微生物学检验技术 课件 19项目十九：病原性球菌鉴定

项目十九病原性球菌鉴定学习目标1.掌握葡萄球菌属、链球菌属、奈瑟菌属的主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。2.熟悉肠球菌属主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。3.了解常见病原性球菌的临床意义。4.具有正确采集和处理常见病原性球菌检验标本及进行相关检测的能力。5.能正确选择试验项目对常见病原性球菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目十九病原性球菌鉴定思维导图项目十九病原性球菌鉴定项目十九病原性球菌鉴定概述又称化脓性球菌革兰阳性球菌：葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属

革兰阴性球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌球形，无鞭毛，无芽胞一、葡萄球菌属项目十九病原性球菌鉴定1.形态与染色：革兰染色阳性球菌，葡萄串状排列。一、葡萄球菌属（一）生物学特性葡萄球菌显微镜下形态特征葡萄球菌电镜下形态特征2.培养特性：(1)营养要求不高。(2)可产生脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素等。(3)金葡菌在血平板上形成β-溶血的菌落。(4)某些菌株耐盐性强，能在含10%～15%NaCl的培养基中生长。一、葡萄球菌属（一）生物学特性金葡在普琼上菌落形态特征金葡在血平板上菌落形态特征金葡在血平板上产生β-溶血一、葡萄球菌属（一）生物学特性表葡在普琼上产生白色色素表葡在血平板上产生白色色素3.生化反应：触酶阳性，能分解多种糖类如葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病菌株可分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶，耐热DNA酶阳性。一、葡萄球菌属（一）生物学特性一、葡萄球菌属（一）生物学特性甘露醇分解试验新生霉素敏感试验血浆凝固酶试验DNA酶试验4.抗原构造

（1）蛋白质抗原：主要为葡萄球菌A蛋白（staphylococcalproteinA，SPA），SPA可与人类IgG的Fc段非特异性结合，而不影响Fab段与特异性抗原结合，故可作为载体，结合特异性抗体后，通过协同凝集试验检测多种微生物抗原。（2）多糖类抗原：属于半抗原，具有型特异性，存在于细胞壁中，是金黄色葡萄球菌的一种重要抗原。一、葡萄球菌属（一）生物学特性5.分类：色素、生化反应一、葡萄球菌属（一）生物学特性

性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌色素金黄色白色白色或柠檬色发酵甘露醇+--凝固酶+--耐热核酸酶+--致病性+--α溶素+--6.抵抗力：无芽胞细菌中抵抗力最强的一种，耐热、耐干燥，耐盐性强，能在含10%～15%NaCl琼脂中生长。5％石炭酸、0.1％升汞中10～15min死亡。对青霉素、金霉素、红霉素等敏感，该菌易产生耐药性。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已成为医院感染最常见的致病菌。一、葡萄球菌属（一）生物学特性1.主要致病物质：（1）酶类：凝固酶、耐热核酸酶、透明质酸酶、磷脂酶等。（2）毒素：葡萄球菌溶素、肠毒素、杀白细胞素、毒性休克综合征毒素、表皮剥脱毒素2.所致疾病：（1）侵袭性疾病（2）毒素性疾病（3）医院感染一、葡萄球菌属（二）临床意义1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓液、渗出液、伤口分泌物、血液、粪便、痰液以及脑脊液等。食物中毒采集粪便、呕吐物或剩余的食物。一、葡萄球菌属（三）微生物学检验2.检验程序一、葡萄球菌属（三）微生物学检验3.检验方法（1）直接镜检：找到革兰阳性球菌，呈葡萄串状排列，疑为葡萄球菌

（2）分离培养：血液标本增菌培养，有菌生长转种血平板进一步鉴定；脓液、分泌物、尿液等标本直接接种血平板；粪便、呕吐物，接种高盐甘露醇平板。

（3）鉴定：1）触酶试验：葡萄球菌属阳性，链球菌属为阴性。2）血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌阳性。3）甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌为阳性。4）新生霉素敏感试验：腐生葡萄球菌（R），表皮葡萄球菌（S）。5）肠毒素检测一、葡萄球菌属（三）微生物学检验一、葡萄球菌属（三）微生物学检验金黄色葡萄球菌（S）

