《Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范》

ICS83.180

CCSG39

T/CASME

中国中小商业企业协会团体标准

T/CASMEXXX—2024

Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范

TechnicalspecificationsforthepreparationoftypeIandtypeVcollagen

（征求意见稿）

2024-XX-XX发布2024-XX-XX实施

中国中小商业企业协会发布

T/CASMEXXX—2024

Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范

1范围

本文件规定了Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备的总体要求、制备技术和记录。

本文件适用于以鱼皮为原料制备Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB1886.10食品安全国家标准食品添加剂冰乙酸（又名冰醋酸）

GB1886.20食品安全国家标准食品添加剂氢氧化钠

GB1886.174食品安全国家标准食品添加剂食品工业用酶制剂

GB2721食品安全国家标准食用盐

GB2733食品安全国家标准鲜、冻动物性水产品

GB5749生活饮用水卫生标准

GB14881食品安全国家标准食品生产通用卫生规范

GB/T27304食品安全管理体系水产品加工企业要求

中华人民共和国药典（2020年版）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

胶原蛋白collagen

以纯化的（非交联的）Ⅰ型胶原蛋白为原料制备的左手螺旋的重复Gly-X-Y序列的3条肽链相互盘绕

成右手超螺旋结构特征的结构蛋白。

注：Gly是甘氨酸，X通常是脯氨酸，Y通常是羟脯氨酸或羟赖氨酸。

[来源：GB/T38482—2021，3.1]

Ⅰ型胶原蛋白typeⅠcollagen

由2条1链和1条2肽链组成的具有完整三螺旋结构的胶原蛋白。

[来源：GB/T38482—2021，3.2]

Ⅴ型胶原蛋白typeⅤcollagen

由1条1链、1条2和1条3肽链组成的具有完整三螺旋结构的胶原蛋白。

4总体要求

1

T/CASMEXXX—2024

选址

选址符合下列要求：

a)宜靠近有加工副产物的水产品加工生产区；

b)所在地应有工业废水集中排放的处理区；

c)周围环境不应影响或污染产品；

d)有充足的电力供应。

设施和生产人员

应符合GB14881的要求。

安全管理

应符合GB/T27304的要求。

容器和设备

4.4.1直接接触原料、半成品、成品的器具应由无毒耐腐蚀的材料制成，易清洗。

4.4.2至少应配有以下设备：

a)烘干机；

b)粉碎机；

c)搅拌设备；

d)离心机。

4.4.3所有电气设备的控制器应组装在一起，由一个主控制箱操纵，且远离排水区。

4.4.4设备应保持完好、清洁、确保正常运转，定期检查和维护保养。

质量检验室

应建有相应的质量检验室，至少应配备恒压或恒流电源、垂直板电泳槽和制胶模具及相关技术人员。

原辅料要求

4.6.1鱼皮应符合GB2733的规定。

4.6.2水应符合GB5749的规定。

4.6.3氢氧化钠应符合GB1886.20的规定。

4.6.4氯化钠应符合GB2721的规定。

4.6.5冰乙酸应符合GB1886.10的规定。

4.6.6胃蛋白酶应符合GB1886.174的规定。

5制备技术

工艺流程

Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备工艺流程见图1。

2

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开始

预处理

粗提

分离

纯化

不合格

检验再纯化

合格

结束

图1Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备工艺流程图

预处理

5.2.1使用温度不高于20℃的水清洗鱼皮，除去夹杂的头、鳍、鱼肉、内脏和其它附于表面的血污、

泥沙等杂质，并剔除鱼鳞。

5.2.2沥干，剪碎至（1cm±0.2cm）×（1cm±0.2cm），于55℃±5℃烘干2h，粉碎至50目，按

200g鱼皮15L0.1mol/L氢氧化钠溶液的比例浸泡30h，期间持续搅拌，于2500g离心10min取沉淀，

用水冲洗至pH为7.0，于55℃±5℃烘干2h。

粗提

在4℃±1℃环境下进行粗提，按100g鱼皮、10L4℃±1℃水、150mL冰乙酸、10g胃蛋白酶的比例

混合，连续搅拌42h后，100000g离心60min取上清液，缓慢加入氯化钠粉末至混合液中氯化钠浓度为

2.0mol/L，盐析过夜，100000g离心15min，取白色沉淀，为胶原蛋白粗品。

分离

在4℃±1℃环境下进行分离，将胶原蛋白粗品溶解于含有1.0mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HC1缓

