IHC产品培训材料-中文版

BioworldIHC产品培训IHC技术部目录1,产品清单2,产品使用3,销售技巧4,投诉处理1,产品清单BioworldIHC产品些列共有47个产品,包括试剂盒和相关辅助试剂。其中BD5001——BD5013是最常用的组化和荧光试剂盒。1,产品清单BD5001SuperSensitiveTM即用型超敏免疫组化二抗试剂盒（鼠/兔）BD5002羊抗鼠FITC荧光二抗试剂盒BD5003羊抗兔FITC荧光二抗试剂盒BD5004羊抗鼠TRITC荧光二抗试剂盒BD5005羊抗兔TRITC荧光二抗试剂盒BD5006鼠抗羊FITC荧光二抗试剂盒BD5007鼠抗羊TRITC荧光二抗试剂盒BD5008兔抗绵羊FITC荧光二抗试剂盒BD5009兔抗绵羊TRITC荧光二抗试剂盒BD5010DAPI试剂盒BD5011Hoechst33343试剂盒BD5012PI试剂盒BD5013Hoechst33343/PI试剂盒BD5014抗淬灭剂BD5015山羊封闭血清工作液BD5016兔血清原液BD5017小鼠血清BD5018山羊血清原液BD5019BSA溶液（PBS配制）BD5020BSA溶液（TBS配制）BD5021一抗稀释液BD5022荧光二抗稀释液BD50231%TritonX-100BD50243%双氧水BD502530%双氧水BD5026PBS溶液1,产品清单BD5027TBS溶液BD5028PBS干粉BD5029TBS干粉BD5030BSA固体BD5031DAB固体BD5032柠檬酸修复液BD5033EDTA修复液BD5034切片保护液BD5035苏木精染液BD5036伊红BD5037AEC液体kitBD5038DAB液体kitBD5039免疫组化湿盒10片BD5040载玻片盒100片BD5041载玻片操作板BD5042高清洁盖玻片BD5043防脱载玻片BD5044中性树胶BD5045APESBD5046HRP稳定剂BD5047免疫组化湿盒20片2,产品使用BD5001用于检测小鼠和兔来源的一抗，DAB显色，两步法。内含:双氧水，封闭液，一抗增强剂，HRP聚合物，DAB浓缩液和DAB底物稀释液6个产品。完全满足组化实验中从封闭到显色的全部试剂需求。（如图，棕色为阳性，蓝色为苏木精复染）除HRP聚合物外，试剂盒中其余5种试剂均有相关配套/辅助试剂。2,产品使用与BD5001相关的配套/辅助试剂是:BD5015/BD5018:山羊血清工作液/原液，用于封闭可能与二抗结合的抗原位点。BD5024/BD5025:3%和30%双氧水，用于封闭内源性过氧化物酶。BD5037/BD5038/BD5031:AEC/DABkit/DAB固体，用于显色，AEC为红色，DAB为棕色；DAB最为常用，可脱水后永久保存，AEC不能与酒精接触，所以保存时间较短。BD5019/BD5020/BD5030:BSA溶液/BSA固体，主要用于抗原位点封闭，有人喜欢用BSA代替羊血清。2,产品使用与BD5001相关的配套/辅助试剂是:BD5035:苏木精染液，用于组化最后的细胞核复染，这一步80%的实验是需要的。BD5042/BD5044:高清洁盖玻片/中性树胶，盖玻片是封片过程中必须的；但中性树胶仅用于DAB显色或脱水封片，可以永久保存。BD5023:1%Triton也是组织组化和细胞组化常用的试剂，用于破膜，增加细胞膜和核膜的通透性。BD5021:一抗稀释液，用于组化一抗的稀释，可长期保存。