生物化学检验技术 课件 第十五章 胰腺疾病的生物化学检验

职业教育医学检验技术专业教学资源库生物化学检验技术第十五章胰腺疾病的生物化学检验BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2目录胰腺功能与疾病时的生化改变1胰腺疾病的实验室检查2胰腺疾病的实验室评价3第一节胰腺功能与疾病时的生化改变胰腺是人体内第二大外分泌器官，胰腺具有外分泌和内分泌双重功能外分泌功能主要由腺泡细胞和导管壁细胞完成，分泌胰液至十二指肠参与食物的消化内分泌功能主要由胰岛细胞完成一、胰腺的外分泌功能正常成人每日胰液的分泌量为1000～2000ml。胰液是一种无色、无味、略带黏性的透明碱性液体，pH值为7.8～8.4，比重为1.007～1.042，渗透压与血浆相近。其中含有水、电解质和各种消化酶等。第一节胰腺功能与疾病时的生化改变第一节胰腺功能与疾病时的生化改变（一）电解质胰液的电解质来源于血浆，包括多种阳离子和阴离子，阳离子有Na+、K+、Ca2+和Mg2+，阴离子有HCO3-、Cl-、SO42-和HPO42-等，其中主要为HCO3-和Cl-。HCO3-含量远高于血浆浓度。第一节胰腺功能与疾病时的生化改变（二）胰酶

胰液中的各种消化酶统称为胰酶，是由胰腺的腺泡细胞合成、储存和释放的。消化酶是胰液蛋白质的主要成分，胰液中的蛋白质浓度随胰液分泌增加而增加，因此测定胰液中的蛋白质浓度可作为胰腺分泌变化的指标。第一节胰腺功能与疾病时的生化改变类别名称生理功能糖类消化酶胰淀粉酶水解淀粉为α-糊精、麦芽寡糖和麦芽糖脂类消化酶脂肪酶水解三酯酰甘油为甘油和脂肪酸磷脂酶A2水解磷脂为溶血磷脂和脂肪酸胆固醇脂酶水解胆固醇酯为胆固醇和脂肪酸蛋白消化酶胰蛋白酶属内肽酶，水解蛋白质中以碱性氨基酸羧基所组成的肽键糜蛋白酶属内肽酶，水解蛋白质中以芳香族氨基酸的羧基所组成的肽键弹性蛋白酶属内肽酶，水解以中性脂肪族氨基酸的羧基所组成的肽键羧基肽酶A属外肽酶，水解中性氨基酸为羧基末端的多肽羧基肽酶B属外肽酶，水解碱性氨基酸作为羧基末端的多肽核酸消化酶核糖核酸酶水解RNA为单核苷酸脱氧核糖核酸酶水解DNA为脱氧单核苷酸胰液中的各种消化酶及主要作用第一节胰腺功能与疾病时的生化改变胰液是所有消化液中最重要的一种。当胰酶分泌不足时，对蛋白质和脂类的消化、吸收影响很大；在正常情况下，胰腺内的蛋白酶（原）未被激活，不会引起胰腺自身消化。在急性胰腺炎发生时，可在短时间内对大量胰腺组织产生水解破坏作用血液中胰酶的水平会明显升高，故测定血浆中的胰淀粉酶或胰脂肪酶浓度对诊断急性胰腺炎具有重要意义。第一节胰腺功能与疾病时的生化改变二、胰腺疾病的生化改变胰腺疾病包括胰腺炎、胰腺创伤、肿瘤、假性囊肿、脓肿等。胰腺炎是一种胰腺消化酶所致的胰腺自身消化性疾病，可分为急性和慢性两大类。急性胰腺炎指急性发病伴血液、尿液中胰酶升高者；慢性胰腺炎指有持续症状而导致胰腺功能和形态改变者。无论是急性胰腺炎还是慢性胰腺炎，病人常处于高代谢状态。第一节胰腺功能与疾病时的生化改变能量代谢变化胰腺疾病的生化改变胰腺炎与糖尿病胰腺炎与高脂血症电解质代谢紊乱第一节胰腺功能与疾病时的生化改变（一）能量代谢变化急性胰腺炎病人的能量代谢变化主要包括三个方面：①高代谢状态；②分解代谢增强；③高动力循环糖代谢变化脂肪代谢变化蛋白质代谢变化第一节胰腺功能与疾病时的生化改变（二）电解质代谢紊乱水、钠和氯的代谢钾的代谢钙的代谢镁的代谢

