《甘薯及加工薯渣中多糖分离提取技术规程》

Q/LB.□XXXXX-XXXX甘薯及加工薯渣中多糖分离提取技术规程范围本文件规定了原理、材料与试剂、仪器、试样制备、工艺流程、操作步骤、甘薯多糖含量测定、精密度、测试报告等内容。本文件适用于甘薯及加工薯渣中多糖的分离提取。规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。原理试样经浸提、过滤、浓缩、醇沉、离心、复溶、脱蛋白、冻干后得到甘薯多糖。材料与试剂甘薯。无水乙醇、90%乙醇、丙酮、无水乙醚、葡萄糖、浓硫酸、三氯甲烷、正丁醇、苯酚，均为分析纯。木聚糖酶。仪器超微粉碎机、电子天平、超声波清洗器、离心机、真空干燥箱、冻干机、紫外-可见分光光度计、高效液相色谱仪。试样制备甘薯粉末将新鲜甘薯洗净，削皮切细丝，放到60℃的干燥箱内连续烘干4h，完全干燥后，使用超微粉碎机将其完全粉碎，过80目筛，装袋备用。甘薯渣粉末将甘薯渣洗去淀粉，放到60℃的干燥箱内连续烘干4h，完全干燥后，使用超微粉碎机将其完全粉碎，过80目筛，装袋备用。工艺流程甘薯及加工薯渣→干燥、粉碎→超声浸提→过滤→滤液浓缩→醇沉、离心→沉淀复溶→脱蛋白→水层醇沉→离心、洗涤沉淀→干燥→粗多糖。操作步骤热水浸提法取干燥粉碎好的甘薯粉XXg，先用80℃去离子水浸泡4h，料液比为1:15，此过程重复两次。浸提完成后收集滤液。滤液浓缩后用90%乙醇醇沉，将离心（5000r/min，10min）得到的沉淀用去离子水复溶，Sevag法除去蛋白后，收集溶液并冻干，即为甘薯粗多糖。超声波辅助法取干燥粉碎好的甘薯粉XXg，以料液比1:15，浸提温度40℃，浸提时间60min，超声功率350W进行超声浸提多糖，此过程重复两次。浸提完成后收集滤液。滤液浓缩后用90%乙醇醇沉，将离心（5000r/min，10min）得到的沉淀用去离子水复溶，Sevag法除去蛋白后，收集溶液并冻干，即为甘薯粗多糖。酶提取法取干燥粉碎好的甘薯粉XXg，以料液比1:15，浸提温度40℃，浸提时间60min，木聚糖酶添加量为0.25%进行甘薯多糖的提取。浸提完成后收集滤液。滤液浓缩后用90%乙醇醇沉，将离心（5000r/min，10min）得到的沉淀用去离子水复溶，Sevag法除去蛋白后，收集溶液并冻干，即为甘薯粗多糖。甘薯多糖含量测定标准曲线的绘制准确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品1g,溶解稀释后定容于100mL容量瓶中,配成10g/L的标准贮备液,再精密量取贮备液1mL定容至100mL的容量瓶中,配成0.1g/L的葡萄糖标准液。精密移取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL的葡萄糖标准液于25mL的具塞刻度试管中，加蒸馏水补至2.0mL,然后加入6%的苯酚溶液1.0mL，摇匀,并迅速加入浓硫酸溶液5.0mL,充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，加热15min,取出后冷却至室温,于490nm波长下测其OD值，以多糖含量为横坐标,光密度值为纵坐标,得出标准曲线方程。样品测定吸取2.0mL适当浓度的甘薯多糖提取液,并以其中的一支试管加入2.0mL的蒸馏水作为空白对照，接着向各个试管中加入1.0mL6%的苯酚溶液混匀后并立即加入5mL浓硫酸,充分振荡后迅速浸入沸水浴中准确煮沸保温15min后取出，并冷却至室温后于490nm波长下测定吸光度值，平均测定3次，取平均值。 ω=m1m2×100% (式中：ω——甘薯粗多糖提取率；m1——多糖的质量，单位为mg；m2——样品的质量，单位为mg。测定次数同-试样需进行两次测定。空白试验用相同步骤及相同量的所有试剂,但不加试样进行空白试验。精密度在重复性条件下获得的两侧独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。测试报告测试报告需说明：测试样品所需的所有有关信息；若已知采