DB21T 3559-2021 软枣猕猴桃品种鉴别技术规程 SSR分子标记法_第1页
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CCSB60DB21TechnicalregulationfortheidentificationofActinidiaarguta辽宁省市场监督管理局发布I 1 1 1 2 2 3 3 3 3 3 4 5 6 7 8归口管理部门通讯地址:辽宁省林业和草原局(沈阳市和平区太原北街2号),联系电话:文件起草单位通讯地址:辽宁省经济林研究所(大连市甘井子区中华西路31号),联系电话:1软枣猕猴桃品种鉴别技术规程SSR分子标记法本文件规定了利用简单重复序列(Simplesequencerepeats,SSR)分子标记法对软枣猕猴桃本文件适用于SSR分子标记技术构建软枣猕猴桃资源DNA指纹图谱过程中DNA分子GB/T19557.1植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南LY/T2745仁用杏品种鉴定技术规程SSR分指聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR),是利用一段DNA为模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下,将该段DNA扩增至足够数量,以便进2指纹对比fingerprintcomp将待检样品与对照样品的SSR指纹图谱进行比对,分析待检样品与对照样品的SSR指纹是否具有差4测试准备4.1仪器设备与主要试剂、耗材4.2溶液配制4.3核心引物4.4样品准备依据NY/T2324中样本采集的技术规定进行样本采集,3次以上重复。取无病虫害的健康的芽,做a)将样品倒入研钵中,加入液氮研磨2次,约取0.1mLe)5000r•min-1离心1min后倒3g)用紫外分光光度法测定纯度和浓度,OD260/OD280比值范围在1.7~1.9之间即为-1),9数据记录将待检样品与对照样品的SSR指纹比对结果进行分析,若待检样品与对照样品有等位基因不同的位根据10.1的判定结果,出具鉴别报告书,4A.1仪器设备分光光度计、磁力搅拌器、PCR扩增仪、3730XL测序仪、琼脂粮凝胶电泳仪,A.2主要试剂液氮、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)、十六烷基三甲mix、引物、琼脂糖、去离子水、无水乙醇、双A.3主要器材5溶液配制称取46.53gEDTANa2•2H2O于250mL烧杯中,加150mL去离子水充分搅拌溶解,用1mol•L-1NaOH溶液调pH至8.0,定容至250mL,20.454g至250mL烧杯中,分别加1mol•L-1Tris-HCl溶液25mL、60℃水溶解,并用去离子水定容至250mL,混匀。分别量取1mol•L-1Tris-HCl溶液2.5mL、0.5mol•L-1EDTANa2•2H2O溶液0.5mL,用去离子水定容6核心引物FR1111-173275-200365-854100-1675AGGTTGCATATGAGTGGTT135-1926100-1507ACGAGCCCAAAATAGAGTT200-2698119-2109AAGTAAAGCCATTGTCATTG121-192AGAAGATTTC

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