HE4的临床应用课件

新的卵巢癌标志物

HE4的临床应用第1页，共56页。主要内容第一部分：概述1、肿瘤标志物的定义、分类2、肿瘤标志物的实验室检测3、肿瘤标志物检测的应用原则第二部分：HE4的临床应用1、卵巢癌研究现状2、HE4的生物学特性3、HE4临床应用进展3、HE4参考值调查及应用评价第2页，共56页。思考题1、肿瘤标志物的定义2、请写出敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值的计算公式3、HE4第3页，共56页。一般肿瘤细胞在癌前病变时，会产生表达肿瘤异常蛋白质，多数肿瘤从癌前病变发展到0.5cm以上的占位性病变需要5～10年的时间。如果能够在这段时间内运用肿瘤标志物检测技术，早期检测到患者血液中肿瘤所表达的异常蛋白质，就可以早期发现、早期诊断，并获得早期治疗的良好效果。概述

第4页，共56页。人们对肿瘤标志物的检测寄予了极大的希望。那么肿瘤标志物测定能否达到早期诊断的目的？能否对一般人群进行筛查？其临床意义到底有多大？评价有多高？目前对肿瘤标志物在肿瘤诊断中的作用认识和评价不一致。概述

第5页，共56页。肿瘤标志物（tumormarker，TM）是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和/或升高的,反映肿瘤存在和生长的一类物质，它包括蛋白质、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因产物等。TM存在于肿瘤患者的血液、体液、细胞或组织中，可用生物化学、免疫学及分子生物学等方法测定，且对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、观察疗效、监测复发以及预后评价具有一定的价值。肿瘤标志物----定义第6页，共56页。肿瘤标志物----历史1846年本-周蛋白1940年酸性磷酸酶1960年免疫测定法1963年甲胎蛋白1965年癌胚抗原1975年单克隆抗体1980年CA125，PSA，糖类抗原1970-1980年肿瘤基因及抑癌基因2001年芯片，神经网络，多参数分析，生物传感器，等EleftheriosP.Diamandis,etal.TumorMarkers:Physiology,Pathobiology,Technology,andClinicalApplications.AACCPress.2002:p4.第7页，共56页。1978年Herberman在美国国立癌症研究所召开的人类肿瘤免疫诊断会上提出了TM的概念1979英国第7届肿瘤发生生物学和医学会议TM被确认并应用临床

肿瘤标志物----历史第8页，共56页。肿瘤标志物----分类

1、按肿瘤标志物的来源2、按肿瘤标志物本身的化学性质和免疫学特性3、按存在部位分类由于肿瘤标志物的来源和性质非常复杂至今尚未有一个统一的分类方法，目前的分类方法有：第9页，共56页。１、由肿瘤细胞分泌的标志物

２、宿主反应标志物

1、肿瘤的特异性标志物，指仅有某一种肿瘤所产生的特异性物质。2、肿瘤辅助标志物，在一类组织类型相似而性质不同的肿瘤发生时，其水平都有升高。肿瘤标志物----分类：按来源分类第10页，共56页。１.由肿瘤细胞分泌的标志物

１）分化抗原标志物２）胚胎抗原标志物（AFP、CEA等）３）糖脂或糖蛋白类(CA19-9、CA15-3、CA242等）。４）同工酶类标志物（NSE,PAP,CK-BB等）5）激素类标志物（HCG,ACTH等）6）肿瘤相关抗原（PSA，TPA等）7）基因类标志物（P53、C-MYC、BCL－2）8）其它：多胺、唾液酸等肿瘤标志物----分类：按来源分类第11页，共56页。２.宿主反应标志物

血清铁蛋白、免疫复合物、同工酶、白细胞介素受体、肿瘤坏死因子等

SF、β２-MG、IL-2R、TNF肿瘤标志物----分类：按来源分类第12页，共56页。蛋白类标志物糖类标志物酶类标志物激素类标志物基因类标志物肿瘤标志物----分类：按性质分类第13页，共56页。临床常用肿瘤标志物甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA）β2-微球蛋白（β2-MG）铁蛋白（SF）细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）鳞状上皮癌相关抗原（SCC-Ag）前列腺特异抗原（PSA）组织多肽抗原（TPA）糖类抗原（CA50、CA125、CA15-3、

