DB21T 2433-2015 树莓组培育苗技术规程　

ICS65.020.01DB21DB21/T2433—2015树莓组培育苗技术规程Technicalregulationontissuecultureofraspberry2015-03-01发布2015-05-01实施辽宁省质量技术监督局发布IDB21/T2433—2015前言 Ⅲ 12规范性引用文件 13术语与定义 14材料的选择 24.1选择的部位 24.2取材季节的选择 24.3器官发育年龄的选择 24.4取材的大小 25消毒灭菌 25.1外植体消毒灭菌 25.2培养基高压灭菌 25.3接种器具灭菌 26初代培养 36.1培养基配制 36.2培养环境条件 36.3培养方法 37继代培养 37.1培养基配制 37.2培养环境条件 37.3培养方法 37.4增殖速率的计算 37.3.1按理论计算 37.3.2实际计算 38生根培养 48.1培养基配制 48.2培养室环境条件 48.3培养方法 48.4根的生长 49组培苗的移栽 49.1移苗的季节 49.2移苗的方法 49.2.1清除培养基 49.2.2苗床准备 49.2.3移栽后的管理 49.2.3.1移植后10d之内 59.2.3.2移栽后10d～19d 5DB21/T2433—20159.2.3.3生长20d～30d 510技术档案 5附录A（规范性附录）树莓组培苗木质量分级 6附录B（资料性附录）树莓组培苗移栽病虫害防治药剂用量 7附录C（资料性附录）组培室的构成及基本设备 8DB21/T2433—2015本标准依据GB/T1.1-2009的规则起草。本标准的附录A为规范性附录，附录B、C为资料性附录。本标准由辽宁省林业厅提出并归口。本标准主要起草单位：阜新市林业种苗管理站、阜蒙县林业科技示范中心。本标准主要起草人：张秀艳、齐金海、丁立娜、曹颖、武春艳、李钱、于丹、杨树勇、丁瑞军、田明芳、赵方明、张志会、刘金城、宋春颖、付玉、李畅、霍旺、柳士东、王国兴、舒红、胡玉珠、杨志勇、李亚辉、陈宝财、张莹、龙忠勤、姬东、扈延伍、董芷维、齐金艳、李宁、贾斌英、柴旭光、杨爱风。1DB21/T2433—2015本标准规定了树莓（RubuscorchorifoliusL.f.）组织培养育苗过程中材料的选择、消毒灭菌、初代培养、继代培养、生根培养、组培苗的移栽和技术档案等。本标准适用于树莓在省内的工厂化组织培养育苗生产作业。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6001育苗技术规程LY/T1770桉树无性系组培快繁技术规程LY/T1882林木组织培养育苗技术规程LY/T2041黄藤和单叶省藤组培快繁技术规程NY/T2253菠萝组培苗生产技术规程DB31/T349非洲菊组培苗生产技术规范DB34/T1806蓝莓组培育苗技术规程3术语与定义下列术语和定义适用于本标准。3.1树莓RubuscorchoroliusL.f.蔷薇科悬钩子属的多年生落叶性灌木。3.2组培苗Tissueculturedseeding根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，诱导出愈伤组织，不定芽、不定根，最后形成完整的植株，这个植株叫组培苗。3.3外植体Explants植物组织培养所利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表2DB21/T2433—2015皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体，称为外植体。3.4初代培养Primaryculture又称诱导芽培养，外植体接种到培养基上以后，一般先放在培养室进行弱光培养，首先要得到无菌的材料，然后逐渐促进材料的分化和生长，这是试管苗的第一代，称初代培养。3.5继代培养Subculture又称分化培养，初代培养以后通过不断调试培养基和转接试管苗，使试管苗数量很快扩大，这种不断转苗增殖的过程称为继代培养。