溶血性贫血实验室检查

根据病因和发病机制的贫血分类一、红细胞生成不足（一）造血干细胞复制和分化异常再生障碍性贫血异常细胞或组织骨髓浸润骨髓病性贫血原因不明或多种机制慢性系统性疾病（慢性感染、炎症、恶性肿瘤、慢性肾病、肝病、风湿性疾病、内分泌病等）伴发的贫血（二）细胞分化和成熟障碍

DNA合成障碍叶酸及（或）维生素B12缺乏所致巨幼细胞贫血血红蛋白合成障碍缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血珠蛋白合成缺陷珠蛋白生成障碍性贫血（海洋贫）二、红细胞破坏过多红细胞内在缺陷（遗传性缺陷）红细胞外来因素（获得性因素）三、失血急性失血急性失血后贫血慢性失血同缺铁性贫血溶血性贫血

的实验室检查02什么叫溶血性贫血？hemolyticanemia----指各种原因导致红细胞生存时间缩短、破坏增多或加速，骨髓代偿造血功能不足时所发生的一类贫血。什么叫溶血性疾病？指骨髓代偿能力尚足以补偿红细胞的损耗而不出现贫血。01RBC膜缺陷：遗传球PNHB结构异常：海洋性贫血RBC内酶缺陷：G-6PD缺乏症RBC内在缺陷所致的溶贫AIHA、药物、化学因素、感染因素RBC外来因素所致的溶贫溶血性贫血的分类(病因和发病机制)01血管内溶血：RBC在循环血液中直接破坏，如血型不合输血PNH02血管外溶血：RBC在脾脏破坏，如球形RBC增多症、脾亢03原位溶血：幼RBC在骨髓中溶血，如AL、巨幼贫溶血性贫血的分类（溶血的场所）AB第二步哪一类溶贫第一步确定是否有溶血如何诊断溶血性贫血？01找出RBC破坏增多的依据02RBC寿命缩短03血片见RBC碎片04血浆游离HB增高（血管内溶血）05HB尿检测（＋），酱油色06尿含铁血黄素试验（＋）07血清非结合胆红素（间接胆红素）增高08尿胆原增高09血清结合珠蛋白减低10血浆高铁血红素清蛋白检测（＋）电泳法：区带首先确定有无溶血Hb代谢示意图

珠蛋白血红素铁+卟啉单核巨噬系统脾脏血管外溶血RBC血管内溶血血浆游离Hb肾脏血红蛋白尿游离胆红素肝脏结合珠蛋白近曲小管上皮细胞肾阈结合胆红素粪胆原的肠肝循环含铁血黄素尿

Rous实验胆汁粪胆原肠道血液肾脏尿胆原高铁血红蛋白清蛋白/血红素蛋白红细胞寿命测定01方法：51Cr标记红细胞，检测其半衰期02正常红细胞半衰期25—32天03溶血性贫血者半衰期小于15天04确定溶血性贫血的可靠方法05溶血性贫血筛查血浆游离血红蛋白测定01参考值：＜50mg/L(1-5mg/dl)02临床意义：03血管内溶血者明显升高04AIHA、珠蛋白生成障碍性贫血者轻度升高05血管外溶血时正常06溶血性贫血筛查感染、创伤、糖皮质激素治疗、服用避孕药物、肝外阻塞性黄疸可增高肝病、传单、先天性无结合珠蛋白血症减少或消失各种溶血均可减低，血管内溶血减低最显著临床意义：参考值：血清结合珠蛋白测定溶血性贫血筛查方法：生化法：与硫化铵形成铵血色原，经光谱仪测定558nm吸收光带电泳法：醋酸纤维膜电泳正常值：阴性临床意义：阳性者表示严重的血管内溶血血浆高铁血红素清蛋白测定020103050604溶血性贫血筛查含铁血黄素尿试验（Rous试验）原理：铁离子+氰化钾铁氰化铁（蓝色）如肾小管上皮有含铁血黄素，该试验阳性正常值：阴性临床意义：阳性者表示慢性血管内溶血，如PNH010302040506溶血性贫血筛查含铁血黄素显示红细胞代偿增生依据外周血网织红增多；外周血红细胞形态：大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、Cabot环、点彩红细胞等增生性贫血骨髓象：增生明显活跃，红系显著增生，粒系相对减少，巨核系一般正常红细胞渗透脆性试验红细胞孵育渗透脆性试验自身溶血试验及纠正试验红细胞膜缺陷的检验二、哪一类溶血性贫血？正常红细胞为双凹圆盘状,在低渗盐水中吸水膨胀的适应性较大(可增加70%的体积而不破裂)本试验是测定红细胞在一系列不同浓度低渗氯化钠盐水内开始溶血和完全溶血的氯化钠浓度，检测其对不同浓度的低渗盐水溶血的抵抗力。原理:遗传性球形细胞增多症等红细胞的表面积/体积(S/V)的比值小,对低渗盐水的适应性小(脆性增大)1、细胞渗透脆性试验红细胞渗透脆性试验（erythrocyteosmoticfragilitytest)原理：低渗溶液红细胞皱缩高渗溶液正常等渗溶液红细胞膨胀甚至破裂低渗溶液030201