表皮葡萄球菌（S）

腐生葡萄球菌（R）

新生霉素敏感试验一、葡萄球菌属（三）微生物学检验表19-1葡萄球菌属与微球菌属的鉴别要点鉴定项目葡萄球菌属微球菌属形态、排列球菌以葡萄状排列为主球菌以四联排列为主发酵葡萄糖产酸＋－杆菌肽（0.04u/片）+－呋喃唑酮（100ug/片）－+一、葡萄球菌属（三）微生物学检验表19-2葡萄球菌属与链球菌属、奈瑟菌属的鉴别要点鉴定项目葡萄球菌属链球菌属奈瑟菌属革兰染色G＋球菌G＋球菌G－球菌触酶＋－＋氧化酶－－＋一、葡萄球菌属（三）微生物学检验表19-3常见有临床意义的4种葡萄球菌的鉴别要点菌名血浆凝固酶耐热DNA酶脲酶甘露糖发酵新生霉素耐药多粘菌素B耐药金黄色葡萄球菌＋＋d＋－＋表皮葡萄球菌－－＋－－＋溶血葡萄球菌－－－－－－腐生葡萄球菌－－＋－＋－注：d：不定二、链球菌属项目十九病原性球菌鉴定1.形态与染色：革兰阳性球菌，链状排列；肺炎链球菌呈矛尖状，宽端相对，尖端向外，成双排列。二、链球菌属（一）生物学特性链球菌显微镜下形态特征链球菌电镜下形态特征二、链球菌属（一）生物学特性肺炎链球菌荚膜肺炎链球菌显微镜下形态特征2.培养特性(1)营养要求高，加入血液、血清或腹水等。(2)不同菌种在菌落周围出现不同溶血现象。(3)肺链在血平板上脐窝状菌落，周围形成草绿色溶血环。二、链球菌属（一）生物学特性肺链血平板上菌落形态肺链脐窝状菌落3.生化反应：（1）触酶阴性（区别于葡萄球菌属）（2）分解葡萄糖，不分解菊糖（3）A群：杆菌肽（S），PYR（+）（4）B群：CAMP（+），马尿酸钠（+）（5）D群：PYR（+），七叶苷（+）（6）甲链不分解菊糖，对Optochin耐药；肺链分解菊糖，对Optochin敏感，胆盐溶菌试验阳性，荚膜肿胀试验阳性。二、链球菌属（一）生物学特性触酶阴性（右）二、链球菌属（一）生物学特性D群：七叶苷+（上）A群：杆菌肽（S）二、链球菌属（一）生物学特性肺链：Optochin

