实时荧光定量PCR仪ViiA7操作步骤

实时荧光定量PCR仪ViiA7操作步骤实时荧光定量PCR仪ViiA7操作步骤——以RNaseP示例实验为例一、定义384孔样品模块的实验属性打开电脑访问ViiA7软件，然后打开左侧仪器开关。单击ExperimentSetup图标。单击ExperimentProperties以访问ExperimentProperties屏幕。在ViiA7软件中设计RNaseP实验示例时，请输入：二、使用Define屏幕定义RNaseP示例实验的目标基因、样品。1.单击Define以访问Define屏幕。2.定义目标基因a.单击New以增加和定义目标基因。b.在目标基因表中，单击TargetName列中的一个单元格，并输入：c.（可选）单击Save以便将新增或原有的正在编辑的目标基因保存到TargetLibrary。d.单击AddSaved从目标基因库添加目标基因。3.定义样品a.单击New以增加和命名样品。b.在样品表中，单击SampleName列中的一个单元格，并输入：c.（可选）单击Save以将新增或原有的正在编辑的样品保存到SampleLibrary。d.单击AddSaved从样品库添加样品。4.（可选）定义生物学平行测定a.在DefineBiologicalReplicatesGroups表中，单击New以增加和命名生物学平行测定组。b.从下拉菜单选择Color。c.单击Comments列，以便为该生物学平行测定组添加注释。注：实验示例不使用生物学平行测定组。保留BiologicalReplicateGroups空白。5.选择用作参比荧光的染料ROX。三、分配目标基因、样品和生物学组利用Assign（分配）屏幕将目标基因、样品和生物学平行测定组分配到RNaseP实验示例反应板内的各孔。注：您可以在不进行分配的情况下开始运行，但在扩增曲线中，将不会有实时数据（只有在您已经对板进行设置后，才可以见到扩增曲线）。1.单击Assign以访问Assign屏幕。2.定义并设置标准品。a.单击Assign屏幕上的DefineandSetUpStandards（定义和设置标准品）。b.选择目标基因。c.定义标准曲线。d.为标准品选择和安排反应孔。3.目标基因和样品。a.利用Assign屏幕上的板布局或反应孔表选择反应孔。b.利用下拉菜单分配目标基因RNaseP为其任务。c.选择您想要分配给所选反应孔的样品附近的复选框。四、设置运行方法利用RunMethod屏幕为RNaseP实验设置运行方法。1.单击RunMethod以访问RunMethod屏幕。2.为每个孔的反应体积输入1到20的数字。对于下列消耗品，ViiA?7仪器支持的最大反应体积如下：①MicroAmp?Optical384孔反应板–20μL②微流体卡–1μL3.在GraphicalView选项卡中：①确保热循环扩增曲线适合您的试剂。②如需要，可对默认的运行方法进行编辑，或用ViiA?7Dx软件随附的运行方法库中的一个运行方法代替默认运行方法。③通过单击启用数据采集。注：当需要对各阶段实时采集的数据进行分析时，启用数据采集特别有用。④编辑升降温速度。您可以增加或降低某一阶段的升降温速度。⑤编辑PCR阶段a.更改PCR阶段的循环次数。b.选择EnableAutoDelta复选框以增加或降低后续各循环的温度和（或）保温时间。您还可以更改AutoDelta的起始循环。启用AutoDelta后会显示图标。单击AutoDeltaOff图标以改变AutoDeltaSettings对话框中循环阶段的AutoDelta设置。然后，单击SaveSetting以显示AutoDeltaOn图标。五、开始实验1.触碰ViiA?7DxInstrument仪器触屏上的按钮，或单击ViiA7软件InstrumentConsole屏幕的OpenDoor，以从仪器侧面弹出板适配器。2.将反应板或微流体卡放到板适配器上。确保反应板或微流体卡正确对齐。①确保孔A1位于反应板或微流体卡托盘左上方的位置。②确保反应板或微流体卡的条形码朝向仪器的前面。3.触碰ViiA?7DxInstrument仪器触屏上的按钮，或单击ViiA?7软件Inst