DB51T 1081-2010 饲料中赭曲霉毒素A的测定 高效液相色谱法　　

备案号：28171-2010DB51DB51/T1081—2010饲料中赭曲霉毒素A的测定2010-06-01发布2010-07-01实施 Ⅱ1范围 12规范性引用文件 1 14试剂和溶液 15仪器与设备 26试样制备 27分析步骤 28结果计算 29精密度 3 4IDB51/T1081-2010本标准的附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省饲料工作总站负责起草。本标准起草人：柏凡、赵立军、李云、高庆军、甄阳光、张静。1DB51/T1081-2010饲料中赭曲霉毒素A的测定高效液相色谱法1范围本标准中赭曲霉毒素A的检出限为30μg/kg。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理检测器检测，外标法计算赭曲霉毒素A的含量。4.2氯化钠。4.3氯化钾。4.4磷酸钠。4.7提取液：甲醇+水=80+20(体积比)。于1000mL水，用盐酸或氢氧化钠溶液调pH至7.0。4.10清洗缓冲液：0.1mL吐温-20溶于1LPBS(4.9)缓冲液中。4.11赭曲霉毒素A标准品：含量大于98%。4.11.1标准贮备液：精密称取10mg赭曲霉毒素A标准品，用乙腈溶解、定容至100mL,此贮备液浓度为100μg/mL,置于冰箱中2～8℃保存，有效期6个月。μg/mL,0.01μg/mL,0.1μg/mL,0.5μg/mL,1.0μg/mL,5.0μg/mL。置于冰箱中2～8℃保存，有效期24.11.3赭曲霉毒素免疫亲和柱。5仪器与设备5.1分析天平：感量0.1mg。5.2超声波清洗器。5.3离心机：转速为5000r/min以上。5.4超纯水处理器。5.5涡旋混合器。5.6高效液相色谱仪：配备荧光检测器。5.7氮吹仪。5.80.45μm滤膜。6试样制备按GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195规定，选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g左右，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1试样溶液的制备称取20g试样(精确至0.01g)于锥形瓶中，加入2g氯化钠(4.2),50mL提取液(4.7),超声提取20min,离心，取上清液过滤，准确量取滤液5.0mL,加入20mLPBS(4.9)稀释，混匀，待净化。将免疫亲和柱底帽除去。剪去亲和柱的盖帽，与10ml注射器连接。待免疫亲和柱中缓冲液排出后，精确吸取上述稀释液5.0mL过免疫亲和柱(流速1-2滴/秒),再依次用5mL清洗缓冲液(4.10)、5mL蒸馏水淋洗柱子，抽干柱子，用2.0mL甲醇洗脱，收集洗脱液于50℃水浴中氮气吹干，准确加入流动相1000μL,涡旋30s,过0.45μm滤膜，上机测定。7.2色谱条件7.2.1色谱柱：C₁8柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。7.2.2柱温：30℃。7.2.3流动相：甲醇+水(1%乙酸)=50+50(体积比)。7.2.4流速：1.0mL/min。7.2.5检测器：荧光检测器，Ex:330nm,Em:460nm。7.2.6进样量：50μL。按上述色谱条件，分别将标准溶液和试样溶液上机测定，按照保留时间进行定性，单点或多点校正，外标法定量。当分析物浓度不在线性范围内时，应将分析物稀释或者浓缩后再进行检测。8结果计算试样中赭曲霉毒素A的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算：式中：V_—上机定容体积，单位为毫升(mL);3DB51/T1081-2010As——赭曲霉毒素A标准溶液对应的色谱峰面积响应值；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；Cs——赭曲霉毒素A标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);m——试样质量，单位为克(g);n——