（S）B群：CAMP+4.抗原构造

（1）多糖抗原：具有群特异性，是细胞壁上的多糖成分。根据多糖抗原的不同，将链球菌分为20群，对人致病的90%为A群。（2）蛋白质抗原：具有型特异性，位于C抗原表面，是细胞壁上的蛋白质成分。与人类致病性有关的是M抗原，它是A群链球菌的主要致病物质，还是引起超敏反应性疾病的异嗜性抗原。（3）核蛋白抗原：无特异性，为各种链球菌所共有，并与葡萄球菌有交叉。二、链球菌属（一）生物学特性5.分类：（1）根据溶血现象不同分为3类1）甲型溶血性链球菌2）乙型溶血性链球菌3）丙型链球菌（2）根据多糖抗原分类：Lancefield将乙型溶血型链球菌分成A～H、K～V等20群。二、链球菌属（一）生物学特性6.抵抗力：本菌对外界抵抗力不强，60℃30min即可将其杀死，对常用消毒剂敏感。乙型溶血性链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类药物敏感。二、链球菌属（一）生物学特性1.主要致病物质：（1）A群链球菌有较强的侵袭力，可产生多种外毒素和胞外酶。1）链球菌溶血素2）致热外毒素3）M蛋白4）侵袭性酶（2）肺炎链球菌的致病物质：主要依靠其荚膜的抗吞噬作用。2.所致疾病：（1）β-溶血链球菌：A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染的90％。（2）α-溶血链球菌：主要包括肺炎链球菌、草绿色链球菌和D群链球菌部分菌株。二、链球菌属（二）临床意义1.标本采集：根据不同病症和体征采集不同标本。脓汁、咽拭子、血液和痰液等标本采集后2h内运到实验室，立即检查和接种。对B群溶血性链球菌的检查，用无菌棉签采集第35～37w妊娠妇女的阴道分泌物，置于选择性培养肉汤中孵育18～24h，再作分离培养。链球菌所致的超敏反应性疾病，如风湿热、急性肾小球肾炎等，应采集血清标本进行抗链球菌溶血毒素O抗体检测。二、链球菌属（三）微生物学检验2.检验方法（1）显微镜检查：“查见革兰阳性球菌，链状排列，疑为链球菌”；或“查见革兰阳性矛头状球菌，成双排列，疑为肺炎链球菌”（2）分离培养1）血液等标本增菌培养，有菌生长转种血平板进行分离培养。2）采用血平板培养有助于识别溶血特性和进一步鉴定。（3）初步鉴定：取平板上菌落周围呈现溶血或不溶血的单个菌落作涂片，如果为革兰阳性球菌，链状或短链状排列，进一步作触酶试验阴性，6.5％NaCl不生长者，可确定为链球菌属细菌。二、链球菌属（三）微生物学检验二、链球菌属（三）微生物学检验表19-5β溶血性链球菌鉴定表19-5β溶血性链球菌鉴定表19-5β溶血性链球菌鉴定Lancefield抗原群PYR杆菌肽敏感CAMPA群++－B群－－+C群－－－二、链球菌属（三）微生物学检验表19-5β溶血性链球菌鉴定表19-5β溶血性链球菌鉴定表19-6非β溶血链球菌鉴别

菌种α-溶血Optochin敏感胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌＋S＋－草绿色链球菌＋R－－D群链球菌＋/－R－+二、链球菌属（三）微生物学检验表19-5β溶血性链球菌鉴定表19-5β溶血性链球菌鉴定表19-7草绿色链球菌群间鉴别菌群甘露醇山梨醇七叶苷VP精氨酸脲酶缓症链球菌群------米勒链球菌群+/--+/-++-变异链球菌群++++--唾液链球菌群--＋+/--+/-三、肠球菌属项目十九病原性球菌鉴定1.形态与染色：革兰阳性球菌，呈单个、成双或短链状排列；无芽胞，无荚膜，大多数无鞭毛（某些菌种有稀疏鞭毛）。三、肠球菌属（一）生物学特性2.培养特性：大多数菌株在10℃和45℃均能生长，营养要求高，在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、高胆汁（40%）培养基上能生长，此点可与链球菌鉴别。肠球菌镜下形态2.培养特性：在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0.5～1.0mm大小的圆形菌落，不溶血或α-溶血，少数β-溶血。三、肠球菌属（一）生物学特性