冲液中（pH7.5），100000g离心60min取上清液，缓慢加入氯化钠粉末至混合液中氯化钠浓度为2.4

mol/L，盐析过夜，100000g离心15min，分别收集沉淀和上清液。

纯化

5.5.1在4℃±1℃环境下进行纯化。

5.5.2将沉淀溶解于0.25mol/L冰乙酸中，装入截留分子量为10kDa的透析袋，用0.025mol/L冰乙

酸溶液透析60h，真空冷冻干燥，所得无臭无味白色海绵状固体即为Ⅰ型胶原蛋白。

5.5.3向上清液中缓慢加入氯化钠粉末至混合液中氯化钠浓度为4.0mol/L，盐析过夜，100000g离

心15min，同5.5.1操作，所得无臭无味白色海绵状固体即为Ⅴ型胶原蛋白。

检验

3

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按《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则0541中规定的第五法SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

（SDS法）进行测定。Ⅰ型、Ⅴ型胶原蛋白纯度应不低于95％，典型的Ⅰ型和Ⅴ型胶原蛋白电泳图

谱见附录A。

再纯化

若达不到5.6要求，可将5.5所得Ⅰ型/Ⅴ型胶原蛋白再次溶解于预冷至4℃±1℃的0.5mo1/L冰乙酸

（1:100，w/v）中，100000g离心60min，缓慢加入氯化钠粉末至混合液中氯化钠浓度为2.4mol/L，盐

析过夜，100000g离心15min，分别收集沉淀和上清液。按5.5再纯化后，按5.6检验。

6记录

制备过程中应记录并保存以下内容：

a)执行各阶段操作人员的姓名；

b)操作时间、地点；

c)执行的具体操作内容；

d)操作结果或观察到的现象；

e)其他。

4

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A

A

附录A

（资料性）

鱼皮Ⅰ型和Ⅴ型胶原蛋白SDS图谱

鱼皮Ⅰ型和Ⅴ型胶原蛋白SDS图谱见图1。

说明：

泳道1——蛋白质分子量标准；

泳道2——Ⅴ型胶原蛋白；

泳道3——Ⅰ型胶原蛋白。

图A.1鱼皮Ⅰ型和Ⅴ型胶原蛋白SDS图谱

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参考文献

[1]GB/T38482—2021动物源性I型胶原蛋白成分测定聚丙烯酰胺凝胶电泳法

6

《Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范》

编制说明

团标制定工作组

二零二四年四月

1

一、工作简况

（一）任务来源

根据2024年全国标准化工作要点，大力推动实施标准化战略，

持续深化标准化工作改革，加强标准体系建设，提升引领高质量发展

的能力。依据《中华人民共和国标准化法》，以及《团体标准管理规

定》相关规定，中国中小商业企业协会决定立项并联合杭州纽曲星生

物科技有限公司等相关单位共同制定《Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术

规范》团体标准。于2024年3月30日，中国中小商业企业协会发布

了《Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范》团体标准立项通知，正式立

项。为响应需求，需要制定完善的Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范

产品标准，对产品质量进行管理，满足质量提升需要。

（二）编制背景及目的

胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，

因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。我国

是一个渔业大国,但加工技术水平较低,大量的加工废弃物造成了严

重的资源浪费和环境污染，且近年来疯牛病、口蹄疫、猪链球菌、禽

流感等传染病的频繁暴发，使传统畜禽来源胶原蛋白的安全性越来越

让人担心。因此,利用水产品加工废弃物生产可以替代畜禽来源的胶