原因胰腺及胰周组织出现出血、坏死，导致腹腔内大量渗液常见的呕吐、腹泻等症状造成的丢失休克、呼吸功能不全和肾衰竭等并发症各种治疗措施如禁食、胃液抽吸、腹腔灌洗等第一节胰腺功能与疾病时的生化改变（三）胰源性糖尿病胰腺炎病人在病程中可出现一过性的糖代谢紊乱，称之为胰源性糖尿病。产生的原因可能是因为胰腺炎造成胰腺外分泌功能受损，继而引起内分泌功能紊乱，临床上表现为高血糖和尿糖阳性。急性胰腺炎慢性胰腺炎重症急性胰腺炎第一节胰腺功能与疾病时的生化改变（四）胰腺炎与高脂血症胰腺炎与高脂血症相互联系、密不可分。高脂血症既是胰腺炎尤其是急性胰腺炎的一个常见的致病因素，又是急性胰腺炎的一个并发症。肝脾活检或骨髓检查可见单核－吞噬细胞系统的细胞内充满脂肪高脂血症伴发胰腺炎时病人的血、尿淀粉酶水平多正常为了鉴别病人的血脂升高究竟是胰腺炎并发了高脂血症，还是高脂血症导致代谢性胰腺炎，可在胰腺炎恢复后2个月检测血脂，以明确诊断家族性高脂蛋白血症病人也可伴发胰腺炎急性胰腺炎病变本身无论是病理生理还是病理解剖均有很大不同，因此临床表现变化很大，且大多临床表现并非特异，可能类似于其它胰外病变的临床表现。因此，对任何急腹症的病人均应考虑本病的可能。在症状和体征的基础上，临床考虑急性胰腺炎的诊断时，应尽快作相应的实验室检查和影像学检查，从而对临床诊断提供进一步的支持。第一节胰腺功能与疾病时的生化改变第二节胰腺疾病的实验室检查

胰腺疾病的实验室检查目前仍以胰腺酶检测为主一、血、尿淀粉酶及其同工酶活性测定二、血清脂肪酶活性测定三、血清、尿胰蛋白酶活性测定第二节胰腺疾病的实验室检查一、血、尿淀粉酶及其同工酶活性测定淀粉酶

淀粉酶（α-amylase，AMY）又称α-1,4-葡聚糖水解酶，作用于多糖分子的α-1,4-糖苷键，生成麦芽糖和葡萄糖。淀粉酶分子量约为40000～50000，很易由肾脏排出。α-淀粉酶主要存在于胰腺、唾液腺及其分泌液中，对食物中多糖化合物的消化起重要作用。血清淀粉酶主要有两种同工酶，即同工酶P（来源于胰腺）及同工酶S。第二节胰腺疾病的实验室检查淀粉酶是临床应用最早的酶，测定方法多达200余种一般可将这些方法归纳为二类：一类是以天然淀粉为底物的测定法。由于天然淀粉的分子结构和葡萄糖组成不确定，难以达到方法学标准化，测定的准确性和重复性都较差另一类是使用分子组成确定的小分子寡聚糖或对-硝基苯酚-糖苷等作为淀粉酶底物，与辅助酶、指示酶共同组成淀粉酶测定系统。此类方法最突出的优点是底物的结构、分子量和水解产物确定，方法简便快速，精密度好，线性范围宽，是目前测定淀粉酶较为理想的方法（一）血清淀粉酶活性测定第二节胰腺疾病的实验室检查1．碘-淀粉比色法

血清(或血浆)中α-淀粉酶（AMY）催化淀粉分子中α-1,4-糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有α-1,6-糖苷键支链的糊精。在底物过量且浓度已知的条件下，保温反应到规定时间后加入含强酸的碘液终止反应，并与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物（碘色反应），其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而计算出AMS的活力单位实验原理第二节胰腺疾病的实验室检查2．限定性底物法

以对－硝基苯麦芽庚糖苷（4NP-G7）为底物，经α-淀粉酶催化，水解为游离的寡糖(G5，G4，G3)及葡萄糖残基减少的对-硝基苯寡糖苷（4NP-G2，4NP-G3，4NP-G4）。4NP-G2、4NP-G3及部分4NP-G4，在α-葡萄糖苷酶催化下，进一步水解为葡萄糖和对-硝基酚（其摩尔数仅为酶解底物-4NP-G7的1/3，其余2/3还结合在4NP-G4中）。对-硝基酚的生成量在一定范围内与α-淀粉酶活性成正比实验原理第二节胰腺疾病的实验室检查碘-淀粉比色法：血清淀粉酶活性80～180U/L限定性底物法：血清淀粉酶活性