CA199、CA242、CA72-4）神经元特异性烯醇化酶（NSE）前列腺酸性磷酸酶（PAP）激素类肿瘤标志物(β-HCG、ACTH)蛋白类肿瘤标志物糖脂类肿瘤标志物酶及同工酶类肿瘤标志物激素类肿瘤标志物第14页，共56页。肿瘤标志物----分类：按存在部位分类组织肿瘤标志物血浆/血清肿瘤标志物第15页，共56页。组织肿瘤标志物：位于细胞膜上或细胞内1、分化标志,激素受体：如ER,PR2、增殖标志：端粒酶，生长因子及其受体，CD抗原3、转移潜在性标志：蛋白酶，基因产物，粘附因子4、癌基因及抗癌基因：myc，H-ras，P53，等肿瘤标志物----分类：按存在部位分类第16页，共56页。血浆/血清肿瘤标志物1、胚胎类抗原；如CEA,AFP2、肿瘤相关糖脂及糖蛋白糖决定簇：CA19-9，CA242上皮粘蛋白：CA15-3糖蛋白：CA125,PSA3、激肽，酶，蛋白等激肽：ACTH，GH酶：NSE蛋白：B-微球蛋白，CYFRA-21-1肿瘤标志物----分类：按存在部位分类第17页，共56页。根据示踪剂的不同可分为1、化学发光免疫分析2、放射免疫分析3、酶免疫分析：4、金标记免疫分析(免疫学抗原抗体反应+物理吸附)基本原理：示踪物的标记技术+免疫学技术肿瘤标志物---实验室检测：标记免疫学第18页，共56页。标记免疫技术----酶免法（EIA）优点费用较低，应用较广固相分离干扰小无放射污染试剂有效期长有酶标仪即可开展缺点需要孵育结果受环境及人为因素影响第19页，共56页。标记免疫技术----发光法优点标记物分子小，稳定性好，发光强度高，时间长高灵敏度,最高检测限值可达10-15g/ml-10-18g/ml标准化程度高,快速、简便、重复性好无放射污染缺点仪器昂贵检测成本高封闭系统，开展项目受试剂供应的制约第20页，共56页。其它检测技术：蛋白芯片/基因芯片具有高通量、大信息量的特点主要应用于药物筛选，基因测试，基因定位等方面蛋白芯片在临床应用尚需时日产业化仍然有技术障碍目前基因芯片主要用于研究第21页，共56页。免疫测定法的临床特性敏感性阳性结果在肿瘤患者中的比例

敏感性=特异性在非肿瘤患者个体中(如健康人或良性疾病患者),阴性实验结果的比例

特异性=真正阳性结果数患病人群总数真正阴性结果数对照组人群总数第22页，共56页。免疫测定法的临床特性预测值（PredictiveValue）

阳性预测值：在阳性结果的病人中，癌症存在的可能性

PPV＝

阴性预测值：在阴性结果病人中,非癌症存在的可能性

NPV=真正的阳性结果数/阳性结果总数真正的阴性结果数/阴性结果总数第23页，共56页。浓度肿瘤患者真阴性真阳性界值假阳性假阴性正常人群敏感性=TP/(TP+FN)特异性=TN/(TN+FP)免疫测定法的临床特性阳性预测值=TP/(TP+FP)阴性预测值=TN/(TN+FN)第24页，共56页。理想的肿瘤标志物特异性100%灵敏度100%器官特异性与肿瘤大小或分期有关能进行疗效监测与预后有关具有可靠的预测价值

