2024实时震动诱导转化技术在克-雅病临床诊断中的应用

2024实时震动诱导转化技术在克-雅病临床诊断中的应用

克-雅病（CJD）是一组由阮蛋白错误折叠引起的临床罕见的神经系统变性

疾病，具有遗传性和传染性，是人类肮病毒病的最常见类型。20世纪20

年代，德国神经科学家Creutzfeldt和Jakob首次描述一种临床表现为快

速进展性痴呆（RPD）,精神行为异常，伴视觉障碍、共济失调、锥体外

系症状和肌阵挛，以及病理表现为灰质海绵状改变，神经元丢失和神经胶

质增生，但无炎症性改变的疾病，并命名为克-雅病。随着对克-雅病临床

和病理学特征的深入了解，逐渐认识到该病是一种中枢神经系统变性疾病,

亦称为皮质-纹状体-脊髓变性或亚急性海绵状脑病。正常情况下，神经细

胞表面的肮蛋白称为正常细胞肮蛋白（PrPC）;某些因素刺激下,PrPC构

象改变,形成致病形式的异常羊瘙痒病阮蛋白（PrPSc）即肮病毒，阮病

毒通过改变邻近蛋白生理构象引起神经元功能障碍，最终导致阮病毒病。

根据病因，克-雅病可以分为4种类型,即散发性克-雅病（sCJD）,病因

尚未明确，约占90%;遗传性克-雅病（gCJD）,呈常染色体显性遗传，

系PRNP基因变异使PrPC构象发生改变，形成PrPSc;医源性克-雅病

（iCJD）,因接触感染组织引起外源性肮病毒感染，如注射人源性生长激

素或者移植感染供体的角膜或硬脑膜，异体PrPSc诱导自身PrPC转化为

PrPSc而致病；变异型克-雅病（vCJD）,系牛海绵状脑病（BSE）传播所

致，患者因食用肮病毒病牛肉而致病。

2002年，中国疾病预防控制中心（CDC）病毒病预防控制所牵头制定《克

雅氏病诊断标准和姐里原则》。同年，中国克-雅病监测网络被世界卫生组

织纳入全球监测网络。2006年,中国CDC病毒病预防控制所在北京市、

上海市、天津市、重庆市、广东省、吉林省、陕西省、安徽省、贵州省、

湖北省、河南省和新疆维吾尔自治区共12个省、市、自治区设立监测点，

克-雅病监测工作正式开展。2018年2月，中华人民共和国卫生行业标准

《克-雅病诊断》实施，成为我国诊断克-雅病的标准，该标准主要参考德

国哥廷根大学神经病学家Zerr教授团队2009年制定的《散发性克-雅病

临床诊断标准》，强调在满足4项临床病史和流行病学史（进行性痴呆、

临床病程＜2年、常规实验室检查除外其他疾病、无明确医源性接触史）,

以及4项核心临床症状肌阵挛、视觉障碍或小脑共济失调、锥体系禾口或）

锥体外系症状、无动性缄默］中2项的基础上，合并脑电图周期性三相波、

头部FLAIR成像壳核和I或尾状核异常高信号或DWI大脑灰质对称性〃缎

带征二脑脊液14-3-3蛋白阳性中的一项，可临床诊断散发性克-雅病，

但明确诊断需脑组织活检或尸检病理学检查，HE染色发现脑组织海绵状

变性、或者免疫组化染色和（或）免疫印迹法检测脑组织存在蛋白酶抗性

PrPSc沉积,方可明确诊断。然而，脑组织活检风险较高，接触克-雅病患

者脑组织易引起医源性感染，故限制其临床应用。此外，脑脊液14-3・3

蛋白阳性诊断克-雅病的敏感性较低，尤其对于疾病早期、病程较长、发病

年龄较小（＜40岁I遗传性和变异型克-雅病患者,14・3-3蛋白阴性并

不能排除克-雅病。在临床症状符合克-雅病的患者中，脑脊液14-3-3蛋