3.6生根培养Rootingculture在培养基上，利用从茎表皮细胞分裂形成突起的根原基，进一步从表皮培养形成根的过程。4材料的选择4.1选择的部位应选择树莓的茎尖、茎段。4.2取材季节的选择在春季芽开始萌发或正萌发生长时取材。4.3器官发育年龄的选择以当年枝的嫩芽、嫩枝段做材料，分生能力强，形态建成快。4.4取材的大小茎尖、茎段长0.5cm～1.0cm，茎段每段留芽1个～2个。5消毒灭菌5.1外植体消毒灭菌用流水冲洗2h以上，拿到超净工作台上，用75%酒精冲洗30s～40s，无菌水冲洗3次，再用0.1%的升汞处理3min～4min，无菌水冲洗5次。5.2培养基高压灭菌用高压灭菌锅在压力1.1MPa，温度为121℃下，灭菌20min。5.3接种器具灭菌3DB21/T2433—2015剪子、镊子、500ml烧杯（处理外植体使用）用牛皮纸包装，做到无漏洞，捆绑好，用高压灭菌锅在压力1.1MPa，温度为121℃下，灭菌20min。6初代培养6.1培养基配制初代培养所用培养基：MS+BA1.0mg/L+GA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂4.8g/L。6.2培养环境条件在无菌的环境下，培养室温度23℃~25℃,湿度20%～30%，光照强度2200lx～2500lx，整齐摆放在培养架（五层，每层间隔45cm,透光）上，培养室技术要求参照附录C。6.3培养方法在植物生长季节取树莓茎，将叶片去掉，并将茎剪成0.5cm～1.0cm带芽茎段，休眠芽预先剥除鳞片，采用75%酒精消毒30s～40s，0.1%升汞水溶液消毒处理3min～4min，再用无菌水洗涤5次。然后在超净工作台上接种在初代培养基上。7继代培养7.1培养基配制分化培养所用培养基为MS+BA0.5mg/L+GA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂4.8g/L。7.2培养环境条件在无菌的环境下，培养室温度23℃~25℃,湿度20%～30%，光照强度2200lx～2500lx，整齐摆放在培养架（五层，每层间隔45cm,透光）上，培养室技术要求参照附录C。7.3培养方法外植体长满培养瓶，就需转入到新的增殖培养基中，在无菌操净工作台上，用接种剪子和镊子剪段1.0cm～1.2cm插入培养瓶内，三段为一簇，每瓶6簇。长满瓶后重复操作，这样一代一代地继续下去，就形成了树莓组织苗的无性繁殖体系。树莓扩繁方法有分株繁殖方式。7.4增殖速率的计算7.4.1按理论计算1年内能繁殖试管苗的数量,可用式（1）计算y=mxn…………（1）式中：y为年繁殖苗数；m为无菌母株苗数；x为每个培养周期增殖的倍数；n为全年可增殖的周期次数。7.4.2实际计算4DB21/T2433—2015从接种开始，由1个芽经过1年繁殖后，应记录转接次数，统计实际得到的苗数，然后可以计算出实际繁殖周期和每个周期试管苗增殖的倍数。实际繁殖数往往低于理论计算数。8生根培养8.1培养基配制生根培养所用培养基为1/2MS+BA0.3mg/L+IAA0.2mg/L+糖15g/L+琼脂4.8g/L。8.2培养室环境条件培养室温度18℃~25℃,湿度20%～30%，光照强度2200lx～2500lx，培养室技术要求参照附录C。8.3培养方法在生根培养基中诱导生根。树莓采用培养基瓶内一步生根法生根。将生长健壮的茎尖接入生根培养基中诱导生。在无菌操净工作台上，用接种剪子和镊子剪段1.0cm～1.2cm插入培养瓶内，每瓶插10株~12株。8.4根的生长根细长，通常有1条～5条根，颜色白色。正在生长的白色根吸收力强，移苗容易成活。9组培苗的移栽9.1移苗的季节组培苗的生长不受季节的影响，如果温室条件很好，夏季能降温，达到四季如春，则移苗也没有季节性。但组培苗移入温室的时候以冬季和早春为最好，经过冬季和早春的移苗和生长，到春暖花开的季节移苗到大田，再经过田间较长时间的生长而成为理想的壮苗。