≤220U/L（37℃）

参考区间（一）血清淀粉酶活性测定第二节胰腺疾病的实验室检查1．血清AMY测定主要用于诊断急性胰腺炎及急腹症的鉴别诊断急性胰腺炎发病后8～12小时血清AMY开始增高，12～24小时达高峰，2～5天下降至正常。如达350U/L时应怀疑此病，超过500U/L有诊断意义。2．监测急性胰腺炎有无并发症发生3．淀粉酶活性中度或轻度升高还可见于一些非胰腺疾病临床意义（一）血清淀粉酶活性测定第二节胰腺疾病的实验室检查（二）尿淀粉酶的测定血液中淀粉酶能被肾小球滤过，所以任何原因引起的血清淀粉酶升高时，都会使尿中淀粉酶排出量增加，尤以急性胰腺炎时多见，急性胰腺炎时肾清除淀粉酶的能力加强，其升高可早于血清淀粉酶，而下降晚于血清淀粉酶。尿淀粉酶常采用碘-淀粉比色法或限定性底物法测定，但因尿淀粉酶活性高，故在试验前尿液标本需先作20倍稀释后再测定。第二节胰腺疾病的实验室检查碘-淀粉比色法：尿淀粉酶活性100～1200U/L限定性底物法：尿淀粉酶活性≤1200U/L（37℃）

参考区间（二）尿淀粉酶的测定第二节胰腺疾病的实验室检查1.急性胰腺炎：尿液淀粉酶活性一般于发病12～24h开始增高，比血清淀粉酶迟6～10h，但由于肾脏对淀粉酶的清除率增强，尿淀粉酶活性可高于血清一倍以上，多数在持续3～10天后恢复正常。2.慢性胰腺炎：血清和尿淀粉酶活性一般不增高，但如急性发作时可有中等程度的增高。3.其他疾病：任何原因所致的胰腺管阻塞，如胰腺癌、胰腺损伤、急性胆囊炎等，均可使血和尿淀粉酶活性增高。临床意义（二）尿淀粉酶的测定第二节胰腺疾病的实验室检查（三）淀粉酶同工酶血清淀粉酶有两种同工酶：来源于胰腺的胰淀粉酶（PAM）和来源于唾液腺及许多其他组织的唾液淀粉酶（SAM），

分别命名为P-同工酶和S-同工酶。在淀粉酶总活性升高时，同时测定淀粉酶同工酶有助于对胰腺疾病的鉴别诊断。P-同工酶升高或降低时，提示可能有胰腺疾患；S-同工酶的变化可能是源于唾液腺或其他组织。测定同工酶比较常用的方法是琼脂糖电泳法或醋纤膜电泳法。参考区间P-同工酶：血清115U/L

尿800U/L第二节胰腺疾病的实验室检查（四）淀粉酶、肌酐清除率比值（Cam/Ccr）健康情况下血液中淀粉酶由肾脏清除的量较为恒定，约为1～3ml/min。淀粉酶清除率与肌酐清除率有一个稳定的比值，可用Cam/Ccr表示。其参考值在2%～5%。据报道急性胰腺炎时Cam/Ccr比值明显高于对照组（P<0.01），在对照组中有Cam/Ccr比值正常而淀粉酶却升高者；而试验组中有一部分急性胰腺炎患者此比值升高而血清淀粉酶却正常，说明Cam/Ccr比值测定比淀粉酶更为敏感和特异。因此，对怀疑患急性胰腺炎而血清淀粉酶正常的病人，检测Cam/Ccr比值较有意义。第二节胰腺疾病的实验室检查二、血清脂肪酶活性测定脂肪酶（lipase，LPS）又称三酯酰甘油酶，是胰腺外分泌酶，主要来自于胰腺，也有一些来自于其他组织，如胃、小肠黏膜、肺等处。在白细胞、脂肪细胞、乳汁中也可测到脂肪酶活性。属低度专一性酶，可水解长链脂肪酸甘油酯。测定血清脂肪酶活性的方法有多种，如滴定法、pH电极法、比浊法、酶偶联法和荧光法等。目前测定血清脂肪酶活性多采用比浊法或酶偶联法。第二节胰腺疾病的实验室检查1．比浊法