2,产品使用BD5002-5009:荧光二抗试剂盒FITC是绿色荧光，TRITC是红色荧光。两种可以组成红绿双标。注意双标时一抗要不同来源，二抗与一抗不同来源。（如图所示，绿色是FITC标记二抗，红色是TRITC标记二抗）上述荧光试剂盒里含有封闭液、荧光二抗稀释液、荧光二抗、防淬灭剂四种。满足从封闭到封片的全部需要。试剂盒所有试剂均有单独的配套试剂。2,产品使用与荧光二抗试剂盒配套/辅助试剂:BD5014:抗淬灭剂，用于荧光二抗的最后封片，可以减缓荧光的衰减和淬灭；至少保存一周。BD5022:荧光二抗稀释液，用于稀释荧光二抗，可以使荧光二抗长期保持有效。BD5015——BD5020:封闭血清。用于抗原位点的封闭。二抗来源对应血清，如羊抗鼠荧光二抗，用羊血清封闭；鼠抗羊荧光二抗，用鼠血清封闭。BD5023:1%Triton也是组织组化和细胞组化常用的试剂，用于破膜，增加细胞膜和核膜的通透性。2,产品使用与荧光二抗试剂盒配套/辅助试剂:BD5010:DAPI试剂盒，用于细胞核染色，最常用于荧光染色后细胞核着色和检测细胞凋亡；细胞核为蓝色，活细胞死细胞均能着色，与Hoechst33343同效，但是抗淬灭效果更好；与绿色和红色荧光组成双标/三标荧光；（如左下图，蓝色为Hoechst核染，绿色为FITC标记荧光二抗，红色为TRITC标记荧光二抗）BD5011:Hoechst33343试剂盒，用于细胞核染色，最常用于荧光染色后细胞核着色和检测细胞凋亡；细胞核为蓝色，活细胞死细胞均能着色，与DAPI同效；与绿色和红色荧光组成双标/三标荧光。（如右下图，蓝色为Hoechst核染，绿色为FITC标记荧光二抗）2,产品使用BD5010:DAPI试剂盒。用于细胞核染色，最常用于荧光染色后细胞核着色和检测细胞凋亡。在检测细胞凋亡时，主要是细胞实验，活细胞死细胞均能着色；活细胞为淡蓝色，凋亡细胞为亮蓝色。（如下图）用免疫荧光前面已经介绍。与绿色和红色荧光组成双标或三标荧光（不再赘述）。（与BD5011Hoechst同效）2,产品使用BD5011:Hoechst33343试剂盒用于细胞核染色，最常用于荧光染色后细胞核着色和检测细胞凋亡。在检测细胞凋亡时，主要是细胞实验，活细胞死细胞均能着色；活细胞为淡蓝色，凋亡细胞为亮蓝色。（如下图）用免疫荧光前面已经介绍。与绿色和红色荧光组成双标或三标荧光（不再赘述）。（与BD5010DAPI同效）2,产品使用BD5012:PI试剂盒。用于细胞核染色，最常用检测细胞凋亡。在检测细胞凋亡时，主要是细胞实验，只有凋亡晚期或死细胞能着色；活细胞不着色，凋亡细胞为红色。（如左下图）有时也有客户喜欢用于细胞免疫荧光的细胞核标记。（如右下图，红色为PI染色细胞核，绿色为目的蛋白）2,产品使用BD5013:Hoechst33343/PI试剂盒用于细胞核染色，最常用检测细胞凋亡。PI只有对凋亡晚期或死细胞能着色；活细胞不着色，凋亡细胞为红色。Hoechst33343对活细胞死细胞均能着色；活细胞为淡蓝色，凋亡细胞为亮蓝色。（如图）2,产品使用两种产品既可以用于IHC封闭,也可以用于WB封闭。BD5019BSA溶液（PBS配制）BD5020BSA溶液（TBS配制）2,产品使用BD5032/BD5033:柠檬酸修复液/EDTA修复液:主要用于石蜡切片的抗原修复。柠檬酸修复液又叫枸橼酸修复液，是传统的修复液；EDTA是新兴修复液，不同客户选择不同。