酶联免疫吸附试验-ELISA_第1页
酶联免疫吸附试验-ELISA_第2页
酶联免疫吸附试验-ELISA_第3页
酶联免疫吸附试验-ELISA_第4页
酶联免疫吸附试验-ELISA_第5页
已阅读5页，还剩6页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

酶联免疫吸附试验ELISAELISA实验原理酶联免疫吸附测定（enzyme-linkedimmunosorbentassay简称ELISA

）：一种固相酶免疫测定技术。实验原理：以待测抗原（或抗体）与酶标抗体（或抗原）的特异结合反应为基础，通过酶活力测定来确定抗原（或抗体）含量。结合了免疫反应和酶催化反应，是一种特异而又敏感的技术。先将已知抗原或抗体包被于固相载体的表面，与待检样品中的相应抗体或抗原发生反应，再加入酶标记抗体或抗原与免疫复合物结合，最后加入酶的作用底物，根据产物颜色的深浅测定其A值，可进行定性或定量分析。ELSA试验主要技术类型有间接法、双抗夹心法、竞争法等。间接法用于测定抗体。

原理是：将已知抗原连接在固相载体上，待测抗体与抗原结合后再与酶标二抗结合，形成抗原-待测抗体-酶标二抗的复合物，复合物的形成量与待测抗体量成正比。

抗原第1抗体酶第2抗体待检抗体底物有色产物酶标仪检测技术原理：双抗夹心法用于检测抗原。利用待测抗原上的两个抗原决定簇A和B分别与固相载体上的抗体A和酶标抗体B结合，形成抗体A-待测抗原-酶标抗体B复合物，复合物的形成量与待测抗原含量成正比，属非竞争性反应类型。竞争法用酶标抗原（抗体）与待测的非标记抗原（抗体）竞争性的与固相载体上的抗体（抗原）结合，待测抗原（抗体）多，则形成非标记复合物多，酶标抗原与抗体结合就少，也就是酶标记复合物少，因此，显色程度与待测物含量成反比。既可用于抗原又可用于抗体检测。（间接法）实验步骤1.包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释,每孔加100微升，4℃冰箱放置16～18小时。2.洗涤：倒尽板孔中液体，加200微升洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。3.加封闭液200微升，37℃放置一小时。4.洗涤同2。5.加待检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释,每孔100微升。37℃放置1小时。6.洗涤同2。7.加二抗（酶标抗体）,每孔100微升,放置37℃1小时。8.洗涤同2。9.加底物：邻苯二胺溶液加100微升，室温暗处10--20分钟。10.加终止液：每孔加50微升H2SO4。11.观察结果：在20分钟内，用酶联免疫检测仪测定各孔OD值，测定波长490nm。实验结果P/N值=（待检标本孔吸收值-空白孔平均吸收值）/（阴性标本孔的平均吸收值-空白孔的平均吸收值）=标本孔A值/阴性对照孔A值例：12345678910

空空阴阴待待待待待待P/N=(6个待检孔的平均吸光值-1、2孔的平均值）/（3、4孔的平均值-1、2孔的平均值）注意事项每个待检样品平行加两份，以保证实验结果的准确性。严格控制抗原与抗体、抗体与酶标抗体反应时间。太短，敏感性下降；太长，吸附的抗原或复合物可能脱落。洗板时，洗液应注满各孔，所用的吸水纸勿重复使用显色液现配现用，A液与B液不接触金属器械。操作过程中

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 备课教案

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论