甘油三酯与水制成的乳胶，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状。胶束中的甘油三酯在脂肪酶的作用下水解，使胶束分裂，其浊度或光散射因而减低。减低的速率与脂肪酶活力有关。实验原理第二节胰腺疾病的实验室检查波长546nm，比色杯光径1.0cm，进行比色测定，计算脂肪酶的活性单位。*TOOS：N-乙酰-N-磺酸丙基苯胺实验原理2．酶偶联法第二节胰腺疾病的实验室检查二、血清脂肪酶活性测定比浊法：酶活性呈正偏态分布，最低为0U，单侧95%上限为7.9U/L。酶偶联法：1～54U/L。

参考区间第二节胰腺疾病的实验室检查

胰腺是人体LPS最主要来源。急性胰腺炎血清LPS升高，其升高的时间较AMY迟，但持续时间长，可达8～15天，有助于发病后期的诊断。约有40%～50%胰腺癌患者血清LPS升高，慢性胰腺炎时LPS也可升高。腮腺炎未累及胰腺时，LPS通常在正常范围。此外血清脂肪酶升高也可见于急腹症、慢性肾病等，但患腮腺炎和巨淀粉酶血症时不升高，此点与淀粉酶不同，可用于鉴别。临床意义二、血清脂肪酶活性测定第二节胰腺疾病的实验室检查三、血清、尿胰蛋白酶活性测定胰蛋白酶是胰腺分泌的重要消化酶之一，人类胰腺细胞合成两种主要的胰蛋白酶，通常是以无活性的酶原形式存在，即胰蛋白酶原-1和胰蛋白酶原-2，它们都储存在酶原颗粒中，在食管神经反射和（或）肠道激素（胆囊收缩肽－肠促胰酶素）的刺激下分泌入肠道，肠液中的肠肽酶可以激活胰蛋白酶，胰蛋白酶本身及组织液亦可使其激活，亦可被Ca2+、Mg2+等离子激活。两种胰蛋白酶酶原的电泳迁移率不同，最适pH亦有差别，两者很少有免疫交叉反应，因此可以用免疫方法测定。第三节胰腺疾病实验室的评价胰腺疾病的实验室检查近年来虽有很大进展，各种试验可以对急性胰腺炎、慢性胰腺炎及其他胰腺疾病的诊断，吸收不良原因的鉴别等提供帮助。但都有局限性，胰腺酶和胰腺外分泌功能的试验仍占有较重要地位。第三节胰腺疾病实验室的评价一、血清胰腺酶的测定评价1.血清淀粉酶、尿淀粉酶、淀粉酶同工酶测定

血清淀粉酶升高最多见于急性胰腺炎，其升高的程度越大，患急性胰腺炎的可能性也越大，因此尽管特异性和灵敏度都还不够高，目前还是用淀粉酶作为急性胰腺炎诊断的首选指标；急性胰腺炎时肾清除淀粉酶的能力加强，尿淀粉酶升高可早于血淀粉酶，而下降晚于血淀粉酶。在淀粉酶总活性升高时，测定淀粉酶同工酶有助于对胰腺疾病的鉴别诊断。第三节胰腺疾病实验室的评价2.血清胰脂肪酶测定

血清脂肪酶活性升高多与淀粉酶并行，有报告患急性胰腺炎时脂肪酶比淀粉酶更敏感和特异，因而认为脂肪酶活性升高更有诊断意义，最好是同时检测淀粉酶和脂肪酶。因脂肪酶活性升高持续的时间较长，所以在疾病的后期测定更有意义。第三节胰腺疾病实验室的评价3.胰蛋白酶测定

急性胰腺炎时，血清胰蛋白酶和淀粉酶平行升高，其峰值可达参考值上限的2～400倍，但其临床意义和价值尚需观察和总结

。第三节胰腺疾病实验室的评价二、胰腺外分泌功能检查评价1．促胰酶素-促胰液素试验

促胰酶素－促胰液素试验（P-Stest）是利用给胰腺以刺激，引起胰腺外分泌活动，采集给刺激物前、后的十二指肠液和血液，测定各项指标。从给刺激前、后各项指标的变化来评价胰腺外分泌功能；

从原理上看本试验是属于真正的胰腺外分泌功能试验，但因其操作复杂，患者又比较痛苦，因此很少应用于临床。第三节胰腺疾病实验室的评价二、胰腺外分泌功能检查评价2．对氨基苯甲酸试验

对氨基苯甲酸试验（PABAtest，BTPtest）实际是一个简单易行的胰腺外分泌功能试验，利用糜蛋白酶分解所给药物的能力来判断胰腺外分泌功能。其做法是给病人口服