参考值

0.6-0.8%NaCl溶液——红细胞不破裂

0.42-0.46%NaCl溶液——部分红细胞破裂

0.28-0.34%NaCl溶液——红细胞完全破裂NaCl0.85%0.6%0.42%0.34%0.8%0.7%对低渗溶液抵抗能力减小即RBC渗透脆性增加临床意义脆性增高开始溶血及完全溶血时氯化钠浓度较正常对照提前两管，即0.04%以上;开始溶血＞0.5%，完全溶血＞0.38%主要见于遗传性球形红细胞增多症脆性减低小细胞低色素性贫血：海洋性贫血、缺铁性贫血2、红细胞孵育渗透脆性试验原理37℃孵育24小时，细胞内葡萄糖消耗增加，ATP减少，钠离子泵出减少，细胞膨胀，脆性增高。参考值未孵育50%溶血4~4.45g/LNaCl孵育50%溶血4.65~5.9g/LNaCL临床意义——常用于轻型遗传球、遗传性非球形细胞溶血的诊断脆性增高遗传性球形红细胞增多症脆性减低缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、镰形细胞贫血、脾切除术后先天性非球形红细胞溶血患者红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，ATP不足不能维持细胞钠泵作用患者红细胞在自身血浆中孵育48h，溶血增强，可加入葡萄糖、ATP，观察溶血能否被纠正参考值正常人孵育后轻微溶血、溶血度＜3.5%加葡萄糖和加ATP后，溶血明显纠正，溶血度＜1%原理3、自身溶血试验及纠正试验3、自身溶血试验及纠正试验

临床意义——常用于遗传球、遗传性非球形细胞溶血的鉴别诊断遗传性球形细胞增多症遗传性非球形细胞性溶贫（Ⅰ型）葡萄糖6磷酸脱氢酶缺陷症（Ⅱ型）丙酮酸激酶缺陷症孵育后溶血增强增强增强加葡萄糖后溶血明显纠正部分纠正不能纠正加ATP后溶血明显纠正部分纠正纠正（二）红细胞酶缺陷的检验定义：红细胞酶缺陷所致溶血性贫血又称红细胞酶病，指参与红细胞代谢的酶由于基因缺陷，导致活性改变而发生溶血的一组疾病内容：高铁血红蛋白还原试验氰化物-抗坏血酸试验变性珠蛋白小体生成试验葡萄糖-6-磷酸脱氢酶荧光斑点试验和活性测定丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定020304050601G6PD正常原理NADPH还原型辅酶Ⅱ烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADPH充足高铁血红蛋白亚铁血红蛋白1、高铁血红蛋白还原试验G6PD高铁Hb还原酶G6PG6-PANADPNADPH还原型美兰氧化型美兰高铁Hb（Fe3+）为褐色氧合HB（Fe2+）红色结果：光电比色法，正常还原率＞75%，低于75%为异常，提示G6PD活力↓，74～31%为G-6PD缺乏的杂合子（红棕色），30%以下为显著缺陷的纯合子（为棕色—目测比色法）。01.参考值02.高铁血红蛋白还原率＞75%03.高铁血红蛋白0.3~1.3g/L04.临床意义05.G6PD缺陷导致高铁血红蛋白还原率下降06.见于蚕豆病、伯氨喹型药物溶血性贫血1、高铁血红蛋白还原试验原理:6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202

氧合血红蛋白

6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高铁血红蛋白结果:正常人标本呈红色G-6PD2、氰化物-抗坏血酸试验临床意义:正常血液数小时后变成暗色纯合子G6PD缺乏者2h变色杂合子G6PD缺乏者3~4h变色3、变性珠蛋白小体生成试验又称“红细胞包涵体”、“赫恩小体”、“Heinz小体”、“海因小体”原理：G-6PD缺乏致红细胞内GSH减少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体，沉着于红细胞膜上。

