DB22T 394.4-2017 保健用品微生物检验方法 第4部分：金黄色葡萄球菌测定　　

备案号：58312-2018DB22DB22/T394.4—2017保健用品微生物检验方法第4部分：金黄色葡萄球菌测定MicrobiologicalexaminemethodforhealthcarematerialPart4:DeterminationofStaphylococcusaureus吉林省质量技术监督局发布I本部分代替DB22/T394-2004《1警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问金黄色葡萄球菌staphylococc4.1灭菌生理盐水:详见附录A.1。4.3灭菌吐温-80:详见附录A.3。25.4量筒:100mL、200mL、2006.2.1供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得6.2.2接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能6.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取6.2.4在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染取样品10g（5.1先加5mL（5.2）灭菌液体石蜡混匀，再加10mL（5.2）灭菌的吐温-80，在40℃~44℃水浴(5.5)中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75mL（5.4在40℃~44℃水浴中预温），在40℃~44℃水浴（5.5）中乳化，制成1:10的悬液。3亲水性的样品，称取10g（5.1加到装有玻璃珠及90mL灭菌生理盐疏水性样品，称取10g（5.1放到灭菌的研钵(5.7)中，加10mL（5.2）灭粘稠状再加入10mL（5.2）灭菌吐温-80，研磨待溶解后，加70mL（5.4）灭菌生理盐水，在40℃~44称取10g（5.1加到90mL（5.4）灭菌生理盐水中，充分振荡取10cm2，将膜剪成碎片，置灭菌锥形瓶中（5.6），加100mL（5.4）生理盐水，使成10mL/cm2取阳性对照菌株，同时自上述增菌培养液中，取1～2接种环（5.10划线接种在BairdParker平板培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置36℃±1℃培养（5.9）48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在BairdParker培养基挑取分纯菌落，涂片,进行革兰氏染色，镜检（5.11）。金黄色葡萄球菌为4取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入2mm～3mm（5.2）内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL（5.2分别加入灭菌1:4血浆0.5mL（5试剂或材料A.1.1成分A.1.2制法A.4.1成分A.4.2制法6A.5.1成分A.5.2制法A.6.1成分A.6.3制法菌15min。临用时加热溶化琼脂，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰A.7.1成分A.7.2制法将营养琼脂加热融化，待冷至50℃左右无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备7A.8.1.2革兰氏碘液碘将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分A.8.1.3脱色液A.8.1.4复染液A.8.1.4.1沙黄复染液A.8.2.1将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，A.8.2.2滴加革兰氏碘液，作用1min，A.9.1成分8A.9.2制法将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调p