DB32T 3209-2017 脱毒甘薯种薯(苗)SPCSV、SPVG、SPLCV检测技术规程　　_第1页
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DB32江苏省质量技术监督局发布I本标准主要起草人：谢逸萍、孙厚俊、张梅1脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程本标准适用于脱毒甘薯种薯(苗)SPCSV、SPVG、SNY/T402-2000脱毒甘薯种薯（苗）病毒检测技术规程脱毒组培苗virus-freetissueculture脱毒种薯(苗)virus-frees用脱毒试管苗在60目防虫网室、温室条件下生产的符合质量标准的种2病毒病株允许率Maximumvirus-infectedplantpercentag4检测病毒种类甘薯褪绿矮化病毒（Sweetpotatochlor甘薯G病毒（SweetpotatovirusG甘薯卷叶病毒（Sweetpotatoleafcur5.1组培苗抽样5.1.2扩繁苗500株；超出1hm2面积，划出另一检验区，按本规程规定的面积取样。每株取上、中、下部叶片和叶柄定植后30d、收获前两周，采用随机取样法，0.1hm2以下检验5点，每点40株；0.11hm2～1hm2检验5点，每点100株；1.1hm2～5hm2检验10点，每点100株；超出5hm2面积，划出另一检验区，按本规程规定的面积取样。取样方法及样品保存同5.3所用化学试剂为分析纯级规格，用水为灭菌6.1.1三羟甲基氨基甲烷溶液(TBS)(pH=7.三羟甲基氨基甲烷（Tris）4.84g，氯化钠（NaCl）58.44g，溶于1990ml蒸馏水中，2％脱脂奶粉6.0g，先将脱脂奶粉溶解于少量TBS中，再用TBS定容至300ml，混匀。加6ml曲拉通蒸馏水中，用浓盐酸调pH值至9.5，定氯化硝基四氮唑蓝（NBT）0.04g溶于1.2ml70%N，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，-20℃避光保存备0.02g5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(BCIP)溶于1.2mlN，N-二甲基甲酰胺（DMF）中，-20℃避光将75µlNBT储备液溶于25ml底物缓冲液中，再逐滴加入75µlBCIP储备液，边加边振叶柄的结合部，需隔在塑料袋外取，只留叶片和叶柄的结合部，其余除去；加1ml磨。4℃静置30min～40min，或室温放置20min～30将一张干燥的滤纸放在实验台上，将硝酸纤维素膜放在上面，避免气泡产生；b、用移液枪吸取塑料袋中提取液上清部分15µl～20µl，点在膜上方格正中，枪头不可触碰到膜，一个样品用一个枪头，将干燥后的膜浸泡在封闭缓冲液中，室温下摇床振荡(50rpm/min)用洗涤缓冲液洗膜3次，每次摇床振荡(100rpm/m将膜置于NBT/BCIP底物溶液中，室温下摇床振荡(50rpm/min)孵育30_______________________

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