抗凝血+乙酰苯肼37℃温育2～4h充分的氧化

其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）结果：该小体为圆形或多角形色涵体，φ0.2～2um。多位于红细胞边缘，一个红细胞含1～20个，多为1～2个，以含5个以上小体的红细胞计数正常人＜30%G6PD缺陷症、不稳定Hb、HbH病等常高于45%4、G6PD荧光斑点试验和活性测定原理:G6PD使NADP还原成NADPH,后者在紫外线照射下发出荧光

参考值：正常人强荧光；酶活性5U/gHb6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202

氧合血红蛋白

6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高铁血红蛋白G-6PDADP+PK磷酸丙酮酸丙酮酸NAPH乳酸NAD（无荧光）5、丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定原理:参考值正常PK活性荧光在20min内消失酶活性15.1±4.99U/gHb临床意义PK严重缺乏（纯合子）荧光60min不消失杂合子荧光25~60min消失(三)、珠蛋白合成异常的检测原卟啉血红素Hb（四聚体）铁血红蛋白的结构珠蛋白：由4条多肽链组成2条α链正常人HbA（22）97%HbA2（22）1.5-3%HbF（22）0.5-0.8%2条非α链血红蛋白病珠蛋白肽链量的不正常(地中海贫血)血红蛋白分子结构异常(异常血红蛋白病)遗传性溶血性疾病1.血红蛋白电泳蛋白质的两性性质—是由氨基酸的NH+与COO-

决定的。等电点—调节水溶液的pH，能使蛋白质的NH+与COO-数目相等呈电中性，此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。

电泳：一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。

原理：在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于Hb等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。由于各种Hb珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行Hb定量分析。电泳结果(+)HJKAGDE(-)

1.HbH增多是HbH病，为α-地中海贫血的一种；HbA2明显增高见于轻型β地中海贫血；HbF明显增高见于中重型β地中海贫血。

2.正常值：醋纤法（PH8.6）HbA96%~98%，HbA21.0%~3.1%，HbF＜2%CAA2FA异常正常胎儿蛋白HbF（22）酸洗脱试验：含HbF红细胞着色原理：HbF抗酸力强临床意义：脐带血、新生儿、婴儿阳性成人小于1%地中海贫血轻者少数红细胞阳性地中海贫血重症阳性细胞增多HbF定量测定（碱变性试验）:原理：碱性溶液中HbF不易变性沉淀，可测定滤液中Hb量临床意义：2岁-成人HbF<2%，>4%为异常重型地贫80-90%AL、AA、淋巴瘤等可轻度升高0102HbA2定量测定诊断轻型地贫的重要依据限制性内切酶谱分析基因诊断(四)、自身免疫性溶血性贫血检测自身免疫性溶血性贫血

（autoimmunehemolyticanemia,AIHA)定义：体内免疫异常，产生自身抗体、补体，结合在红细胞膜上使红细胞破坏加速分类：

可为原发性的，也可继发于结缔组织病、造血系统肿瘤、感染等病因：尚未完全阐明，可能因素：病毒感染可激活多克隆B细胞或化学物与红细胞膜相结合，改变其抗原性，导致自身抗体产生按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿1.Coombs试验（抗人球蛋白试验）

原理：不完全抗体(IgG)，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的Fc段相结合,导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。

目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全抗体，用于诊断AIHA。直接CoombsTest(+)说明病人RBC表面上包被有不完全抗体间接CoombsTest(+)则说明病人血清中存在着不完全抗体Coombs血清（抗人球蛋白血清）（1）直接试验１．正常人：阴性２．直接反应阳性，最常见于AIHA（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性Hb尿、新生儿同种免疫溶血病、SLE、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体方法：结果：（2）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳性。AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。冷凝集素病为IgM抗体。目的：测定血清中游离的不完全抗体方法：结果：间接阳性，见于AIHA，正常人为阴性。病人血清正常RBC抗IgG原理冷凝激素是可逆性抗体：低温时可与自身红细胞、O型红细胞、患者同型红细胞发生凝集，温度升高时，凝集块又复消失参考值效价低于1:40，反应最高温度4℃临床意义某些AIHA很高2.冷凝集素试验冷热双相溶血试验原理：阵发性寒冷性血红蛋白尿症（PCH）患者的血清中有双相溶血素，在0