肠球菌在血平板上不溶血

肠球菌在血平板上α-溶血3.生化反应：触酶阴性，能分解多种糖类产酸不产气，多数肠球菌PYR试验阳性，胆汁七叶苷试验阳性。4.分类：肠球菌属归类链球菌科，在Lancefield血清分类上属D群。临床标本分离的肠球菌多属于肠球菌属Ⅱ群，分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。5.抵抗力：肠球菌抵抗力较弱，但对大多数常用的抗菌药物呈天然耐药，第三代头孢菌素类对其无效。三、肠球菌属（一）生物学特性1.主要致病物质：（1）表面黏附素：主要包括聚集物质、肠球菌表面蛋白、粪肠球菌胶原黏附素、粪肠球菌心内膜炎抗原等。（2）炎症调节因子：引起组织损伤。（3）毒素：60％的粪肠球菌可分泌溶细胞素。2.所致疾病：（1）泌尿系感染：最常见的是尿路感染。（2）心内膜炎：肠球菌是引起心内膜炎的第3位病原菌。（3）腹膜炎：腹膜感染中肠球菌检出率位居第3位。（4）牙髓疾病：慢性根尖牙周炎患者封闭的牙根管中可分离出粪肠球菌。三、肠球菌属（二）临床意义1.标本采集：根据不同病症和体征采集不同标本。采集血液、尿液、创伤标本、脓性分泌物等。2.检验方法：（1）显微镜检查：查见革兰阳性球菌（2）分离培养1）血液等标本增菌培养，发生混浊生长进一步转种血平板分离培养。2）脓汁、创伤标本、尿液标本直接接种血平板，如送检标本中含革兰阴性杆菌，可用选择性培养基。（3）生化反应：触酶试验阴性，氧化酶试验阴性，分解甘露醇、蔗糖、精氨酸，PYR试验阳性，胆汁七叶苷试验阳性，6.5%NaCl培养基上可生长，在10℃和45℃均能生长。三、肠球菌属（三）微生物学检验3.鉴别要点三、肠球菌属（三）微生物学检验表19-8临床标本常见肠球菌属种间鉴别试验山梨醇阿拉伯糖丙酮酸盐粪肠球菌＋－＋屎肠球菌－＋－四、奈瑟菌属项目十九病原性球菌鉴定1.生物学性状（1）形态与染色：革兰阴性球菌，呈肾形或咖啡豆形，凹面相对，成双排列，无芽胞、无鞭毛，有菌毛，有荚膜。四、奈瑟菌属（一）脑膜炎奈瑟菌1.生物学性状（2）培养特性：专性需氧，营养要求高。在血琼脂平板、巧克力平板上可见半透明菌落。四、奈瑟菌属（一）脑膜炎奈瑟菌（3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖产酸不产气，不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖。氧化酶试验阳性，触酶试验阳性。（4）抗原构造和分类：主要有荚膜多糖抗原、外膜蛋白抗原、脂多糖抗原和核蛋白抗原4种抗原。（5）抵抗力：对外界环境和理化因素的抵抗力很弱，尤其对寒冷、干燥和热抵抗力弱。脑膜炎奈瑟菌巧克力平板上菌落2.临床意义（1）主要致病物质：荚膜、菌毛和内毒素。内毒素作用于小血管或毛细血管，引起血栓、出血，表现为皮肤出血性瘀斑，大量内毒素可引起DIC，导致休克；作用于肾上腺，导致肾上腺出血。（2）所致疾病：主要引起流行性脑脊髓膜炎（1）传染源：携带者、病人（2）传播途径：呼吸道（3）流行季节：冬末春初四、奈瑟菌属（一）脑膜炎奈瑟菌四、奈瑟菌属（一）脑膜炎奈瑟菌检验程序3.微生物学检验（1）标本采集：根据临床症状和体征不同采集不同标本，标本采集后注意保温、保湿并及时送检，标本不宜置冰箱中保存。（2）检验方法1）显微镜检查：检出革兰阴性双球菌，疑似脑膜炎奈瑟菌2）分离培养：血液或脑脊液先增菌。如发生混浊生长，转种巧克力平板分离培养。其他标本直接分离于血平板、巧克力平板或EPV平板。3）生化反应：氧化酶阳性，触酶阳性，分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气。4）血清学试验：荚膜多糖抗原直接凝集试验阳性。5）快速诊断方法：对流免疫电泳、SPA协同凝集试验和ELISA等。四、奈瑟菌属（一）脑膜炎奈瑟菌