《畜禽产品中兽药多残留高通量筛选检测 液相色谱-质谱质谱法》

ICS67.120

X04

团体标准

T/SZSXXXX—2020

畜禽产品中兽药多残留高通量筛选检测

液相色谱-质谱/质谱法

Highthroughputscreeningdetectionofveterinarydrugresiduesin

livestockandpoultryproductsbyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

（征求意见稿）

2020-XX-XX发布2020-XX-XX实施

深圳市深圳标准促进会发布

T/SZSXXXX-2020

畜禽产品中兽药多残留高通量筛选检测液相色谱-质谱/质谱法

1范围

本文件规定了畜禽产品中132种兽药（磺胺及菌增效剂类22种、氟喹诺酮类19种、苯并咪唑类

17种、大环内酯类9种、β-受体激动剂类15种、精神控制类10种、解热镇痛类17种、硝基咪唑类6

种、氨苯砜、抗球虫药类8种、抗病毒类5种、酰胺醇类抗生素3种）残留的液相色谱—质谱/质谱检

测方法。

本文件适用于猪肉、鸡肉、牛奶、鸡蛋中132种兽药残留量的筛查检测,其他动物源性食品可参照

执行。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品经EDTA和乙腈提取，再用MAS-Q盐包净化，液相色谱—串联质谱法检测。

5试剂和材料

注：以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水符合GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲醇，色谱纯。

5.1.2乙腈，色谱纯。

5.1.3甲酸，色谱纯。

5.1.4乙腈。

5.1.5乙二胺四乙酸二钠。

5.1.6柠檬酸。

5.1.7磷酸氢二钠。

1

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5.1.8盐酸。

5.1.9氢氧化钠。

5.1.10乙酸铵，色谱纯。

5.2溶液配制

5.2.10.1mol/L柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸（5.1.6），用水溶解，定容至1000mL。

5.2.20.2mol/L磷酸氢二钠溶液：称取28.41g磷酸氢二钠（5.1.7），用水溶解，定容至1000mL。

5.2.3Mcllvaine缓冲溶液：将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液（5.2.1）与625mL0.2mol/L磷酸氢

二钠溶液（5.2.2）混合，必要时用氢氧化钠或盐酸调节pH=4.0±0.05。

5.2.40.1mol/LNa2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.5g乙二胺四乙酸二钠（5.1.5）放入1625mL

Mcllvaine缓冲溶液（5.2.3）中，使其溶解，摇匀。

5.2.5乙腈水溶液：移取30mL乙腈（5.1.2），加入70mL水，混合均匀。

5.2.65mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵（5.1.10），用水溶解，定容至1000mL。

5.3兽药及相关化学品标准溶液

5.3.1按照兽药及相关化学品的性质，将132种兽药及相关化学品标准品分成A磺胺及菌增效剂类、B

氟喹诺酮类、C苯并咪唑类、D大环内酯类、Eβ-受体激动剂类、F精神控制类、G解热镇痛类、H硝基

咪唑类、I氨苯砜、J抗球虫药类、K抗病毒类、L酰胺醇类抗生素共12组，本标准对132种兽药及相

关化学品标准品分组及详细化合物信息见附录A。

5.3.2标准储备液的配置：取适量单个标准品（5.3.1），根据标准品的溶解度选择甲醇、乙腈等适宜

溶剂溶解并定容至终浓度为1.00mg/mL，-18℃冷冻保存，有效期为12个月。

5.3.3混合标准中间液：根据每种兽药及相关化学品的筛查限，确定其在混合标准中间液中的浓度，

再按兽药及相关化学品组别分别配置12组混合标准中间液。移取一定量的单个兽药标准储备液（5.3.2）

于100mL容量瓶中，用甲醇、乙腈等适宜溶剂定容至刻度。混合标准中间液-18℃冷冻保存，有效期

为3个月。

5.3.4混合标准工作液：根据每种兽药及相关化学品的筛查限，确定其在基混合标准工作液中的浓度。

移取一定量的兽药混合标准中间液（5.3.3），用乙腈水溶液（5.2.5）配成不同浓度的混合标准工作液。

混合标准工作液应现配现用。

5.4材料

5.4.1净化盐包[CleanertMAS-Q（MS-9PA0228）]。1

5.4.2微孔滤膜：0.22μm，通用型。

6仪器和设备

1)1CleanertMAS-Q是Agela公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该

产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。

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6.1液相色谱—质谱/质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。

