥发性化学毒物/放射性物质Ⅱ级A1型7570%通过HEPA在工作区内循环，30％通过HEPA排出到实验室内。能（微量）不能A2型100同ⅡA,但箱内呈负压和管道排气能能（痕量）1B1型10030%通过HEPA在工作区内循环，70通过HEPA和严格的管道排出能能（微量）1B2型100无循环，全部通过HEPA和严格的管道排出能能（少量）1.化学浓度不能超过最低爆炸浓度。

23生物安全柜空气流向24252627282930313233第三节病原微生物实验室的风险评估病原微生物的风险评估病原微生物分类与实验室及实验活动（操作）分级（名录规定）病原微生物的生物学特性

形态特征培养特性免疫学特性（特异性抗原）遗传特性（基因组及编码产物）变异性（包括基因重配的特性）毒力和致病性种（型）鉴别特征34在环境中的稳定性在自然环境中的存活能力与其它生物和环境的交互作用对理化因子的敏感性对温度作用时间、紫外灯等物理因素的敏感性对不同消毒剂的敏感性（用于实验室消毒方式的选择）

病原微生物的风险评估35自然宿主和易感人群（适宜宿主）自然宿主易感人群感染途径自然感染途径:呼吸道、消化道、血液或媒介等自然宿主和感染人群的相关性:是否在动物与动物，动物与人，人与动物，人与人之间传播等。非自然感染途径:实验室和临床感染（气溶胶、锐器伤害、皮肤感染、接触病等途径）病原微生物的风险评估36致病性临床表现：临床症状、潜伏期、发病时间、疾病进程快慢（急性与慢性）、感染剂量、入侵部位、并发症预后：免疫、治愈、致残、致死

实验室感染或院内感染信息基因技术操作导致风险分析：分析重组病毒、重组细菌以及其他所有基因技术是否可能导致扩大微生物的宿主范围，毒力变化或改变。病原微生物的风险评估37实验活动实验活动内容及所操作病原微生物的量一般操作的浓度和剂量标本浓缩操作的浓度和剂量操作超常规量实验操作过程微生物实验室活动的风险评估和控制38实验室设施设备仪器设备实验室设施实验室设施设备设计与实际状态是否可满足上述实验活动防护与周边环境保护要求实验室在常规运行中对设施设备进行维修过程中风险与预防措施评估实验室对设施设备进行清洁、维护或关停期间发生暴露的风险

微生物实验室活动的风险评估和控制39感染性材料使用、管理的风险分析被误用和恶意使用的风险与防范措施评估被偷盗和被不正当使用的风险运输中可能出现的风险个人防护用品评估个人防护用品选择与储备依据个人呼吸道防护用品佩戴防护效果测试方法评估个人防护用人员穿戴正确性评估微生物实验室活动的风险评估和控制40消毒方法选择与感染性废弃物处理评估实验活动清场消毒和终末消毒方法的选择；感染性材料、动物实验尸体、粪便等废弃物以及实验室锐器处理。人员素质与要求评价实验室工作人员的种类与数量；对不同岗位人员相关的风险评估；个人素质与健康状况。微生物实验室活动的风险评估和控制41根据病原体特性设定的实验室风险控制水平（容许的风险水平）；满足上述要求所需的条件和措施（硬件、软件、人员）；现有的措施、条件或拟采用消除、减少或控制风险的管理措施和技术措施；是否具备开展拟从事实验活动的能力？如何改进（硬件、软件、人员等）？风险评估结论42第四节实验室生物安全管理的基本要求实验室生物安全日常管理的基本要求实验项目的申请和审批制度项目来源、目的；实验室、试验时间；试验内容、使用的微生物、所用安全防护设备；试验方法；参加人员、包括人员的培训、健康情况；个人防护方案；消毒处理方法；紧急情况下的预防措施等。43第四节实验室生物安全管理的基本要求病原微生物实验室的使用管理制度

使用实验室的申请、审批；实验室设备、设施的正确使用及维护；菌毒种、药品、试剂的使用要求；个人防护规定及防护器材的使用与处理；污染物及废弃物的处理规定；实验室的实时监控；各种紧急情况下的处理方法；事故的处理与报告程序。44第四节实验室生物安全管理的基本要求上岗前培训制度实验室的工作人员必须是受过专业教育的技术人员；训练应包括生物安全常识、实验室安全操作规程、常规试验操作和特殊试验要求、个人防护技术等，以及不安全操作引起的意外事故的处置。意外事故的处置最好组织模拟训练或演练，保证在出现事故时每人都能正确应对；特殊行业如压力容器、动物饲养使用等还需持特定上岗证。实验室设施和安全防护设备的检查、维护和检测校准制度实验室准入制度