9.2移苗的方法9.2.1清除培养基组培苗从瓶中取出，放在盛有20℃左右的水中，将附着在根上的培养基清洗掉，洗时注意不能伤根，对生根过长的根要适当修剪。再放入另一盆温水中清洗1次，将培养基彻底洗掉，以免残留的培养基引起污染和霉烂。最后蘸1000倍～2000倍海藻素类（促进生根）溶液后移栽。9.2.2苗床准备在温室大棚内准备好移苗床。苗床要铺上装好基质的穴盘。基质要求排水性和透气性良好，同时也要有一定的保水性。采用草炭和沙子混合，按照比例为1:1。对基质进行消毒，用500倍～800倍敌克松溶液喷洒基质。70孔穴盘，每个孔种3棵，均匀分布在穴孔内，先挖一小穴，舒展根系，深度以叶片不接触基质、叶心不能埋入土内为宜，种植后轻轻镇压。种好后用细喷雾器喷水，冲掉叶面上可能沾着的基质，并使基质和根系密切接触。9.2.3移栽后的管理5DB21/T2433—20159.2.3.1移栽后10d之内湿度：要保持空气湿度在90%左右，因为刚移栽的试管苗很嫩，叶片水分蒸发量大，而根系吸水功能差。有条件的最好用间歇喷雾，没有间歇喷雾的条件，则用塑料拱棚保湿。温度：移苗期间的温度最好保持在20℃~25℃左右，最低不要低于15℃,最高不要超过28℃。处于一个温度比较低的环境下，根系生长比较快，地上部生理活动比较缓慢，可逐步恢复生机，适应外界环境。光照：光照一般不要过强和过弱，保护地冬季、早春光照一般在10000lx左右是合适的。气：每天一早一晚各通风1次，每次通风以湿度降到60%～70%。9.2.3.2移栽后10d～19d根系有一定的吸收功能，叶片也不再是非常幼嫩状态，要逐步降低空气湿度到40%～50%，塑料棚上的薄膜可逐渐打开或全部打开。叶面喷肥，喷施N15-P15-K15复合肥500倍，加速幼苗生长。每1周喷1次杀菌剂，一般可用多抗霉素1000倍和异菌多菌灵1500倍（或恶霉灵1000倍）以防根腐病、灰霉病等发生，详见附录B。9.2.3.3生长20d～30d一般在温室苗床移栽的组培苗，生长20d～30d即转移到营养杯内，在移栽时根系已盘根错节与基质一起形成一团，要求基质不散移入土中，并及时浇水。在营养杯内再长35d～40d，达到Ⅰ、Ⅱ级，即可出圃，详见附录A。10技术档案按GB/T6001要求，建立相应育苗技术管理档案。6DB21/T2433—2015（规范性附录）树莓组培苗木质量分级表A树莓组培苗木质量分级树种名称苗木种类苗龄苗木等级综合控制指标级苗百分率适用范围地径cm>苗高cm>根系地径苗根系长度侧根数根团直径cm>长度侧根数根团直径cm>树莓组培苗0.420以上50.2~0.45~10~10～203～5组培脱毒苗，顶芽完整，无机械损伤，无病虫害，不失水，有旺盛的生命力北至黑龙江、内蒙；南至广东、云南等省份注：1-0表示1年生组培苗，未经移植。7DB21/T2433—2015附录B（资料性附录）树莓组培苗移栽病虫害防治药剂用量表B树莓组培苗移栽病虫害防治药剂用量药剂名称剂型防治病害、虫害种类药量备注敌克松粉剂—500～800倍基质消毒异菌多菌灵悬浮剂根腐病、灰霉病1500倍移栽后喷施多抗霉素水剂根腐病、灰霉病1500～2000倍移栽后喷施恶霉灵99%粉剂根腐病、灰霉病1000倍移栽后喷施阿维菌素5%乳油红蜘蛛1500～2000倍移栽后喷施8DB21/T2433—2015附录C（资料性附录）组培室的构成及基本设备组培实验室一般应包括更衣室、洗瓶室、配置室、配药室、灭菌室、接种室、培养室、驯化棚室等。结合具体情况，可以合并部分分室。C.1洗瓶室用于玻璃器皿和实验用具的洗涤、干燥和贮存；培养材料的预处理与清洗；组培苗的出瓶、清洗和整理等。要求房间宽敞明亮，方便多人同时工作，有电源、水源，上下水通畅；地面耐湿、防滑、排水良好，便于清洁。设备及用具：工作台、烘箱、晾干架、周转筐、各种规格的毛刷、药品柜等。C.2培养基配置室用于培养基的配置、植物材料的预处理。要求房间宽敞明亮、通风干燥，方便