现在病理科逐渐用EDTA替代柠檬酸。BD5034:切片保护液主要用于冰冻切片的-20℃保存。BD5032柠檬酸修复液BD5033EDTA修复液BD5034切片保护液2,产品使用上述四种缓冲液浓缩液或干粉是IHC\IF\ICC\WB最常用的缓冲试剂。非常方便客户使用。BD5026PBS溶液BD5027TBS溶液BD5028PBS干粉BD5029TBS干粉2,产品使用上述两种产品用途比较特殊。APES主要用于处理载玻片防脱功能,主要替代品是多聚赖氨酸（太贵）。HRP稳定剂主用用于HRP标记的二抗、抗原的保护。BD5045APESBD5046HRP稳定剂2,产品使用上述6款产品是组化实验中必须用到的操作器材。10片装湿盒是耐高温的(100℃可用)。BD5039免疫组化湿盒10片BD5040载玻片盒100片BD5041载玻片操作板BD5042高清洁盖玻片BD5043防脱载玻片BD5047免疫组化湿盒20片2,产品使用上述两种产品是用于HE染色的染料,其中苏木精将细胞核染成蓝色；伊红将细胞质染成粉红色,在病理观察中最常用,也是最古老的染料,至今一直不可替代。其中苏木精是DAB组化中用于染核的必备染料。BD5035苏木精染液BD5036伊红2,产品使用IHC技术服务:我把IHC技术服务也列为产品使用行列；具体在年中会的PPT已经有所介绍，在此不赘述。收费细节，将在后面推出。3,销售技巧在销售过程中肯定会遇到很多的同行竞争产品,特别是价格战。遇到此类问题时,要跟客户强调我们产品的优点。先将几款产品的有点和竞争对手产品的缺点对比列出来,希望对销售有所帮助。3,销售技巧BD5001:SuperSensitiveTM即用型超敏免疫组化二抗试剂盒（鼠/兔）优点:1，试剂齐全，内含6种试剂，同时抗鼠/抗兔，节约成本；2，操作时间短，只需10分钟；3，灵敏度非常高，非特异性非常低；4，品质目前最优，非生物素依赖。对手缺点:1，试剂盒不全，需要购买其他辅助试剂；2，操作时间长；3，生物素标记的二抗会有背景；灵敏度低；4，抗鼠与兔分开，需重复购买。3,销售技巧BD5001-BD5009:荧光二抗试剂盒系列优点:1，内含封闭液，稀释液，抗淬灭剂等配套试剂，一次购买完成，无需另行购买；2，质量可靠稳定，1:200稀释可用，质检效果非常好；竞争对手缺点:1，都是单独的荧光二抗，没有相关配套试剂，需另行购买；2，部分国产试剂质量不可靠；3,销售技巧BD5010-BD5013:荧光核染色试剂盒系列优点:1，为浓缩液，配有稀释液，稀释后直接可用，无需另行配置；2，目前国内性价比最高；按需购买，不会造成浪费；3，原料来源于sigma；4，Hoechst和PI试剂盒只需购买一次，无需购买两次；客户也可以根据自己需要随意搭配，如DAPI与PI联合使用。对手缺点:1，固体分装，需自己配置；2，液体价格太高，没有稀释液；3,销售技巧由于很多IHC试剂盒和IF用的二抗都没有像我们这样配套齐全，所以即使遇到客户以及买了二抗试剂盒或者荧光二抗，仍然可以向客户推荐相应配套试剂:如一抗稀释液，山羊血清工作液，DABkit/AECkit，DAPIkit/Hoechstkit，荧光二抗稀释液，抗淬灭剂，切片保护液，中性树胶，1%TritonX-100，苏木精染液，载玻片，盖玻片，湿盒，载玻片操作板，载玻片盒等除二抗试剂盒和荧光二抗之外的所有配套试剂。百思必有一疏，总有一种产品是客户没有想到的。