第八章 糖和苷课件

8第八章糖和苷1要求：能设计提取分离流程作业提取分离上述天然药材中的苷类成分,试写出流程图。简要说明各步主要目的和原理8第八章糖和苷2§8.5糖和苷的分离方法(II)

--按分离目的分类

@

@§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理分类@

8第八章糖和苷3分离目的:1.2.分离混合糖类或苷类细分总糖、总苷去

非糖杂质制备

总糖、总苷常用方法

?试写出

分离纯化糖类物质的

参考总论的思路框架检查8第八章糖和苷第八章糖和苷§8.1结构与分类（复习）

掌握§8.2理化性质熟悉、了解§8.3提取方法

掌握§8.4分离方法(I)

掌握§8.5分离方法

(II)

掌握§8.6检识方法熟悉、了解各论--按分离原理

分类--按分离目的

分类试写出糖类常用分离方法，下同8第八章糖和苷5§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理分类

8.4.1利用溶解度差异分离

8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度

8.4.3利用吸附性差异分离

8.4.4利用分子量差异分离（试简述）8第八章糖和苷68.4.1.1

溶剂处理法

8.4.1.2

试剂沉淀法一.

二.三.8.4.1

利用

溶解度差异分离一.铅盐沉淀法二.铜盐------三.加蛋白----剂抽提

法沉淀

法萃取

法（试简述）8第八章糖和苷7一.

溶剂抽提

法--------梯度-----------------分步--------1.用途:

(1)

去杂质：多为油脂类（脱脂）

(2)分离：苷元；单糖苷或少糖苷；“多糖”苷。2.原料：醇提物（混合物）3.流程实例：见下页

8第八章糖和苷可抑制酶解天然药材@乙醇提取乙醇提取液减压浓缩浓缩物(醇提物)见讲义

(1)

去杂质：强亲脂性（脱脂）

(2)分离：苷元/“多”糖苷/“少”糖苷或单糖苷（）石油醚提取残留物8第八章糖和苷9

石油醚部分（多为强杂质）目的（脱脂）可抑制酶解亲脂性残留物天然药材@乙醇提取（）乙醇提取液减压回收乙醇浓缩物石油醚提取Ｅt2O或ＣHCl3提取提取物（含）苷元(醇提物)见讲义8第八章糖和苷10EtOAc提取n-BuOH提取残留物EtOAc提取物（含或）残留物提取物（）（）

残留物

小分子成分含糖较多的苷

单糖苷

少糖苷含8第八章糖和苷11上一页

注：

(1)各部分都有获得苷的可能。(2)也可用水提分级法

可初步分离各种不同性质的多糖,

依次用冷水、冷稀碱液、热水、热稀碱液进行抽提分离,

得到不同性质的多糖后,

再合用它法纯化。8第八章糖和苷12要求：能设计提取分离流程作业提取分离上述天然药材中的苷类成分,试写出流程图。简要说明各步主要目的和原理8第八章糖和苷138.4.1.1

溶剂处理法

8.4.1.2

试剂沉淀法一.

二.三.8.4.1

利用

溶解度差异分离一.铅盐沉淀法二.铜盐------三.加蛋白----剂抽提

法沉淀

法萃取

法（试简述）8第八章糖和苷14二.

溶剂沉淀法――分级沉淀法（分级溶解法）

(一)水提醇沉法

(二)醇溶醚沉法应用（用途）：分离多糖

(

分子量不同的各类多糖)

溶解性不同8第八章糖和苷15(一)水提醇沉法--乙醇分级沉淀

@

（或分级溶解法）

实验装置图:8第八章糖和苷16药材水提浓缩浓缩液(含混合多糖)

逐次加乙醇（等量或数倍量）

分别达到不同浓度分段醇沉分段收集一般分子量不同

沉淀（多糖）沉淀（多糖）沉淀（多糖）沉淀（多糖）8第八章糖和苷17注意事项：1.pH：通常是

pH７（稳定，免酸解）酸性多糖：

pH２－４

（pH７时，－ＣＯＯＨ以离子形式存在，成盐，并非多糖原型）2.操作迅速，以免酸水解。8第八章糖和苷18(二)醇溶醚沉了解

?8第八章糖和苷19多糖转化多糖衍生物醇溶液（如甲醚化合物、或乙酸酯等乙酰化合物）分段醚沉分段收集不同多糖粗品沉淀反复醇溶醚沉（直至物理常数恒定，如旋光度测定，电泳检查等）终产品（HPLC测定纯度）8第八章糖和苷20二.

溶剂沉淀法――分级沉淀法（分级溶解法）

(一)水提醇沉法

(二)醇溶醚沉法应用（用途）：分离多糖

(

分子量不同的各类多糖)

溶解性不同8第八章糖和苷218第八章糖和苷22

溶剂处理法

一.

抽提

法二.

沉淀

法比较三.

