1.2纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得第1课时课件高二下学期生物浙科版选择性必修3

第一章

发酵工程第二节

纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得素养目标

理解微生物的选择培养和计数的原理。生命观念

开展稀释涂布平板法的操作和土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验。科学探究教学重难点举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。课程导入单菌落是如何纯化分离出来的？其中有哪些需要我们注意的事项？由不同微生物个体繁殖后代组成的大片菌落单菌落：由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团?

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化在固体培养基上采用划线或稀释涂布的方法接种，可获得单菌落

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化平板划线法原理：单个细胞微生物群单个菌落连续划线分散生长繁殖三种灼烧的目的1.蘸取菌液前灼烧2.每次划线前灼烧3.划线操作结束后灼烧避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。杀死上一次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化平板划线法实验操作1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞3、将试管口通过火焰4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液5、将试管通过火焰，并塞上棉塞6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连8、将平板倒置放入培养箱中培养。

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化注意事项第1区划线接种环灭菌第2区划线接种环灭菌第3区划线接种环灭菌接种环灭菌接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次划线首尾不能相接每次划线前接种环进行灭菌划线后,培养皿倒置培养12345平板划线法注意事项

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化稀释涂布平板法先将菌液进行梯度稀释不同稀释度的菌液各取0.1ml，加在固体培养基表面用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养稀释度适当的培养基表面能得到单菌落注意：分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL1mL

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化稀释涂布平板法步骤①铲取土样，将样品装入纸袋中②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。1mL1ⅹ1090mL无菌水1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL9mL无菌水1mL③取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化稀释涂布平板法步骤④取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。⑤将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑥将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑦用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化比较平板划线法稀释涂布平板法主要步骤接种环在固体培养基表面连续划线系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种工具接种环涂布器能否用于计数不能计数可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板共同点都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化活动：接种、培养并分离酵母菌目的要求用平板划线法或稀释涂布平板法接种酵母菌。用液体培养基大量扩增酵母菌。方法步骤制作平板：对两个直径为90mm的培养皿进行标记，分别向其中倒入未凝固的固体培养基，使培养基铺满培养皿底部，厚度约2mm。标记：班级、姓名、日期、接种稀释度、LB或尿素。（底部或者侧边）

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化活动：接种、培养并分离酵母菌平板划线法步骤：场所：超净工作台上，在酒精灯旁。在酒精灯火焰上从接种环的圆环处依次向上灼烧灭菌。为避免灭菌后接种环的高温烫死菌种，应在挑取菌种前将接种环贴在培养器内壁上降温。用接种环蘸取菌液进行接种:连续平行划线，或扇形划线，或多次连续平行划线接种环灼烧灭菌平板倒置，置于25℃，培养24h。注意：初次划线时可参照培养皿底部的标记点进行划线，以保证有最好的划线分离效果。

采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化讨论1.判断液体培养基成功接种酵母菌的依据是什么？2.如何判断是否分离出酵母菌的单菌落？判断依据是什么？3.在固体培养基表面涂布的菌种是否出现形态、颜色不同的单菌落？你认为出现该现象的原因是什么？4.仅从菌落特征是否能够认定你分离出了酵母菌？怎样进行进一步的鉴定？与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的、最小菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染。否。①挑取单菌落接入糖水中,培养一段时间检查是否能产生酒味②接入面团中观察能否发面;③挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别。

稀释涂布平板法和显微计数法可测定微生物的数量稀释涂布平板法计数原则选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。

稀释涂布平板法和显微计数法可测定微生物的数量稀释涂布平板法计数原则选择30-300个菌落的平板进行计数；每个稀释度至少取3个平板取其平均值；统计的菌落往往比活菌的实际数目低；统计的结果一般用菌落数而不是活菌数；恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。分析实验结果时，要考虑重复组结果是否接近，如果相差太大，意味着操作有误，需重新实验。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×MM代表稀释倍数；C代表某一稀释度下3个平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)

