莨菪烷类抗胆碱药物的分析-20200217

第十三章莨菪烷类抗胆碱药物的分析沈阳药科大学药学院80K药物分析莨菪烷类药物的结构与性质1鉴别试验2特殊杂质与检查3含量测定4目录CONTENTS第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析莨菪烷类药物的结构与性质1第一节CONTENTS第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、典型药物莨菪烷生物碱是从茄科植物如颠茄、莨菪和白曼陀罗等中提取的具有对M受体阻断作用的生物碱。这类生物碱都是由莨菪醇与不同有机酸所成的酯。典型药物结构：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析硫酸阿托品（AtropineSulfate）一、典型药物典型药物结构：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析氢溴酸后马托品（Homatropine

Hydrobromide）硫酸莨菪碱（Hyoscyaminesulfate）一、典型药物典型药物结构：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析氢溴酸山莨菪碱（Anisodamine

Hydrobromide）氢溴酸东莨菪碱（Scopolamine

Hydrobromide）一、典型药物典型药物结构：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析甲溴东莨菪碱（Methscopolamin

Bromide）丁溴东莨菪碱（Scopolamin

Butylbromide）二、主要理化性质第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析水解性

本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)，反应式如下：阿托品莨菪醇莨菪酸二、主要理化性质碱性阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如阿托品的pKb1为4.35。旋光性氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为-24ο至-27ο，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为外消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析鉴别试验2第二节CONTENTS第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、Vitali鉴别反应Vitali鉴别反应系托烷生物碱类的特征反应。原理：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、Vitali鉴别反应Vitali鉴别反应系托烷生物碱类的特征反应。原理：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析托烷生物碱水解莨菪酸发烟硝酸

三硝基衍生物KOHaq（C2H5OH）固体KOH有色的醌型产物（深紫色）ChP氢溴酸山莨菪碱的鉴别：取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇2～3滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。二、与硫酸-重铬酸钾反应药物水解后生成莨菪酸，可与硫酸-重铬酸钾在加热的条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛而逸出苦杏仁的臭味。反应式如下：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析三、与生物碱显色剂或沉淀剂反应生物碱在酸性溶液中与重金属盐或大分子酸生成难溶性盐、复盐或配合物沉淀。不同沉淀剂与生物碱反应的灵敏度不同。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析生物碱沉淀试剂反应条件及结果碘化铋钾试液橙色或棕红色沉淀碘化钾碘试液棕色或棕褐色沉淀碘化汞钾试液白色或淡黄色沉淀三硝基苯酚试液结晶性沉淀并有特定熔点硅乌酸试液白色或淡黄色或黄棕色沉淀磷乌酸试液淡黄色沉淀三、与生物碱显色剂或沉淀剂反应生物碱在酸性溶液中与重金属盐或大分子酸生成难溶性盐、复盐或配合物沉淀。不同沉淀剂与生物碱反应的灵敏度不同。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析ChP氢溴酸东莨菪碱的鉴别：取本品约10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中，加氨试液使成碱性后，加氯仿5ml，摇匀，分取氯仿液，置水浴上蒸干，残渣加二氯化汞的乙醇溶液（取二氯化汞2g，加60%乙醇使成100ml）1.5ml，即生成白色沉淀（与阿托品及后马托品的区别）。三、光谱鉴别法紫外光谱法

一般通过比较药物的λmax、λmin或吸收光谱的一致性进行鉴别，若不止一个峰（谷），也可比较其吸光度或吸光系数的比值来鉴别。ChP丁溴东莨菪碱的鉴别：取本品，加0.01M盐酸溶液并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，测定其紫外吸收光谱，在252nm、257nm与264nm波长处有最大吸收。红外光谱法

CHP收载的原料药一般都采用红外光谱法进行鉴别。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析五、色谱法一般用于已知生物碱的鉴别，主要有TLC、HPLC、GC、PC等，TLC法最为常用。注意：

1）用硅胶吸附剂时，需在流动相或固定相中加碱，使生物碱游离或中和硅胶表面的弱酸性，以防拖尾。

2）单体生物碱可用其化学对照品为阳性对照物；中药中的生物碱宜用化学对照品和对照药材同时对照。

3）用保留值或相对保留值定性，以供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间的一致性作为鉴别依据。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析六、硫酸盐和溴化物的反应为了改善莨菪烷类生物碱药物的水溶性和稳定性，它们大都制成硫酸盐或氢溴酸盐。所以，它们的水溶液则分别显硫酸盐或溴化物的鉴别反应。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析ChP氢溴酸东莨菪碱的鉴别：

1）取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性，滴加硝酸银试液，即生成淡黄色凝乳状沉淀，分离，沉淀能在氨试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶；

