DB21T 3648-2022 鹿冷冻精液生产技术规程　

21I杜岳纯、樊琳琳、田景鑫、丁国伟、杜学海、宫婷、范雪、本文件起草单位通讯地址:桓仁强风鹿业科研繁育基地（本溪市桓仁县铧来镇），联系电话1鹿冷冻精液生产技术规程冻、冻精活力检查、冻精包装储存和记录等4采精前准备4.1采精场所4.2采精员应剪短指甲，更换好工作服和鞋帽，戴上工4.3种公鹿4.4器具和药品移液枪（0.5mL～5mL）、胶头滴管、无菌箱、水浴锅（32℃~35℃),电刺激采精器（0V～30V）、电极棒(Φ40mm）、双目生物显微镜（200倍～400倍）、恒温加热板（37℃~38℃)、简易冷冻箱2（3℃~5℃)、冰箱（0℃~5℃)、塑料盒（150mm×15mm）、液氮罐（30L）、一次性长臂塑料手套、灭菌纱布、毛巾、医用不锈钢手术剪、细管夹（23cm）、集精杯（20mL）、液体石蜡、包装袋（170mm×45mm）、拇指管(Φ13mm）、细管（0.25mL）、封口粉（聚乙烯醇粉）、载玻片（76mm精（75%）、陆眠宁（盐酸塞拉嗪）、鹿醒宁（盐酸苯噁唑）、Tris（三羟甲基氨基甲烷）、柠檬酸、4.5器具清洗和消毒胶塞、电极棒等，先在加有洗涤剂的温水中洗刷，之后用清水冲洗干净，晾干后用75%酒精消毒，待酒4.6稀释液4.6.1稀释液配方4.6.2稀释液配制方法卵黄20mL、青霉素、链霉素各10万IU，用磁力搅拌器搅拌30min，盖紧胶塞，放入3℃~5℃冰箱中4.8包装袋5.1采精频率5.2采精方法5.2.1保定35.2.2处置先将电刺激采精器电压调至“0”位，打开电源开关，刺激电压从2V开始由低向高，但不应超过6V。每次增加1个档位，在每档通、断交替刺激2次～3次，每次通电3s、间断2s，直至射精。从开始射精电刺激采精器旋钮归“0”，然后拔出电极棒，公鹿注射鹿醒宁4mL～6mL使其采用目测法，用肉眼直接观看量筒上刻度读取数量值（精确到0.1），前向运动的精子所占比例，确定活力，用百分率或相应数值表示。评定时每个样片至少观察3个视野，畸形精子所占比例，确定畸形率，用百分率或相应数值表示。评定时每个样片至少观察3个视野，取其4使用精子密度测定仪器进行测定，精子密度应大于等于6亿V——应加稀释液量，单位为毫升（mL1000——每支细管冻精所含有效精子数，0.23——每支细管精液容量，单位为毫升（mL）。在22℃~25℃环境条件下，用经32℃水浴加温的稀释液加入精液中至最终稀释量。稀释时，把精液稀释10min后，在22℃~25℃环境条件下，用移液枪或胶头滴管把精液吸入细管，要求细精液稀释10min后，在22℃~25℃环境条件下，用自动细管灌装机进行精液的分装、标识和封分装后的细管精液放在塑料盒中或用毛巾包裹，放入3℃~5℃冷藏柜中平衡3h～4h。59精液冷冻在4℃~6℃低温条件下，把细管精液码放在托架上。码放时把棉塞端靠近操作者，封口端远离操作者，放进冷冻箱时也应如此摆放。如同一个托架上有不同鹿的细管精液，应分开码冷冻箱要有良好的隔热性能，深度应在50cm以上。使用前加入液氮预冷，液氮面的高低应根据冷剪掉细管两端，取一滴精液于载玻片上，按照6.1.3规定的方法评定活力，活力大于0.11.1.1冻精包装应在-140℃以下的环境中进行，包装后的细管冻精其棉塞端应朝向11.2.2冻精由一个液氮罐转移到1鹿细管冷冻精液标记由四部分组成，排列顺a)第一部分：公鹿所在鹿场名称前四个汉字的汉语拼音的第一个大写字b)