稀释涂布平板法和显微计数法可测定微生物的数量显微计数法血细胞计数板专用盖玻片

稀释涂布平板法和显微计数法可测定微生物的数量显微计数法利用特定血细胞计数板，在显微镜下观察计数一定体积的样品中微生物的数量。

稀释涂布平板法和显微计数法可测定微生物的数量显微计数法注意事项：1.先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去。2.滴加菌液时避免菌液滴到盖玻片上，还要防止产生气泡。3.计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4.对压线细胞计数时，数上不数下，数左不数右。5.为减小误差，应对同一红细胞计数区中的细胞进行3次计数后取平均值。6.血球计数板使用完后，用自来水冲洗，洗后自行晾干或用吹风机吹干。7.血细胞计数板计数时不能区分死菌和活菌。课堂练习1.下列有关倒平板操作的叙述，错误的是(

)A.将灭过菌的培养皿放在洒精灯火焰旁的桌面上备用B.待锥形瓶中的培养基冷却至50℃左右才可倒平板C.待平板冷却凝固后,需要倒过来放置备用D.倒完平板后,锥形瓶中剩余的培养基需经过高压蒸汽灭菌后才能清理掉D解析：倒平板全过程要严格防止外来杂菌的入侵,酒精灯火焰旁属于无菌环境,因此,灭过菌的培养皿要放在酒精灯火焰旁的桌面上备用,A正确;配制好的培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌后,待培养基冷却至50℃左右倒平板,若温度偏低则培养基易凝固,若温度太高则烫手,B正确;等待培养皿冷却凝固后需要倒过来放置,防止冷凝水滴入培养皿造成污染,C正确;倒完平板后,锥形瓶中剩余的培养基是已经灭过菌的,不需要再灭菌,D错误。课堂练习2.自然界中的微生物几乎都是混杂在一起生活的，平板划线法和稀释涂布平板法是分离并纯化微生物的常用方法。下列相关叙述错误的是()A.分离微生物前一般需要将菌液进行梯度稀释B.在酒精灯火焰旁进行接种，可防止杂菌污染C.利用同一浓度的菌液都可以分离出来单菌落D.使用平板划线法或稀释涂布平板法接种的平板在培养时都应倒置C解析：分离微生物的时候由于菌液浓度较高，往往需要将菌液进行梯度稀释，A正确；酒精灯火焰旁有一个无菌区域，在酒精灯火焰旁进行接种，可防止杂菌污染，B正确；如果利用同一种高浓度的菌液，平板划线法可通过连续划线进行稀释，最终得到单菌落，但稀释涂布平板法可能会因为菌液浓度过高无法分离出单菌落，C错误；使用平板划线法或稀释涂布平板法接种的平板在培养时都应倒置，以防止冷凝水滴到培养基上，D正确。课堂练习3.在进行微生物计数时，下列情况会造成统计结果偏大的是()A.利用显微镜计数法计数时，滴加菌液时产生了气泡B.利用显微镜计数法计数时，滴加菌液后再盖盖玻片C.使用稀释涂布平板法计数时，涂布器经火焰灼烧后直接进行涂布D.使用稀释涂布平板法计数时，平板上有不少菌落是两个细胞连在一起形成的B解析：利用显微镜计数法计数时，滴加菌液时产生了气泡，会导致实际所测的菌液体积减少，造成统计结果偏小，A错误；利用显微镜计数法计数时，若先滴加菌液，再盖盖玻片，则盖玻片可能由于菌液表面的张力作用而不能严密地盖到计数板上，从而导致计数室内的菌液体积增多，造成统计结果偏大，B正确；使用稀释涂布平板法计数时，涂布器经火焰灼烧后直接进行涂布会杀灭部分微生物，导致统计结果偏小，C错误；使用稀释涂布平板法计数时，平板上有不少菌落是两个细胞连在一起形成的，统计时会按一个菌落计数，造成统计结果偏小，D错误。课堂练习4.刚果红能与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素水解后形成的纤维二糖和葡萄糖等发生这种反应，纤维素被纤维素分解菌分解后，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈。某同学利用刚果红配制培养基，分离土壤中能分解纤维素的微生物并观察菌落数。下列叙述正确的是()A.用平板划线法接种后统计平板上的菌落数，统计值比活菌实际数低B.透明圈出现的原因是菌落周围的纤维素被微生物产生的纤维素酶分解C.应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化D.以纤维素为唯一碳源且加入刚果红的培养基从功能上分属于选择培养基B解析：平板划线法不能用于菌落的计数，A错误；刚果红染料能与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素分解菌产生的纤维素酶分解后，红色复合物消失，在菌落周