DB45T 2578-2022 天然富硒农产品硒含量鉴别与分类

ICS65.020.20CCSB3145IDB45/T2578—2022本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区农业农村厅提出并宣贯。本文件由广西壮族自治区农业农村厅归口。本文件起草单位：广西壮族自治区农业科学院农业资源与环境研究所(广西富硒农业研究中心)、广西壮族自治区土壤肥料工作站、广西标准化协会。本文件主要起草人：刘永贤、潘丽萍、尹雪斌、谢罗松、何礼新、梁潘霞、邢颖、陈锦平、方顺、廖青、江泽普。1DB45/T2578—2022天然富硒农产品硒含量鉴别与分类本文件规定了天然富硒农产品的术语和定义、产地环境、硒含量要求和检测方法。本文件适用于广西壮族自治区行政区域内种植、养殖在天然富硒区生产的富硒农产品的鉴别与分类。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5009.93食品安全国家标准食品中硒的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T21191原子荧光光谱仪GH/T1135富硒农产品NY/T391绿色食品产地环境质量NY/T1121.1土壤检测第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存3术语和定义GH/T1135界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1天然富硒农产品naturalselenium-richagriculturalproducts通过生长在天然富硒区域而非任何方式的人为补充外源硒素，所获得的富含微量元素硒的产品，其可食部分的总硒含量和有机硒含量符合本文件规定范围的初级农产品。3.2有机硒organicselenium通过生物转化与氨基酸结合而成，一般主要以硒代氨基酸的形式存在。3.3硒代氨基酸seleno-aminoacids由硒代蛋氨酸、硒代胱氨酸、硒甲基硒代半胱氨酸等组成的含硒氨基酸及其衍生物。注：生物体中含硒的蛋白质为硒的主要存在形式，硒结合进入蛋白质取代了硫形成的硒代蛋氨酸，另一种是通过密码子UGA翻译形成硒代半胱氨酸。由这两种方式形成的含硒氨基[来源：GH/T1135—2017，3.3]4产地环境应符合NY/T391的要求。2DB45/T2578—20225硒含量要求5.1产地环境硒含量5.1.1土壤硒含量天然富硒农产品产地环境（包括天然富硒农产品种植区或放养区及周边同类型土地）中土壤硒含量应符合表1的要求。表1天然富硒农产品产地环境（天然富硒区）土壤硒含量分类要求单位：mg/kg有效硒占总硒数%5.1.2养殖区水源地水质总硒含量天然富硒水产品养殖区水源地水质总硒含量不低于0.01mg/L。5.2天然富硒农产品中总硒含量和有机硒含量要求应符合表2的要求，符合有机硒占总硒含量质量分数或硒代氨基酸占总硒含量质量分数的指标即可。表2天然富硒农产品的总硒含量和有机硒（或硒代氨基酸）含量质量分数%质量分数%注：有机硒占总硒含量的质量分数、硒代氨基酸占总硒含量的质3DB45/T2578—20226检测方法6.1总硒含量按GB5009.93规定的方法测定。6.2土壤有效硒含量按附录A规定的方法测定。6.3有机硒含量按附录B规定的方法测定。6.4硒代氨基酸含量按GH/T1135规定的方法测定。4DB45/T2578—2022土壤有效硒含量的测定方法A.1原理土壤有效硒经磷酸二氢钾-磷酸氢二钾（KH2PO4-K2HPO4）缓冲溶液（pH7.0）浸提后，在酸性条件下与硼氢化钾或硼氢化钠反应生成硒化氢（H2Se），由载气（氩气）带入原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比。按外标法与标准系列溶液比较进行定量，按色谱保留时间进行定性。A.2试剂除另有说明外，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682中规定的一级水。1)磷酸二氢钾。2)磷酸氢二钾。3)氢氧化钾(或氢氧化钠)。4)盐酸（含量：36.038.0。5)硼氢化钾(或硼氢化钠)。A.3试剂配制A.3.11mol/LKH2PO4-K2HPO4缓冲溶液（pH7.0）称取6.80gKH2PO4和11.40gK2HPO4，溶于水并稀释定容至1000mL容量瓶中，摇匀，备用。A.3.25％盐酸溶液(体积分数)量取50mL盐酸，溶于水并稀释定容至1000mL容量瓶中，摇匀，备用。A.3.3还原剂称取1.0g氢氧化钾（或氢氧化钠），用水溶解后再加入7.5g硼氢化钾（或硼氢化钠），溶解，定容至500mL容量瓶中，摇匀，备用。A.3.4硒标准储备液取1000mg/L硒标准液1.0mL，5％盐酸溶液（A.3.2）定容至1000mL，此储备液浓度为1mg/L。A.4仪器主要有：1)原子荧光光度计，应符合GB/T21191的规定，配备硒的元素灯；2)气浴振荡装置；3)分析天平，精度为1mg；4)pH计：精度为0.01；5)实验室常用设备。5DB45/T2578—2022A.5分析步骤A.5.1样品的制备按照NY/T1121.1要求，将采集后样品在实验室中风干、粉碎、过筛、保存。在样品采集、运输、制备和保存过程中应避免沾污和待测元素损失。A.5.2试样浸提称取1.000xg（精确至0.001g）的风干过筛（0.15mm）土壤样品于100mL干燥塑料离心管中，加入15mLKH2PO4-K2HPO4缓冲溶液（A.3.1置于25℃、200rpm的恒温振荡器中提取90min。然后再4000rpm下离心15min，上清液用0.45μm的滤纸过滤，于4℃下储存待测。A.5.3标准曲线的制作用5％盐酸（A.3.2）逐级稀释标准储备液（A.3.4），最后配制成浓度为1μg/L、2μg/L、4μg/L、6μg/L、10μg/L的硒标准系列溶液（现配现用）。