陈允硕.中华医学检验杂志

2000年;23(1)至今没有任何肿瘤标志物能满足所有这些标准但如正确合理使用，仍有很大临床价值，关键是要正确评价和应用。第25页，共56页。影响TM免疫测定结果的因素体内因素：--------肝、肾功能异常致AFP，CEA升高--------强烈的治疗作用(手术、放疗、化疗)和连续的细胞死亡--------肿瘤部位供血障碍--------药物--------存在嗜异性抗体--------抗原异质性体外因素--------血液的稀释作用--------污染：唾液污染致SCC升高；溶血致NSE升高试剂盒因素--------使用的抗体作用位点不同--------HOOK效应陈允硕.中华医学检验杂志

2000年,23(1).第26页，共56页。肿瘤标志物临床检测的基本原则肿瘤标志物的检测能否达到早期诊断的效果？在人群中进行普查或筛查的价值？其临床意义如何解释？怎样规范与合理应用？目前存在诸多争议。2002年至2004年时，中华医学会检验医学分会肿瘤标志物专家委员会分别召开3次专家研讨会，起草制定了“肿瘤标志物临床检测的基本原则（建议稿）。第27页，共56页。TM临床检测的基本原则1、TM对肿瘤的辅助诊断价值：2、TM的器官定位价值：3、TM在判断肿瘤的大小和临床分期的价值：4、TM在肿瘤监测中的价值：5、TM的联合检测原则：6、同一患者在治疗前后及随访中，应采用同一种方法和试剂；在更换检测方法和试剂时，应作比对。7、应用TM对高危人群进行筛查时应遵循的原则：

第28页，共56页。TM临床检测的基本原则

治疗后TM浓度变化，常有三种类型：（1）TM浓度下降到参考范围，提示肿瘤治疗有效。（2）TM浓度下降但仍持续在参考范围以上，提示有肿瘤残留和/或肿瘤转移。（3）TM浓度下降到参考范围一段时间后，又重新升高，提示肿瘤复发或转移。TM浓度变化对肿瘤的疗效判断价值：第29页，共56页。疗效观察可参照下列标准：无效：TM浓度与治疗前相比下降＜50％改善：TM浓度与治疗前相比下降＞50％有效：TM浓度与治疗前相比下降＞90％显效：TM浓度下降至临界值以下。TM临床检测的基本原则第30页，共56页。术后肿瘤标志物水平的变化02550751001251501752002252500369121518212427术后时间（月）患者D患者C患者B患者A正常水平手术

化疗31肿瘤标志物水平第31页，共56页。TM临床检测的基本原则TM的定期随访原则：恶性肿瘤治疗结束后，应根据病情对治疗前升高的TM作定期随访监测。不同的TM半寿期不同，所以监测的时间和周期也不同。

第32页，共56页。

主要肿瘤标志物经手术后半寿期

肿瘤标志物

半寿期

参考范围CEA3～4天＜5ng/mLCA19-98.5天<37UmlAFP4～5天<10.9ng/mLPSA2.3～3.2天<4ng/mLHCG12～20小时<2.9mIU/mLCA15-38～15天<28U/mlCA1254.8天<35U/mlSCC20分<1.5μg/LCYFRA21-14天<3.3ng/mL

第33页，共56页。TM的定期随访原则：大部分国内外专家建议：治疗后6W做首次测定；3年内每3个月测定一次；3至5年每半年测定一次；5至7年每年测定一次；随访中如发现有明显升高，应1月后复测一次，连续2次升高，可预示复发或转移。此预示常早于临床症状和体征，而有助于临床及时处理。第34页，共56页。第二部分：HE4的临床应用第35页，共56页。卵巢癌研究现状（1）占女性生殖系统肿瘤的30%，是当今引起女性死亡率最高的生殖系统肿瘤70%的肿瘤患者一经诊断已到晚期，被称为沉默杀手“SilentKiller”手术、化疗难以治愈即使暂时缓解亦常在2-3年后复发五年生存率50%反复手术、化疗严重影响患者生存质量第36页，共56页。主要原因卵巢位于盆腔深部，且卵巢癌早期无症状，初诊时约2/3已属晚期（III~IV期）；缺乏简便易行、特异的早期诊断方法；对卵巢恶性肿瘤的发生学所知甚少，对不同类型细胞的生物学特性认识不足，而且病种繁多，分类复杂，致使治疗不易掌握；目前治疗卵巢癌的手段（手术，化疗，放疗等）疗效较差。卵巢癌研究现状（1）第37页，共56页。癌 新发 死亡