45第四节实验室生物安全管理的基本要求试验操作技术规程的论证和审批制度依据试验目的、要求，制定试验方案和详细的试验操作规程；新实验方法须验证或生物安全专家委员会论证。菌（毒）种使用及保管制度应依据国家或行业的菌（毒）种使用及保管的有关法律法规，从实际出发，制定切合本单位实际的菌（毒）种使用保管制度，从菌（毒）种的申请、领取、传代、使用、销毁、保存都应有严格的规定和制度，确保菌（毒）种的安全。46第四节实验室生物安全管理的基本要求建立生物安全管理应遵循的原则应依法建章立制应紧密联系本单位实际，务求实用生物安全管理制度应涵盖生物安全的一切要素文件要便于管理和使用管理制度应不断完善应由具有实际经验的技术和管理人员编制文件（5W1H，即做什么，谁来做，什么时候做，在哪里做，为什么做和如何做）47第四节实验室生物安全管理的基本要求组织生物安全管理体系文件应考虑的要素

对于生物安全实验室来说，人员、设施、设备、样品、供应品、方法、环境条件、管理等要素就构成了生物安全体系。48第四节实验室生物安全管理的基本要求管理

法律、法规、标准、文件（起草、修订、更新、审批、宣贯等）、生物安全监督、检查、评审、项目（实验方法、准入、管理、工作分包等）等都是管理的目标。人员

包括管理人员、实验室工作人员、后勤保障人员，应考虑培训、考核、准入、医疗监测、健康管理、紧急就医、个人防护、岗位职责等都是管理的对象。环境

应考虑环境评价、废弃物、清场消毒、实验室污染监测等环境要素。49第四节实验室生物安全管理的基本要求设施和设备

包括防护性设备和可能产生危害的设备，除了考虑其工作状态控制、安全保证和操作程序等要素，还要包括维护、保养、检修、去污染等硬件要素。感染性物质

应考虑包括对感染性物质的采集、包装、运输、储存、保藏、使用、流转和销毁等可溯源的环节。理化危险因素

应考虑同位素、危险化学品等危险因素的购置、储存、使用、废弃物处理等环节，电气、火灾、噪声、紫外线与激光危害等相关风险因素。

50第四节实验室生物安全管理的基本要求应急

应制订发生水灾、火灾、地震、意外事故等情况和紧急就医的预案。规范（通用性生物安全SOP）和方法

对于方法的获得、确认、使用等应有规定，实验方法应强调那些与安全密切相关的细节。支持性数据

包括危害评估，实验材料安全数据单（MSDS），应控制其编制、获取、维持、分发、修订等环节。

记录

应涵盖针对上述要素的所有活动和过程。51第五节实验室生物安全工作人员的要求培训与上岗建立健康档案限定不宜加参加高致病性病原微生物试验人员明确试验的指导和监督人员52第六节病原微生物实验室人员

医学监督的要求医学监督内容医学监督基本要求BSL-1和BSL-2实验室工作人员的医学监督在BSL－1实验室操作微生物的工作人员的医学监督所有实验室工作人员应进行上岗前的体检，并记录其病史。在BSL-2（含ABSL-2实验室）操作微生物的实验室工作人员的医学监督必须有录用前或上岗前的体检，进行一次有目的的职业健康评估实验室管理人员要保存工作人员的疾病和缺勤记录患发热性疾病、感冒、上呼吸道感染、或其他导致抵抗力下降的情况的人员不应进入BSL-实验室和ABSL-2实验室已经在实验室控制区域内连续工作4h以上，或其他原因造成的疲劳状态53第六节病原微生物实验室人员

医学监督的要求在BSL-3实验室（含ABSL-3实验室）操作微生物的实验室工作人员的医学监督进入BSL-3及以上级别实验室工作的相关人员，应每日早、晚测量体温并观察相应症状结束实验室工作后，应继续进行相应时段（相关疾病的平均潜伏期）的健康监测。一旦出现异常情况应立即报告实验室负责人，以便及时采取相应控制措施。对在三级生物安全水平的防护实验室内工作的所有人员，要强制进行医学检查。临床检查合格后，给受检者配发一个医疗联系卡，卡片上应有持卡者的照片，卡片应制成钱包大小，并由持卡者随身携带。所填写的联系人姓名需经所在机构同意，应包括实验室主任、医学顾问和/或生物安全官员。