白阳性的诊断特异度约为95%，但脑脊液14-3-3蛋白阳性亦可见于脑梗

死、癫痫、中枢神经系统炎症性疾病等多种疾病，因此在未经筛选的神经

系统疾病人群中，脑脊液14-3・3蛋白阳性的总体诊断特异度仅为70%。

由此可见该诊断标准无法对散发性克-雅病进行早期诊断存在一定缺陷,

因此，亟待一项可以早期快速准确诊断克-雅病的检测手段。

自20世纪70年代以来，肮病毒特征逐渐被深入认识。根据PRNP基因

第129位氨基酸的多态性（MM、MV、VV）及PrPSc的类型（1型、2

型）将散发性克-雅病分为6种类型，即MM1型、MM2型、MV1型、

MV2型、VV1型、VV2型，其中绝大多数散发性克-雅病属于MM1型、

MV1型、MV2型或VV2型，而罕见MM2型和VV1型。这一时期，诊

断性检测技术取得长足进展，尤以实时震动诱导转化（RT-QuIC）技术最

为突出,RT-QuIC技术是一种通过蛋白扩增检测样本中极微量蛋白含量的

方法。由于克-雅病患者脑脊液和部分脑组织含有微量PrPSc,RT-QuIC

反应过程中PrPSc与正常重组PrPC蛋白接触之后诱导后者发生转化即错

误折叠，聚集形成更大的纤维化结构，经高频震动后，未发生错误折叠和

稳定聚集的PrPC从纤维化结构中分裂出来，并进入新一轮孵育和震动循

环中再进行转化；正常重组PrPC蛋白在错误折叠和聚集形成纤维化结构

过程中与荧光染料硫黄素T相结合并发出荧光，通过检测荧光信号强度以

代表PrPSc含量。既往10余年，国内外许多研究者采用RT-QuIC技术检

测克-雅病患者脑脊液、皮肤、嗅黏膜中PrPSc含量,并评估其对克-雅病

的诊断价值，脑脊液RT-QuIC阳性的灵敏度和特异度分别为82.1%-96%

和98.5%-100%;皮肤组织RT-QuIC阳性的灵敏度为91.2%-100%,特

异度为85.7%-100%;嗅黏膜上皮刷取物RT-QuIC阳性的灵敏度增至

97%,特异度增至100%;如果联合检测脑脊液和嗅黏膜，其诊断灵敏度

和特异度均可达100%。值得注意的是,与其他亚型的患者相比，MM2

型和VV1型散发性克-雅病患者脑脊液RT-QuIC阳性的敏感性更彳氐。与脑

脊液RT-QuIC阳性患者相比，假阴性患者祖经元损伤标志物(脑脊液总

tau蛋白和14-3-3冒白)水平更低、临床症状期病程更长。2018年，美

国CDC对散发性克-雅病的诊断标准进行修订，将RT-QuIC技术纳入其

中并赋予较高的诊断权重，诊断证据级别仅次于病理学检查。对于临床表

现为进展性神经精神症状的患者，若脑脊液或其他组织RT-QuIC阳性即

可诊断为很可能的(probable)散发性克-雅病。

2021年,德国哥廷根大学神经病学家Hermann教授团队联合美国、法

国、澳大利亚、英国等多国家肮病毒病研究团队再次更新散发性克-雅病的

诊断标准，强调若RT-QuIC阳性，则临床特征不再以快速进展性痴呆为

必要条件，只要存在进展性神经精神症状，即可诊断为很可能的散发性克

-雅病。

目前，我国RT-QuIC技术检测PrPSc相对滞后,为提高国内临床医师对

克-雅病早期识别和诊断能力，中华医学会神经病学分会神经感染性疾病与

脑脊液细胞学学组于2021年成立阮病毒病诊断指南制订专家委员会,