A.5.4空白试验按照A.5.2相同的试剂和步骤进行空白试验。A.5.5测定A.5.5.1仪器参考条件参数如下：1)负高压：270V；2)灯电流：80mA；3)原子化温度：800℃;4)炉高：8mm；5)载气流速：300mL/min；6)屏蔽气流速：800mL/min；7)测量方式：标准曲线法；8)读数方式：峰面积；9)延迟时间：1s；10)读数时间：15s；11)加液时间：8s；12)进样体积：0.5mL。A.5.5.2进样测定将制备好的试样导入原子荧光光度计中，按照与绘制校准曲线相同仪器工作条件进行测定。如果被测硒元素浓度超过校准曲线浓度范围，应稀释后重新进行测定。同时，将制备好的空白试样导入原子荧光分光光度计中，按照与绘制校准曲线相同仪器工作条件进行测定。A.6结果计算与表示按公式A.1计算试样中硒的含量，以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。6DB45/T2578—2022式中：X——试样中硒的含量，单位为毫克每千克（mg/kgC——试样浸提液测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；C0——试样空白浸提液测定浓度，单位为纳克每毫升（ng/mLm——试样质量，单位为克（gV——试样浸提液总体积，单位为毫升（mL）。A.7结果的允许误差精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。7DB45/T2578—2022有机硒含量的测定方法B.1原理试样经酸加热消化后所含六价硒还原成四价硒，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢，由载气（氢气）带入原子化器中进行原子化，在硒特制空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比。与标准系列比较定量。样品总硒含量由无机硒和有机硒组成，有机硒含量可通过总硒含量与无机硒含量差减获得。样品在超纯水中经70℃高温水浴中振荡抽提，再用超声波提取后，离心去掉胶体有机成分，最后用环己烷充分萃取小分子有机物，分离出溶解于水相的无机硒，按照GB5009.93总硒测定方法进行无机硒测定。B.2试剂除另有说明外，本方法所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682中规定的一级水。1)硝酸；2)高氯酸；3)盐酸；4)磷酸氢二钾；5)氢氧化钠；6)硼氢化钠；7)铁氰化钾。B.3试剂配制B.3.1混合酸：硝酸+高氯酸(4+1)按体积比（4:1）分别量取硝酸和高氯酸混合，摇匀，备用。B.3.25%盐酸溶液量取50mL盐酸，溶于水并稀释定容至1000mL容量瓶中，摇匀，备用。B.3.3硼氢化钠溶液(8g/L)称取8.0g硼氢化钠(NaBH4),溶于氢氧化钠溶液(5g/L)中，然后定容至1000mL。B.3.4铁氰化钾(100g/L)称取10.0g铁氰化钾(K3Fe(CN)6)，溶于100mL水中，混匀。B.3.5硒标准储备液取1000mg/L硒标准液1.0mL，5％盐酸溶液（B.3.2）定容至1000mL，此储备液浓度为1mg/L。B.4仪器主要有：1)原子荧光光度计，应符合GB/T21191的规定，配备硒的元素灯；8DB45/T2578—20222)电热板或微波消化器；3)分析天平，精度为1mg；4)pH计：精度为0.01；5)实验室常用设备。B.5分析步骤B.5.1试样制备粮食：试样用水洗三次，于60℃烘干，粉碎，储于塑料瓶内，备用。蔬菜及其他植物性食物：取可食部用水洗净后用纱布吸去水滴，打成匀浆后备用。其它固体试样：粉碎，混匀，备用。液体试样：混匀，备用。总硒测定试样制备：称取0.500xg～2.00xg（精确至0.001g）试样，液体试样吸取1.00mL～10.00mL，置于50mL三角瓶内，加20.0mL混合酸及几粒玻璃珠，盖上表面皿冷消化过夜。次日于电热板上加热，并及时补加混合酸。当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。冷却，再加5mL6mol/L盐酸，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，以完全将六价硒还原成四价硒。冷却，转移定容至25mL容量瓶中。同时做空白试验。无机硒测定试样制备：准确称取试样0.500xg～2.00xg（精确至0.001g），液体试样吸取1.00mL~10.00mL，粉碎后置于150mL三角瓶中，加入25mL超纯水，置70℃水浴振荡提取30min，再经超声波提取20min，然后在4000r／min条件下离心15min或用定量滤纸过滤，残渣重复1～2次，合并上清液或滤液，用环已烷萃取3～5次（必要时可增加环已烷用量及萃取次数分离出水相，在70℃水浴上蒸发至约5mL～10mL，按上述总硒测定试样进行处理。同时做空白试验。B.5.2待测试样制备取10.0mL试样消化液置于15mL比色管中，加浓盐酸2.0mL，铁氰化钾溶液(100g/L)1.0mL，混匀待测。B.5.3标准曲线的制作用5％盐酸逐级稀释标准储备液（B.3.5最后配制成浓度为1μg/L、2μg/L、4μg/L、6μg/L、10μg/L的硒标准系列溶液（现配现用）。B.5.4测定B.5.4.1仪器参考条件屏蔽气流速：800mL/min；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时间：1s；读数时间：15s；加液时间：8s；进样体积：0.5mL。B.5.4.2进样测定将制备好的试样导入原子荧光光度计中，按照与绘制校准曲线相同仪器工作条件进行测定。如果被测硒元素浓度超过校准曲线浓度范围，应稀释后重新进行测定。同时，将制备好的空白试样导入原子荧光分光光度计中，按照与绘制校准曲线相同仪器工作条件进行测定。B.6结果计算与表示9DB45/T25