萃取

法利用

溶解度差异分离8第八章糖和苷23

３.萃取法原料：多糖水提液（浓缩液）应用：似抽提法溶剂：似抽提法，尤其是n-BuOH多用注意：应防止水解

8第八章糖和苷248.4.1.1

溶剂处理法

8.4.1.2

试剂沉淀法一.

溶剂抽提法二.溶剂沉淀法三.溶剂萃取法8.4.1

利用溶解度差异分离一.铅盐沉淀法二.铜盐沉淀法三.加蛋白沉淀剂8第八章糖和苷258.4.1.2试剂沉淀法一.铅盐沉淀法沉淀杂质，沉淀多糖

中性醋酸铅:沉淀

酸性成分

(包括酸性多糖)

碱式醋酸铅:沉淀酸性成分

(包括酸性多糖)

及部分中性成分

(包括中性多糖)8第八章糖和苷26沉淀母液（H2S脱铅）含单糖、低聚糖、水溶性较大的中性苷类

8第八章糖和苷27二．铜盐沉淀法沉淀多糖（与水溶性成分分离）硫化氢分解去铜****8第八章糖和苷28

分级沉淀法多糖通常有何杂质

?

答案:Pr

怎样去除?

答案:8第八章糖和苷29三.加蛋白沉淀剂原料：多糖（分级沉淀法得到）要求：只沉淀Pr，

不沉淀多糖(较难)

种类：@8第八章糖和苷30（1）酸法（2）温和法（3）酶法蛋白沉淀剂#8第八章糖和苷31（1）酸法

酸性试剂

酚或三氯乙酸、鞣酸等。（2）温和法

“三氯”类试剂三氟三氯乙烷法或者

Sevag法（氯仿：戊醇

4：1）

丁醇（3）酶法蛋白水解酶+Sevag法注意事项：酸法应低温、短时、

避免多糖降解。蛋白沉淀剂8第八章糖和苷328.4.1.1

溶剂处理法

8.4.1.2

试剂沉淀法一.

溶剂抽提法二.溶剂沉淀法三.溶剂萃取法8.4.1

利用

溶解度差异分离小结一.铅盐沉淀法二.铜盐沉淀法三.加蛋白沉淀剂8第八章糖和苷33§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理(或分离方法)分类

8.4.1利用溶解度差异分离

8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度

8.4.3利用吸附性差异分离

8.4.4利用分子量差异分离8第八章糖和苷348.4.2

利用酸碱性或解离度差异分离利用酸碱性

差异

8.4.2.1铅盐沉淀法（同前述）盐沉淀法

8.4.2.2

季铵氢氧化物沉淀法碱

沉淀法

利用解离度

差异

8.4.2.3离子交换法

(1)离子交换法

(2)离子交换纤维素法

(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法8.4.1.2试剂沉淀法8第八章糖和苷358.4.2.2季铵氢氧化物沉淀法碱试剂沉淀法是一类乳化剂结构式见教材应用：分离酸性、中性多糖，并可再进一步细分为不同类别的多糖。8第八章糖和苷36原理：

1.季铵氢氧化物

通常只与酸性多糖生成沉淀,使之分离。

2.升高

PH，某些中性糖也能被沉淀。（-OH

的解离度增大），

方法：在不同pH

下分步沉淀

（酸性、中性、微碱性、碱性等）得到不同多糖。----pH梯度沉淀法

@8第八章糖和苷()利用解离度差异：8.4.2.3离子交换法应用：1.去杂质2.分离糖类酸、碱、盐注意事项：树脂选型是否解离？需改进应用可解离杂质(2)离子交换纤维素法(3)硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂组合法增大解离度络合(1)离子交换法8第八章糖和苷38(2)

离子交换

纤维素法阳----

---

阴----

---

常用型号：教材(3)硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂洗脱：不同浓度的硼酸盐溶液应用：单糖、低聚糖效果好缺点：洗脱液多后处理烦8第八章糖和苷利用酸碱性

差异

8.4.2.1铅盐沉淀法（同前述）盐沉淀法

8.4.2.2

季铵氢氧化物沉淀法碱

沉淀法

利用解离度

差异

8.4.2.3离子交换法

(1)离子交换法

(2)离子交换纤维素法

(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法方法用途8.4.2

利用酸碱性或解离度差异分离8第八章糖和苷408第八章糖和苷418.4.3利用吸附性差异

活性炭吸附法纤维素柱层析见教材静态----动态----8第八章糖和苷428.4.3.1活性碳静态吸附应用：去非糖杂质，对水溶性低聚糖几乎无不良影响注意事项：须用动物性骨碳