当然，我们也是不是100%齐全，但是99%齐全。3,销售技巧与组化相关但是我们没有是试剂:1，多聚赖氨酸，用于处理细胞培养用盖玻片。因为价格太高，没有进货，建议sigma（sigma,NO:P7280）购买，或者建议可以直接购买已经处理好的盖玻片（Nunc,NO:150067,174969,174977,174950,174985,174934）。2，胰酶，在WB实验中用到的最多；此处ICC用到的较少，最好分类于细胞培养类，invtrogen有；3，MMT检测细胞活力试剂；MMT最好现用现配，不好长期保存，且价格低廉，很容易从sigma买到现货。以上厂家仅仅是推荐，具体销售根据自己掌握的情况跟客户推荐。4,投诉与建议遇到产品投诉时,不必惊慌,任何产品都会遇到产品投诉,即使是最好的苹果手机和电脑。客户的投诉有助于我们产品质量的提升,所以投诉有时候是有益的。遇到投诉最主要的是耐心和倾听,即使记录客户遇到的问题。投诉很多时候是因为客户在使用产品时没有仔细看说明书造成的。还有产品失效是客户没有按照说明书要求保存造成的。4,投诉与建议可能会投诉的几款产品常见问题:1，BD5001常见问题:1，有背景；2，无显色；3，配套试剂不够解决方案:1，销售首先清楚:有背景的原因肯定不是二抗试剂盒本身造成的，此产品质量相当可靠（不可以这样跟客户说，但心里要清楚）；造成背景的原因有很多，比如石蜡切片脱蜡不彻底；冰冻切片H2O2封闭不彻底；一抗非特异性；二抗与组织反应。逐一突破:如果是石蜡切片脱蜡不彻底，一般跟DAB也会直接有颜色反应，建议客户用载玻片与DAB显色液直接反应观察；冰冻切片类似，建议与DAB显色液直接反应即可知道；对于一抗非特异性，建议客户增加一抗来的阴性IgG（我们公司有货）做对照或一抗来源血清做对照，观察是否有颜色反应，如果有，说明组织本身与一抗来源的IgG结合，必须更换一抗；对于二抗非特异性反应，本试剂盒极少出现，但也不排除此类情况，也不是组织本身还有大量小鼠IgG或兔IgG的时候，客户可以直接取组织与二抗反应，观察；可以用二抗来源的血清封闭，如果封闭后仍有反应，建议客户更换二抗试剂盒。4,投诉与建议2，无显色无显色的原因:1，二抗与一抗不匹配，本试剂盒只用于小鼠和兔来源一抗，且能够用于IHC的一抗；2，DAB显色液失效；直接取试剂盒中的HRP聚合物与DAB显色液反应，观察是否有颜色反应，没有反应，证明DAB可能失效；3，一抗与抗原不结合；更换一抗。4，HRP聚合物失效，取新鲜配制的DAB显色液与HRP反应，观察颜色反应；5，用荧光二抗检测一抗，看是一抗还是二抗造成的不显色。6，脱蜡是否彻底，如果脱蜡不彻底，一抗不与抗原结合，二抗孵育后也可能不显色；7，抗原修复方法不对或者不到位，或者修复过度。不同一抗对抗原修复的要求有所不同，有的抗体对于不修复组织更灵敏。8，IHC是一个步骤简单但是问题复杂的技术，没有任何实验一次就成功的，总要有个熟悉过程。掌握技术是次要的，解决问题才是学习的关键。4,投诉与建议3,配套试剂不够BD5001中的DAB浓缩液可能会不够用,可以用BD5031（DAB固体）或BD5038（DAB液体kit）替代；我们的滴瓶每滴是40ul的量,假设每张组织片用80ul,可以做60多张载玻片,如果客户很节约,只用1滴,则可以做120多张；4,投诉与建议BD5002-BD5009:荧光二抗系列。荧光抗体在使用时遇到的问题跟组化的类似。特