54第六节病原微生物实验室人员

医学监督的要求人员样本的保存和记录无论是在BSL-2实验室和ABSL-2实验室的工作人员，还是BSL-3和ABSL-3实验室的工作人员，都应留取血清样本，包括接种疫苗前的血清样本、接种疫苗后的血清样本。详细记录在微生物实验室工作人员的从事的病原微生物种类、工作内容、血清保留的信息、疫苗接种的信息、不同阶段的体检情况、生育情况（女性工作人员）等工作人员的主要信息。

55第六节病原微生物实验室人员

医学监督的要求人员的定点救治医院实验室工作人员，一旦出现与本实验室从事的病原微生物相关的临床症状或者体征时，实验室负责人应当立即向本单位生物安全委员会及单位负责人报告，同时派专人陪同及时就诊。原则上应首先到本单位的医务室（内设医疗机构）就诊，紧急时可直接到定点医院就诊。就诊时，实验室工作人员应当将近期所接触的病原微生物的种类和危险程度如实告知接诊的医务人员。经内设医疗机构预检、观察，排除患者患传染病的可能性后，可转诊至相应医院就诊；若不能排除该患者可能患有传染病时，应采取相应的隔离、消毒措施，并及时转诊至定点医院就诊。56第六节病原微生物实验室人员

医学监督的要求人员的定点救治医院传染病患者或疑似传染病患者转诊时应严格采取隔离防护措施，必要时请急救中心（站）转诊。传染病患者或疑似传染病患者的单位及接诊医务人员，发现由于实验室感染而引起的与高致病性病原微生物相关的传染病病人、疑似传染病病人，应当在2h内报告所在地的县级人民政府卫生主管部门。出现传染病患者或疑似传染病患者后，应尽可能采取有效的主动和被动免疫措施。

57第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求意外事故的报告高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本在运输、储存中被盗、被抢、丢失、泄漏实验室工作人员出现与本实验室从事的高致病性病原微生物相关实验活动有关的感染临床症状或者体征实验室发生高致病性病原微生物泄漏58第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求事故记录发生的时间、地点及详细经过暴露方式；暴露途径、受伤部位、伤口深浅、暴露程度污染物种类（培养液、血液或其它体液）现场应急处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况暴露后是否采用药物预防，如果是，应详细记录用药情况，包括首次用药时间、服药方案和毒副作用随访检测的日期、项目和结果

59第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求意外事故的现场处置制定应急预案微生物实验室应急处置程序微生物实验室人员受伤应急处置程序潜在危害性气溶胶的释放离心机离心管发生破裂卫生主管部门或者兽医主管部门接到关于实验室发生工作人员感染事故或者病原微生物泄漏事件的报告，依法采取的预防、控制措施。60第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求制定应急预案：应考虑以下几方面问题

高危险度等级微生物的鉴定高危险区域的地点，如实验室、储藏室和动物房明确处于危险的个体和人群明确责任人员及其责任，如生物安全委员会人员、临床医生、微生物专家、兽医专家、流行病专家、生物安全专家、安全人员、地方卫生部门等列出能接受暴露或感染人员名单，以及进行治疗和隔离的单位61第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求制定应急预案：应考虑以下几方面问题

暴露或感染人员的转移方式列出储备的免疫血清、疫苗、药品、特殊仪器的种类和来源应急装备的供应，如防护服、消毒剂、化学和生物学的溢出处理盒、清除污染的器材物品。还应该写明各种装备、物品、消毒药剂的使用方法应有人员撤离程序事故现场紧急处置程序和方法，以及处置后效果评价方法62第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求微生物实验室应急处置程序戴手套，穿防护服，必要时需进行脸和眼睛防护用沾有消毒剂布或纸巾从污染区的四周向中心覆盖并吸收污染物向纸巾上倾倒适当的消毒剂，并立即覆盖周围区域（通常可以使用5%漂白剂溶液；但在飞机上发生污染时，则应该使用季铵类消毒剂）使用消毒剂时，从污染区域的外围开始，朝向中心进行处理63第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求微生物实验室应急处置程序作用适当时间后（例如30min），将所处理物质清理掉。如果含有碎玻璃或其他锐器，则要使用簸箕或硬的厚纸板来收集处理过的物品，并将它们置于可防刺透的容器中以待处理对污染区域再次清洁并消毒（如有必要，重复第2～5步）将污染材料置于防漏、防穿透的废弃物处理容器中64第七节病原微生物实验室意外事故

应急处置的要求微生物实验室人员受伤应急处置程序皮肤针刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤出的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口