原蛋白，对于减少环境污染、提高渔业效益、促进产品安全具有重要

意义。

目前,研究人员已经鉴定出了至少29种胶原蛋白（I-XXIX）。I

型胶原蛋白在脊椎动物体内含量最多,广泛分布于机体的各个组织,

也是当前各领域应用最多的一种。V型胶原蛋白常常伴随着1型胶原

蛋白表达,但含量较少,具有其独特的生理功能,如抑制表皮、内皮、

平滑肌、癌细胞的粘附和增殖，结合肝素、胰岛素、骨矿化结合素、

2

血管内皮抑制因子、巨噬细胞集落刺激因子等生物活性物质，可用于

医药、材料和生物医学等领域。

水产动物体内胶原蛋白含量高于陆生动物，如鲢鱼、鳙鱼和草鱼

鱼皮的蛋白质含量分别为25.9%、23.6%和29.8%，均高于各自相应鱼

肉的蛋白质含量：17.8%、15.3%和16.6%。而鱼皮中的胶原含量最高

可超过其蛋白质总量的80%，较鱼体的其它部位要高许多。但水产动

物胶原蛋白的种类对比陆生动物要少得多，已从鱼类中分离鉴定出的

胶原类型有：广泛分布在真皮、骨、鳞、鳔、肌肉等处的I型、软骨

和脊索的Ⅱ型和Ⅺ型以及肌肉的V型。而鱼皮和鱼骨所含的Ⅰ型胶原

蛋白是其主要胶原蛋白。此外，还发现ⅩⅧ型胶原，然而哺乳动物中

含量比较丰富的Ⅲ型胶原，在水产动物中尚未发现

（三）编制过程

1、项目立项阶段

在目前发现的胶原蛋白中，Ⅰ型胶原蛋白的价格较低，易被群众

接受，其它类型的胶原如Ⅲ、Ⅳ等仅在研究中制备，价格昂贵不宜于

大量生产，且目前，无I型及V型胶原蛋白制备技术规范相关标准，

因此，I型及V型胶原蛋白制备技术的规范化尤为重要。《I型及V型

胶原蛋白制备技术规范》团体标准的制定将结合杭州纽曲星生物科技

有限公司的I型及V型胶原蛋白制备技术，提出规范化的要求。

2、理论研究阶段

标准起草组成立伊始就Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术进行了深

入的调查研究，同时广泛搜集相关标准和国外技术资料，进行了大量

的研究分析、资料查证工作，确定了标准的制定原则，结合现有实际

应用经验，为标准的起草奠定了基础。

标准起草组进一步研究了Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备的主要技术

3

特点，为标准的具体起草指明方向。

3、标准起草阶段

在理论研究基础上，起草组在标准编制过程中充分借鉴已有的理

论研究和实践成果，基于我们基本国情，经过数次修改，形成了《Ⅰ

型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范》标准草案稿。

4、标准征求意见阶段

形成标准草案稿之后，起草组召开了多次专家研讨会，从标准框

架、标准起草等角度广泛征求多方意见，从理论完善和实践应用方面

提升标准的适用性和实用性。经过理论研究和方法验证，明确和规范

Ⅰ型及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范的技术要求。起草组形成了《Ⅰ型

及Ⅴ型胶原蛋白制备技术规范》（征求意见稿）。

（四）主要起草单位及起草人所做的工作

主要起草单位：中国中小商业企业协会、杭州纽曲星生物科技有

限公司等多家单位的专家成立了规范起草小组，开展标准的编制工作。

经工作组的不懈努力，在2024年4月，完成了标准征求意见稿的编

写工作。

2、广泛收集相关资料。

在广泛调研、查阅和研究国际标准、国家标准、行业标准的基础

之上，形成本标准征求意见稿。本标准的制定引用的标准如下：

GB1886.10食品安全国家标准食品添加剂冰乙酸（又名冰

醋酸）

GB1886.20食品安全国家标准食品添加剂氢氧化钠

GB1886.174食品安全国家标准食品添加剂食品工业用酶

制剂

GB2721食品安全国家标准食用盐

4

GB2733食品安全国家标准鲜、冻动物性水产品

GB5749生活饮用水卫生标准

GB14881食品安全国家标准食品生产通用卫生规范

GB/T27304食品安全管理体系水产品加工企业要求

中华人民共和国药典（2020年版）

二、标准编制原则和主要内容

（一）标准制定原则

本标准依据相关行业标准，标准编制遵循“前瞻性、实用性、统

一性、规范性”的原则，