DB37T 3113-2018 猪圆环病毒2型抗体胶体金快速检测技术规范

ICS65.020.30DB37DB37/T3113—2018猪圆环病毒2型抗体胶体金快速检测山东省质量技术监督局发布IDB37/T3113—2018本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准起草人：李俊、时建立、彭喆、吴晓燕、徐绍建、于江、孙文博、丛晓燕、朱晓琳、韩红、吴家强、杜以军、陈蕾、陈智、刘畅。1DB37/T3113—2018猪圆环病毒2型抗体胶体金快速检测技术规范本标准规定了猪圆环病毒2型(PorcineCircovirusType2,PCV2)的抗体胶体金试纸条制备方法及试纸条使用规范。本标准适用于猪圆环病毒2型的抗体快速检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语与定义3.13.2牛血清白蛋白。3.3硝酸纤维素膜。4材料及设备4.1主要仪器设备4.1.1微量移液器(最大量程分别为10μL、20μL、100μL、1000μL)。4.1.220000r/min低温高速离心机。2DB37/T3113—20184.1.5PVC板。4.1.8电子天平精度为：0.001g。4.2.1BSA:配制见附录A.1。4.2.3NC膜。4.2.6碳酸钾分析纯。4.2.7猪圆环病毒2型Cap蛋白。4.2.91×PBS溶液(pH值7.4):配制见附录A.3。4.2.10超纯水：符合GB/T6682,三级。4.2.110.1mol/LTris-HCL:配制见附录A.4。所有试剂均需提前经0.22μm无菌滤器滤过。即可。度为10μg/mL。5.3.2加入1/10体积的10%BSA溶液(终浓度1%为封闭液)封闭，混匀并静置15min。5.3.34℃,8000r/min离心20min3DB37/T3113—20185.3.4用原体积1/20且含有10%蔗糖的0.1mol/LTris-HCL(pH值8.5)储存液重新悬浮沉淀。5.4.1聚酯纤维膜(金标结合垫)用Tween-20,37℃浸泡30min。5.4.2玻璃纤维膜(样品垫)、NC膜用封闭液37℃浸泡30min。5.4.3用1×PBS溶液(pH值7.4)分别对金标结合垫、样品垫和NC膜洗3次，37℃干燥备用。5.5.2将纯化后的猪圆环病毒2型Cap蛋白稀释到1mg/mL,用喷膜仪按1μL/cm的喷涂量喷涂到5.5.3将羊抗兔(IgG)稀释到1mg/mL,用喷膜仪按1μL/cm的喷涂量喷涂到NC膜的对照线(C-胶板上。将检测卡平放在桌面上，将待检血清样品3滴～4滴(约80μL)加入加样孔(S)内，在室温内4DB37/T3113—20A.1牛血清白蛋白(BSA)(10牛血清白蛋白1灭菌超纯水定容至(规范性附录)试剂的配制%)氯金酸1g。灭菌超纯水定容至100mL。磷酸二氢钾(KH2P04):0.27g。磷酸氢二钠(Na2HPO4):1.42g。氯化钠(NaC1):8g。氯化钾(KCl):0.2g。加灭菌超纯水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH值至7.4,最后定容到1L。A.40.1mol/LTris-