DB51T 1080-2010 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法

备案号：28170-2010DB51DB51/T1080—2010饲料中玉米赤霉烯酮的测定2010-06-01发布2010-07-01实施I 12规范性引用文件 1 14试剂和溶液 15仪器与设备 16试样制备 27分析步骤 28结果计算 29精密度 2 3DB51/T1080-2010本标准的附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省饲料工作总站负责起草。本标准起草人：柏凡、赵立军、李云、高庆军、魏敏、张静。1DB51/T1080-2010饲料中玉米赤霉烯酮的测定高效液相色谱法1范围本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。本标准中检出限为0.1mg/kg。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理测器检测，外标法计算玉米赤霉烯酮含量。4.4提取液：乙腈+水=90+10(体积比)。4.5玉米赤霉烯酮标准品：含量大于98%。4.5.1标准贮备液：精密称取10mg玉米赤霉烯酮标准品，用乙腈溶解、定容至100mL,此贮备液浓度为100μg/mL,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期6个月。0.1μg/mL,0.5μg/mL,1.0μg/mL,2.0μg/mL,5.0μg/mL。置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1个月。2DB51/T1080-20105.6高效液相色谱仪：配备紫外检测器。5.7氮吹仪。5.80.45μm滤膜。6试样制备按GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195规定，选取具有代表性的实验室样品1kg,四分法缩减分取200g左右，粉碎过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。7分析步骤7.1试样溶液的制备称取20g试样(精确至0.01g)于锥形瓶中，加入2g氯化钠(4.3),50mL提取液(4.4),超声提取20min,离心，取上清液过滤，取1mL上清液用蒸馏水稀释至10mL,稀释液待净化。将免疫亲和柱底帽除去。剪去亲和柱的盖帽，与10mL注射器连接。待免疫亲和柱中缓冲液排出后，精确吸取上述稀释液1.0mL～2.0mL过免疫亲和柱(流速1-2滴/秒),再用5mL蒸馏水淋洗柱子，抽干柱子，用2mL甲醇洗脱，收集洗脱液于50℃水浴中氮气吹干，准确加入流动相1000μL,涡旋3滤膜，上机测定。7.2色谱条件7.2.1色谱柱：C₁8柱，柱长250mm,内径4.6mm,粒度5μm;或性能相当的色谱柱。7.2.2柱温：30℃。7.2.4流速：1.0mL/min。7.2.6检测器：紫外检测器(或二极管阵列检测器),检测波长274nm。按上述色谱条件，分别将标准溶液和试样溶液上机测定，按照保留时间进行定性，单点或多点校正，外标法定量。当分析物浓度不在线性范围内时，应将分析物稀释或者浓缩后再进行检测。8结果计算试样中玉米赤霉烯酮的含量X,以质量分数毫克每千克(mg/kg)表示，单点校正按式(1)计算：V——上机定容体积，单位为毫升(mL);As——玉米赤霉烯酮标准溶液对应的色谱峰面积响应值；A——试样溶液对应的色谱峰面积响应值；Cs——玉米赤霉烯酮标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);m——试样质量，单位为克(g);n——稀释倍数。结果用平行测定的算术平均值表