6.2涡旋振荡器。

6.3高速离心机。

6.4氮吹仪。

6.5分析天平：感量0.1mg和10mg。

6.6超声波清洗仪。

7试样制备与贮存

7.1猪肉、鸡肉

从原始样品取出有代表性样品约500g，用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器作为试样，密

封，并标明标记。将试样置于-18℃冷冻避光保存。

7.2牛奶

从原始样品取出有代表性样品约500g，充分混匀，装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。

将试样置于0℃～4℃冷藏避光保存。

7.3鸡蛋

从原始样品取出有代表性样品约500g，去壳后用组织捣碎机搅拌充分混匀，装入洁净容器作为试

样，密封，并标明标记。将试样置于0℃～4℃冷藏避光保存。

8分析步骤

8.1提取

准确称取匀浆试样2.5g（精确至0.01g）于50ml具塞离心管中，加入1ml0.1mol/LNa2EDTA-

Mcllvaine缓冲溶液（5.2.4），涡旋15s，再加入9ml乙腈（5.1.4），振荡10分钟，超声20min，9000

r/min离心5min。

8.2净化

移取5ml上清液，加入净化盐包（5.4.1），振摇5min，9000r/min离心5min。移取4ml上清液

于刻度试管中，40℃氮吹至0.5mL以下，用乙腈水溶液（5.2.5）定容至1ml，过0.22μm滤膜（5.4.2），

供液相色谱-质谱/质谱测定。

8.3测定

8.3.1液相色谱参考条件

液相色谱参考条件如下：

a)色谱柱：BEHC18，1.7μm，100×3.0mm（内径），或性能相当者；

b)流动相：正离子模式：A相：0.05％甲酸5mmol/L乙酸铵溶液；B相：甲醇；

负离子模式：A相：水；B相：甲醇；

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c)柱温：40℃；

d)进样量：5.0μL；

e)流动相洗脱梯度如表1所示。

表1流动相洗脱梯度

正离子模式负离子模式

时间/minA(%)B(%)流速mL/min时间/minA(%)B(%)流速mL/min

0.009730.30.009550.3

0.5080200.30.509550.3

7.0050500.32.505950.3

11.005950.34.505950.3

12.505950.34.609550.3

12.609730.36.009550.3

14.509730.3----

8.3.2质谱参考条件

质谱参考条件如下所示：

a)离子源：电喷雾离子源；

b)检测方式：多反应监测(MRM)；

c)质谱仪器参数如表2所示。

表2质谱仪器参数

离子源/氮气正离子负离子

电喷雾电压（IS）5500V-4500V

气帘气压力（CUR）30psi30psi

离子源雾化器温（TEM）600℃600℃

雾化气压力（GS1）50psi50psi

辅助气压力（GS2）60psi60psi

d)定性定量离子对及锥孔电压（DP）、碰撞能量（CE）见附录A，典型谱图见附录B。

8.4定性检测

a)试样溶液中目标化合物色谱峰保留时间与同批次标准溶液中该目标化合物的保留时间偏差在

±2.5%之内，则可以初步判断试样中存在该兽药残留。

b)试样溶液中目标化合物所监测定性离子均出现，且信噪比大于等于3；试样溶液中的离子相对

丰度与空白添加标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表3的要求，则可判定为试样中存在该种化合物；