宫颈470,000 230,000

卵巢 190,000 114,000内膜188,000 45,000世界范围统计资料第38页，共56页。卵巢癌患者的分期HeintzAPM,etal.FIGOAnnualReportontheResultsofTreatmentinGynecologicCancers,vol.24.2000:107-138.第39页，共56页。卵巢癌:生存率与分期HolschneiderCH,BerekJS.SeminSurgOncol.2000;19:3-10.第40页，共56页。卵巢癌研究现状（2）一个难题：无成熟的早期诊断方法；二个70%：确诊时约70%已属晚期；治疗后即使是已达到临床完全缓解的病人仍有70%最终将复发；三个进展：手术病理分期、肿瘤细胞减灭术、紫杉醇+卡铂化疗方案四个焦点：保留生育/生理功能、早期的辅助治疗、晚期的治疗、复发的诊断和治疗第41页，共56页。卵巢癌临床处理三大进展

手术病理分期：预后及治疗方案的选择肿瘤细胞减灭术：中晚期卵巢癌手术原则紫杉醇+铂类作为一线化疗方案：反应率比CP方案高10-15%五年生存率：30%上升为50%长期缓解率:25-35%第42页，共56页。肿瘤诊断的三大支柱图像诊断：B超、CT、MRI、PET/CT血液与体液检测细胞学与组织学诊断卵巢癌研究现状（3）卵巢癌的早期诊断一直是卵巢癌研究中最具挑战性的课题第43页，共56页。1994年在NIH召开的卵巢癌研讨会上，专家们首次提出联合应用盆腔检查、血清CA125测定、阴道超声对遗传性卵巢癌家族的高危人群进行每年一次的筛查。由于人群中卵巢癌的发病率低，即使应用高特异性的检测方法，阳性预测值仍然很低，故尚难在普通人群中实施筛查。目前，卵巢癌筛查的目标人群主要是遗传性卵巢癌家族的高危人群和50岁以上的绝经妇女。卵巢癌研究现状（4）

----------卵巢癌的筛查

第44页，共56页。血清肿瘤标志物的检测CA125是应用最多的卵巢癌血清肿瘤标志物，特别是最常用的监测卵巢癌复发的指标。Ⅰ期卵巢癌患者仅有约50%＞35u/ml，监测复发的敏感性、特异性、阳性预测值分别为79％、95％、100％。1％健康妇女、3％良性卵巢肿瘤、6％非卵巢相关的良性疾病可有血清CA125水平升高。第45页，共56页。为卵巢癌检查常用标志物水平升高见于30-50%I期和>80%晚期卵巢癌病人水平升高也见于卵巢癌临床前期无症状患者CA125与超声检查联合使用能提高检测特异性和阳性预测值CA125的局限性良性妇科疾病患者也有CA125水平升高某些其它恶性肿瘤患者也有CA125水平升高检测I期卵巢癌的灵敏度较低CA125第46页，共56页。其它CA125升高的情况良性平滑肌瘤子宫内膜异位原发性免疫缺陷病怀孕出血性囊肿肝病或充血性憩室炎恶性结肠癌乳腺癌胰腺癌胆管癌肝癌肺癌子宫内膜癌第47页，共56页。CancerAntigen125（

CA125）

Bast等人在1981年用卵巢癌细胞株OVCA433免疫小鼠，通过杂交瘤技术获得单克隆抗体（monoclonalantibody，McAb）OC125，该抗体可识别卵巢癌相关抗原CA125，用这种单克隆抗体制备的试剂盒随后用于卵巢癌的临床监测。2001年Lloyd研究小组克隆了CA125抗原，证实CA125是含有5797个碱基对的跨膜糖蛋白MUC16，定位于染色体19p13.2区。正常人血清CA125（