实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验

Thalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）中国南方不同高发地区人群携带率3~

24%当前1页，共44页，星期日。地贫的发病率、地域分布及危害

地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；广西发病率为20%；重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担和难以估量的精神负担；当前2页，共44页，星期日。当前3页，共44页，星期日。中国南方人群地贫基因携带率

地区携带率(%)

地贫β地贫合计广西17.66.424.0广东8.52.511.0海南12.72.715.4云南9.8

7.317.1贵州4.25.19.3重庆5.22.07.2当前4页，共44页，星期日。高发区人群遗传负荷评估当前5页，共44页，星期日。定义地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：

由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一种遗传性血红蛋白病。当前6页，共44页，星期日。其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为慢性进行性溶血性贫血。当前7页，共44页，星期日。地中海贫血的病理生理当前8页，共44页，星期日。当前9页，共44页，星期日。α-地中海贫血

重型α地贫（HbBart’s胎儿水肿综合征）4个α基因都缺失了(--/--)

，在孕后期或出生后即死亡。当前10页，共44页，星期日。当前11页，共44页，星期日。当前12页，共44页，星期日。当前13页，共44页，星期日。当前14页，共44页，星期日。当前10页，共44页，星期日。当前8页，共44页，星期日。实验：红细胞渗透脆性检验其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改变。6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色，读取光密度D2。当前39页，共44页，星期日。当前39页，共44页，星期日。当前1页，共44页，星期日。中国南方人群地贫基因携带率1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。SG-B母液采用氯化钠制成；3、5分钟后，加入B试验液1ml。地中海贫血确诊试验区人群携带率3~24%当前14页，共44页，星期日。重度β-地中海贫血当前15页，共44页，星期日。重度β-地中海贫血骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等当前16页，共44页，星期日。地中海贫血初筛检查2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分钟。当前19页，共44页，星期日。无创性产前诊断是未来发展的方向。SG-B母液采用氯化钠制成；溶血％=D1×100％当前3页，共44页，星期日。3、5分钟后，加入B试验液1ml。当前33页，共44页，星期日。常见于地贫或低频基因携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。常见于地贫或低频基因携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。(β0-thalmajor)4、将上清液轻轻倒入1.当前18页，共44页，星期日。5%,则高度怀疑为α地贫基因携带者;ξ阳性为标准α地贫.重度β-地中海贫血当前17页，共44页，星期日。重度β-地中海贫血当前18页，共44页，星期日。重度β-地中海贫血当前19页，共44页，星期日。重度β-地中海贫血当前20页，共44页，星期日。重度β-地中海贫血当前21页，共44页，星期日。当前22页，共44页，星期日。当前23页，共44页，星期日。结论1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基因携带者，推荐配偶行基因检测。2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产前诊断。3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊断，但推荐羊膜腔穿刺。5.无创性产前诊断是未来发展的方向。当前24页，共44页，星期日。羊膜腔穿刺术当前25页，共44页，星期日。羊膜腔穿刺术当前26页，共44页，星期日。实验室检查当前27页，共44页，星期日。--靶型RBC当前28页，共44页，星期日。

红细胞脆性实验Erythrocytefragilitytest地贫患者正常人当前29页，共44页，星期日。血红蛋白电泳Hemoglobinelectrophoresis当前30页，共44页，星期日。当前31页，共44页，星期日。

βchaindisappear(β0-thalmajor)αchaindisappear

(HbBart’shydropfetalis)

12341234

肽链分析Peptidechain

analyses

当前32页，共44页，星期日。单管多重PCR

当前33页，共44页，星期日。

PCR-ASO当前34页，共44页，星期日。诊断(Diagnosis)

临床特点＋实验室检查＋父母调查阳性＋（基因分析）当前35页，共44页，星期日。

地中海贫血初筛检查

MCV<80fl和/或MCH<27pg,则高度怀疑为地贫;红细胞渗透脆性试验阳性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.60):即可怀疑为地贫;HbA2<2.5%,则高度怀疑为α地贫基因携带者;ξ阳性为标准α地贫.HbA2>3.5%,则为β地贫基因携带者当前36页，共44页，星期日。

地中海贫血确诊试验

地贫诊断基因芯片(Thalachip);地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探针点杂交DNA测序当前37页，共44页，星期日。鉴别诊断(Differentialdiagnosis)

缺铁性贫血遗传性球形红细胞增多症传染性肝炎或肝硬化当前38页，共44页，星期日。实验：红细胞渗透脆性检验

(试剂盒一管法)当前39页，共44页，星期日。【检验原理】贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）当前40页，共44页，星期日。【主要组成成分】组成：由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）；SG-B母液（终止红细胞溶血液）；SG-C母液（红细胞溶血液）组成；成分：

SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化钠制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。当前41页，共44页，星期日。【样品要求】新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。当前42页，共44页，星期日。当前15页，共44页，星期日。2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分钟。当前32页，共44页，星期日。当前13页，共44页，星期日。当前2页，共44页，星期日。标本采集后，测试应在三日内完成。高发区人群遗传负荷评估新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。当前39页，共44页，星期日。当前19页，共44页，星期日。βchaindisappear3、5分钟后，加入B试验液1ml。高发区人群遗传负荷评估5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。（注56-64％为溶血率轻度降低）。【实验操作】1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分钟。3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5分钟。4、将上清液轻轻倒入1.0cm×1.0cm的比色杯中（切勿搅动试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色，读取光密度D2。7、按下列公式计算出溶血率百分比。溶血

％=D1

×100％D2X1.2