试样溶液中目标化合物检测浓度大于等于方法筛查限时判定为阳性结果。

表3试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围

相对丰度允许偏差（％）

˃50±20

˃20～50±25

˃10～20±30

≤10±50

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9灵敏度

132种兽药的筛查限见附录A。

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附录A

（资料性）

132种化合物基本信息、质谱参数及方法筛查限

132种化合物基本信息、质谱参数及方法筛查限如表A.1所示。

表A.1132种化合物基本信息、质谱参数及方法筛查限

保留时间方法筛查限

类别序号药物名称英文名称CAS号母离子子离子DP/VCE/eV扫描模式

（min）μg/kg

251.1156.0*4022

1磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-93.69ESI+10

251.1924038

256156.0*4022

2磺胺噻唑Sulfathiazole72-14-03.9ESI+10

2561084032

250.1156.1*4023

3磺胺吡啶Sulfapyridine144-83-24.23ESI+10

250.11084032

265.2156.1*8225

4磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine127-79-74.47ESI+10

265.2172.18225

A.磺胺类及

279.1186.1*6023

抗菌增效剂5磺胺二甲基嘧啶Sulfamethazine57-68-13.76ESI+10

279.11566027

281.1156.0*7525

6磺胺间甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine1220-83-36.12ESI+10

281.1126.17530

271156.1*6521

7磺胺甲噻二唑Sulfamethizole144-82-15.01ESI+10

2711086536

281.1156.1*7025

8磺胺对甲氧嘧啶Sulfameter651-06-94.91ESI+10

281.1108.17035

9磺胺氯哒嗪Sulfachloropyridazine80-32-0285.1156.0*5.786522ESI+10

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保留时间方法筛查限

类别序号药物名称英文名称CAS号母离子子离子DP/VCE/eV扫描模式

（min）μg/kg

285.1108.16537

281156.0*7525

10磺胺甲氧哒嗪Sulfamethoxypyridazine80-35-35.4ESI+10

281126.17527

磺胺邻二甲氧嘧311.1156.1*7030

11Sulfadoxine2447-57-66.33ESI+10

啶311.1108.27037

磺胺间二甲氧嘧311.1156.1*7028

12Sulfadimethoxine122-11-27.92ESI+10

啶311.12187028

254.1156.0*6522

13磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole723-46-65.93ESI+10

254.11086536

268.1156.1*8222

14磺胺二甲异噁唑Sulfisoxazole127-69-56.3ESI+10

268.1113.28225

A.磺胺类及

277.1156.0*6019

抗菌增效剂15苯甲酰磺胺Sulfabenzamide127-71-96.78ESI+10

277.11086032

301.1156.0*8024

16磺胺喹恶啉Sulfaquinoxaline59-40-58.32ESI+10

301.11088036

215156.0*5217

17磺胺醋酰Sulfacetamide144-80-93.31ESI+10

2151085229

291.1230.1*9533

18甲氧苄氨嘧啶Trimethoprim738-70-54.85ESI+10

291.1123.19534

315156.0*9027

19磺胺苯吡唑Sulfaphenazole526-08-97.32ESI+10

3151089040

278.6156.0*11027

20磺胺二甲异嘧啶Sulfisomidine515-64-05.29ESI+10

278.6186.211023

7

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保留时间方法筛查限

类别序号药物名称英文名称CAS号母离子子离子DP/VCE/eV扫描模式

（min）μg/kg

268156.0*5022

21磺胺噁唑Sulfamoxole729-99-74.9ESI+10

2681085046

285156.0*5022

22磺胺氯吡嗪Sulfaclozina102-65-87.56ESI+10

2851085046

360316.1*8025

23恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-65.63ESI+5

360245.18035

320.1276.1*8026

24诺氟沙星Norfloxacin70458-96-75.28ESI+5

320.1233.18035

334.1316.1*8027

25培氟沙星Pefloxacin70458-92-35.13ESI+5

334.1290.28025

332.1288.1*8025

26环丙沙星Ciprofloxacin85721-33-15.47ESI+5

332.1245.18033

362.2318.1*8026

B.氟喹诺酮27氧氟沙星Ofloxacin82419-36-15.05ESI+5

362.2261.18038

类

386342.3*8025

28沙拉沙星Sarafloxacin98105-99-86.25ESI+5

3862998038

321.2303.1*6528

29依诺沙星Enoxacin74011-58-85.08ESI+5

321.2232.16549

352265.0*8033

30洛美沙星Lomefloxacin98079-51-75.81ESI+5

352308.18028

233215.0*6818

31萘啶酸Nalidixicacid389-08-29.94ESI+5

2331876834

32恶喹酸Oxolinicacid14698-29-4262216.1*8.237040ESI+5

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保留时间方法筛查限

类别序号药物名称英文名称CAS号母离子子离子DP/VCE/eV扫描模式

（min）μg/kg

262244.17026

262.1202.1*7742

33氟甲喹Flumequin42835-25-610.27ESI+5

262.1244.17723

358.1340.1*6530

34达氟沙星Danofloxacin112398-08-05.56ESI+5

358.1255.16555

400.1356.1*8028

35双氟沙星Difloxacin98106-17-36.13ESI+5

400.1299.18041