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DB21DetectionoffluorescentquantitationPCRforBabesiacanis辽宁省市场监督管理局发布I II 1 1 1 1 1 2 2 2 3 4本标准主要起草人：高志峰、张才、杨国丽、邓文超、张健、马建山、高原、兰1犬巴贝斯虫荧光定量PCR检测方法本标准规定了犬巴贝斯虫的荧光定量PCR检测方法的技术要求，包含规范性引用文件、缩略语、原本标准适用于在生物安全Ⅱ级（BSL-2）以上的实验室进行全血液样品中犬巴贝斯虫核酸的检测，PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreactdNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribTaq酶：ExTaqDNA聚合酶（TaqDNApolymeTAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸电泳缓冲液（Trisacetate-EDTAbuff特征。根据犬巴贝斯虫（Babesiacai2正向引物：5’-TGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTG-3’6.6基因组DNA纯化试剂盒100次7.1于犬前肢臂头静脉取300µl抗凝血，4℃保存，4h内使用全血基因组DNA提取试剂盒提取DNA。将免反复冻融(冻融不超过3次)。采集的样品密封后，采用保温壶或保温桶加冰密封，在6～8h之不管处理多少样品，血液加入到GenTLESol38.1.3室温放置10min以上，然后在室温条件下12000rpm离心5min。离心时，请注意离心管在离心机里的摆放方向要统一，离心管的小耳朵朝上。此时几乎看不到DNA沉淀。若离心温度低，会对收取的8.1.5加入1ml的GenTLESolutionII。此时GenTLESolutSolutionIII和异丙醇混合物）8.1.8室温12000rpm离心5m8.1.12干燥沉淀。因为该方法提取的DNA较大，完整性好，所8.2.4震荡混匀后使用离心机离心，此时拿出Tube时应小心不可以让聚集在管底的液体弹8.2.6荧光定量PCR反应结束后，从荧光定量PCR仪直接调取荧光定量PCR溶解曲线数据，进行溶解曲线

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