否则对蔗糖吸附较多（回收率低，仅43~87%）8第八章糖和苷438.4.3.2活性碳动态吸附（活性碳柱层析）应用：分离？分子量不同的成分

１去杂质：去无机盐，水洗最洗下２分离糖：分离单糖和低聚糖（含单糖数目多者，下）@

先后原理：选择性吸附8第八章糖和苷44洗脱操作：１水洗，除无机盐，得

单糖２渐增洗脱液中的乙醇浓度,逐步洗出二糖、三糖、及更大低聚糖@8第八章糖和苷45注意事项：１．活性炭预处理，除金属离子：盐酸液煮沸，水洗

2–3mol/L２．需增加洗脱速度：（１）装柱，拌等量硅藻土，弊，吸附容量降（２）用稍粗的炭，４０-６０目*8第八章糖和苷468.4.4利用差异（分子量）凝胶层析法（Gelfiltration）

应用：

1.去杂质，无机盐及小分子化合物

（进入凝胶内部）

2.分离糖、苷8第八章糖和苷47

2.分离糖、苷(1)分子量不同

@

例，低聚糖、苷、或多糖。大分子（）洗下，比较活性炭法：大分子（）下先后?吸附力强（2）分子形状不同：如直链和支链多糖支链糖（）下

@先8第八章糖和苷48注意事项：凝胶选型分离低聚糖和苷：用孔隙（）的--多糖

---（）-多糖纯化去杂质

---（）-小大小8第八章糖和苷498第八章糖和苷508第八章糖和苷51§8.4

糖和苷的分离方法(I)--按分离原理(或分离方法)分类

8.4.1利用溶解度差异分离

8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度

8.4.3利用吸附性差异分离

8.4.4利用分子量差异分离§8.5糖和苷的分离方法(II)

--按分离目的分类

@

@8第八章糖和苷528.5糖和苷的分离方法(II)

--按分离目的分类

@8.5.18.5.2分离混合糖类或苷类细分总糖、总苷去非糖杂质制备总糖、总苷8第八章糖和苷538.5.1除去非糖杂质的方法

----

制备总糖、总苷思路?

寻找差异二者性质差异8第八章糖和苷

糖

亲水

苷

亲水

杂质

成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量分离方法

糖

亲水中性

不解离

非电解质

多为中、高分子量

苷

亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐

成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法8第八章糖和苷

糖

亲水中性

不解离

非电解质

多为中、高分子量

苷

亲水

中性

杂质

亲脂类亲水类

可解离电解质酸碱盐

成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子8第八章糖和苷

糖

亲水中性

不解离

非电解质

多为中、高分子量

苷

亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐

成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法8第八章糖和苷(利用差异）注意正确判断差异类型分离目的 方法 举例除亲脂性杂质溶剂法吸附法亲脂性溶剂抽提、萃取

(例如石油醚脱脂)活性炭吸附静态或动态极性糖和苷的精制(利用差异）除亲水性杂质溶剂法吸附法正丁醇萃取提苷活性炭层析极性8第八章糖和苷59分离目的 分离方法 洗脱顺序及原理

除无机盐离子交换法活性碳层析凝胶层析后下先下后下三种方法两类层析被交换吸附分子量小吸附弱进入凝胶内部(可解离小分子）8第八章糖和苷60练习题简述脱盐常用方法

及其洗脱顺序8第八章糖和苷61不沉淀酸碱性成分被交换吸附,中性糖苷成分流出除酸性成分()离子树脂除碱性成分()离子树脂除去酸碱

性成分及部分中性成分铅盐沉淀酸性、酚性成分含酸性多糖

酸根-

—阴阳离子+

—阳法离子交换法碱式醋酸铅中性醋酸铅另沉淀中性

、

成分含中性多糖

目的方法 分离效果等

沉淀单糖、低聚糖、极性大的苷8第八章糖和苷62分子量大的杂质下分子量小的杂质下

粗分：醇沉

蛋白沉淀剂透析法细分凝胶法活性炭沉淀多糖、蛋白质精制单糖低聚糖和苷用于精制多糖（只沉蛋白，不沉多糖）

@8第八章糖和苷631.酚或者三氯乙酸鞣酸等酸性试剂2.三氟三氯乙烷法或

Sevag法（氯仿：戊醇

4：1）

丁醇

“三氯”类试剂3.酶法酶+Sevag法蛋白沉淀剂：#8第八章糖和苷

糖

亲水中性

不解离

非电解质

多为中、高分子量

苷

亲水

中性

杂质

亲脂亲水

可解离

电解质酸碱盐

成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量亲水中性酸性碱性中性极性

大极性较大不解离小分子或大分子分离方法8第八章糖和苷8.5.2

分离混合糖类或苷类

----总糖、总苷8.5.2.1

分离为单糖、低聚糖、多糖

1醇沉法（）糖可溶（）糖沉淀粗分多单糖、低聚小多再分离考点勿背理解@

2活性炭层析3凝胶法选用（）孔隙（）糖先下细分8第八章糖和苷66

8.5.3单糖、低聚糖再细分@活性炭层析――吸附性差异凝胶层析离子交换层析改进离子交换纤维素