DB12T 465-2012 预防性健康检查 粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检测方法　　

DB12DB12/T465—2012预防性健康检查粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检测方法DetectionmethodsofSalmonellaandShigellawhoneedtopasspreventivehealthcheck天津市质量技术监督局发布III本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到6.1.2条采便管与微生物采样增菌培本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性1本标准规定了预防性健康检查粪便中沙门氏菌、志贺氏菌的检测方法的术语无任何临床表现，从粪便中分离到沙门氏菌（伤寒和副伤寒菌）或志贺氏3.1冰箱：4℃~8℃。）：24.5克氏双糖铁琼脂（KIA）见附录A中粪便A.5。）：3!36℃±1℃36℃±1℃!36℃±1℃!18h～24h↓4），底层/斜面气体硫化氢动力吲哚尿酶赖氨酸硫化氢-++--+++-/++----+++--++A/A+++--++++++-++A/A+++---++++-+-+A/A+-+/-+-+/--/+5自选择性分离平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种克氏双糖铁琼脂（KIA）或三糖铁（TSI）琼脂及动力-吲哚-尿素培养基（MIU）及赖氨酸铁琼脂（LIA）。每份标本应多挑几个菌落，底层/斜面气体硫化氢动力吲哚尿酶赖氨酸硫化氢-⅛---/+---寒和丙型副伤寒菌）具有Vi抗原应与Vi诊断血清进行血清凝集试验。2a--4b-7cVi9d-Via)挑取KIA(TSI)疑似志贺氏菌的培养物，先用志贺氏菌四种多价血清做玻片凝集试验。如呈现6e)若四种多价血清凝集，而不与相应的分型血清凝集，且菌落粗糙，可用宋内Ⅱ相（粗造型）血6Ⅰ+--Ⅰ++-Ⅰ--+Ⅱ+--Ⅱ--+Ⅱ+-+Ⅲ-++Ⅲ++-Ⅲ-+-Ⅳ+--Ⅳ++-Ⅳ--+Ⅴ+--Ⅴ--+6Ⅵ(+)--/--+/+--注表示凝集表示不凝集表示个别菌株系阴性反应。6+--++-+-+-++-+---+---注表示凝集表示不凝集。7菌(伤寒及副伤寒菌)的鉴定见表8。动力葡萄糖乳糖蔗糖硫化氢靛基质尿素红卫茅醇木胶糖++--+/---+--+++-+⊕---/+--+--+--++⊕--+--+-+/-+++++⊕--+--+-+++++根据6.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行沙门氏菌(伤寒及副伤寒菌)鉴定。----++--+-++d 8可根据6.4.2的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进综合上述生化试验和血清学鉴定的结果判定菌型，并报告粪便标本中检出或未检出沙门氏菌(伤寒及副伤寒菌)或志贺氏菌。9培养基和试剂蛋白胨乳糖4.0g亚硒酸氢钠4.0g蛋白胨牛肉浸出粉三号胆盐3.5g硫代硫酸钠pH7.0±0.1牛肉膏水杨素2.0g氯化钠5.0gpH7.5±0.1将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内,调节pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50℃~55℃倾注平皿。L-赖氨酸蔗糖7.5g去氧胆酸钠2.5g柠檬酸铁铵0.8g硫代硫酸钠6.8g氯化钠注：本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加A.5克氏双糖铁琼脂（KIA）g3.0g3.0ggg5.0g0.5g硫代硫酸钠0.5ggg将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。灭菌15min。放置高层斜面备用。硫代硫酸钠0.2gpH6.8±0.2氯化钠5.0g氯化钠作为对照培养基,分装试管备用。注：氰化钾是剧毒药,使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应，试验时蛋白胨酵母浸膏3.0gpH6.7±0.10.2％溴麝香草酚蓝溶液注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。牛肉膏0.3g氯化钠0.5gg2.0g0.6g0.4g2.0g3.0g0.2％溴麝香草酚蓝溶液常见沙门氏菌抗原见表B.1A群S.paratyphiAaS.kisanganiaaS.abortusequi4,12-S.paratyphiBbbS.abonybbl,wS.bury4,12,[27]cS.stanleydS.saintpaulS.readingS.chesterS.derbyS.agona4,12-S.california4,12S.kingstonS.budapest-S.typhimuriumiS.Lagosil,v基尔瓦沙门氏菌ⅡS.kilwaⅡ4,12l,wS.heidelbergrS.indianazS.stanleyvilleS.ituri群S.osloaS.edinburgb布隆方丹沙门氏菌ⅡbS.paratyphiCcS.choleraesuiscS.typhisuiscS.lomitaS.braenderupS.rissen-S.montevideo-S.oranieburgm,tS.oritameriniS.thompsonkS.concordl,vS.irumul,vS.mkambal,vS.bonnl,vS.potsdaml,vS.gdanskl,vrS.infantisrS.papuanaryS.hartfordyS.mikawasimayS.mbandakaS.tennesseeS.braenderupS.jerusaleml,w群S.narashinoaS.nagoyabS.gatunibS.muenchendS.manhattandS.newportS.kottbusS.tshiongweS.lindenburgiS.takoradiiS.bonariensisiS.litchfieldl,vS.bovismorbificansr,[i]S.chailey群S.bardo8S.emek-S.kentuckyiD群S.sendaiaS.typhid-S.tarshynedS.eastbourneS.israel肠炎沙门氏菌S.enteritidisS.blegdam-SalmonellaⅡS.dublin-iS.panamal,vS.goettingenl,vS.javianaS.gallinarum-pullorum--群S.okefokocS.vejleS.muensterS.newlandsS.meleagridisl,wS.westhampton-S.amoundernessikl,wS.nchangal,vS.sinstorfl,vS.londonl,vS.givel,vS.ruzizil,vS.ugandaS.ughellirrS.clerkenwellzl,wS.lexington群S.saoS.calabarl,wS.senftenberg-S.stratfordiS.ta