2）取供试品溶液，滴加氯试液，溴即游离，加氯仿振摇，氯仿层显黄色或红棕色。特殊杂质与检查3第三节CONTENTS第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查氢溴酸东莨菪碱是从茄科植物颠茄、莨菪、白曼陀罗中提取得到的莨菪碱的氢溴酸盐。我国是从茄科植物曼陀罗的干燥品（洋金花）中提取东莨菪碱后制成氢溴酸盐。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析洋金花粗粉乙醇/渗漉渗漉液减压蒸馏浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取总生物碱Na2CO3,CHCl3/分离东莨菪碱HBr/成盐氢溴酸东莨菪碱（粗品）75%C2H5OH/精制成品生产和贮藏过程中可能引入的有关物质可通过酸度、其他生物碱和易氧化物检查进行控制。一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查酸度东莨菪碱的碱性很弱，对石蕊试纸几乎不显碱性反应。氢溴酸东莨菪碱为强酸弱碱盐，通过其5%的水溶液pH为4.0-5.5可控制酸性杂质。易氧化物主要检查生产过程中可能引入的杂质阿扑东莨菪碱（脱水东莨菪碱）及其它含有不饱和双键的有机物质。它们的紫外吸收最大波长红移，可使高锰酸钾溶液褪色。ChP氢溴酸东莨菪碱易氧化物的检查：

取本品0.15g，加水5ml溶解后，在15-20℃加高锰酸钾滴定液（0.02M）0.05ml，10min内红色不得完全消失。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、氢溴酸东莨菪碱中有关物质的检查其他生物碱本品水溶液加入氨水试液不得发生混浊。当有其它生物碱存在时，则易产生混浊。ChP氢溴酸东莨菪碱其他生物碱的检查：

取本品0.10g，加水2ml溶解后，分成两等份：一份中加氨试液2-3d，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发生瞬即消失的类白色浑浊。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析存在其他生物碱合格本品水溶液+氨试液混浊不混浊二、硫酸阿托品中有关物质的检查硫酸阿托品为消旋体，无旋光性，而莨菪碱为左旋体，可以利用旋光性对莨菪碱杂质进行检查。ChP用HPLC法检查其中有关物质，通过峰面积的比值及保留时间来控制杂质限度。ChP硫酸阿托品中莨菪碱的检查：

取本品按干燥品计算，加水溶解并制成没1ml中含0.5mg的溶液，照旋光度测定法测定，旋光度不得过-40°。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析含量测定4第三节CONTENTS第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析非水滴定法酸性染料比色法010203高效液相色谱法莨菪烷类抗胆碱药物的药理活性均较强，临床使用剂量较小，因此测定方法要专属、灵敏。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、酸性染料比色法此法是针对生物碱药物，在一定的pH条件下，可与某些酸性染料结合而呈色，进而可用分光光度法进行测量。此法样品用量少，灵敏度高。特别适用于少量供试品、尤其是小剂量药物制剂的定量分析。有一定专属性和准确度。基本原理：在适当pH的水溶液中，碱性药物（B）可与氢离子结合成阳离子（BH+），而一些酸性染料（如磺酸酞类指示剂等），如溴甲酚绿、溴麝香草酚蓝、溴甲酚紫、溴酚蓝等，可解离成阴离子（In-）；两种离子定量地结合，即生成具有吸收光谱明显红移的有色离子对（BH+In-），且可以被有机溶剂定量萃取，通过测定有机相中有色离子对的特征波长处的吸光度，即可进行碱性药物的含量测定。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析一、酸性染料比色法反应示意式：第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析也可将呈色的有机相经碱化（如加入醇制氢氧化钠），使与有机碱结合的酸性染料释放出来，测定其吸光度，在计算出碱性药物的含量。一、酸性染料比色法影响因素：1）水相最佳pH的选择只有选择合适的pH，使有机碱性药物均成阳离子（BH+），而同一pH条件下酸性染料电离足够的阴离子（In-），碱性药物才能定量生成离子对，并完全溶于有机溶剂中，而过量的燃料完全保留在水相中，才能保证定量的测定。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析pH过低抑制酸性染料的解离、使酸性阴离子浓度过低影响离子对的形成；pH过高，有机药物呈游离态，也抑制离子对的形成，因此须有一个最佳pH值存在，使离子对生成最有利。其选择方法一般根据药物与染料的pK值及水相与有机相的分配系数而定。一、酸性染料比色法影响因素：2）酸性染料及其浓度当用的酸性染料有溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、甲基橙等。第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析定量结合，产物溶解性好；可稍过量。一般认为对测定结果影响不大，只要量足够大就可以；但浓度过高的话就会形成严重的乳化层，且不易于除去，往往影响测定结果。一、酸性染料比色法影响因素：3）有机溶剂的选择当用的酸性染料有溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、甲基橙等。4）水分的影响

影响结果，脱水剂或滤纸除去水分5）酸性染料中的有色杂质

影响结果，先用萃取溶剂萃取除去第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析提取效率高，氯仿最理想；一般应选择对有机碱药物与酸性染料形成离子对萃取效率高、能与离子对形成氢键、不与或极少与水混溶的有机溶剂作为萃取溶剂。二、非水溶液滴定法第十三章莨菪烷类抗疟药物的分析

非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行的酸碱滴定测定法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、硫酸盐、磷酸盐以及有机酸碱金属盐类的含量。

硫酸是二元酸，在水溶液中可以发生二级解离，生成SO42-。但是冰醋酸非水介质中，只能发生一级解离，生成HSO4-,即只提供一个H+。所以硫酸盐类药物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氢盐，可用高氯酸滴定液直接滴定。(BH+)2

•SO42-+HClO4

→(BH+)•ClO4+(BH+)•HSO42-

硫酸阿托品与高氯酸反应的化学计量摩尔比为1:1。三、高效液相色谱法第十