《高脂膳食诱导食蟹猴代谢综合征模型制备规范》（编制说明）

《高脂膳食诱导食蟹猴代谢综合征模型制备规范》编制说明一、工作简况（一）任务来源代谢综合征（Metabolicsyndrome，MS）是患者以肥胖、高血压、糖代谢及血脂异常等为主要临床表现的症候群。随着我国近年来经济的高速发展及人民饮食习惯、生活方式的改变，我国MS的患病率近年来快速增长趋势，防治形势严峻。根据我国《健康中国行动（2019-2030）》中重点防治的心血管疾病、癌症、慢性呼吸系统疾病、糖尿病等四种重大慢性病，MS与之关系密切，开展MS疾病模型研究对开展慢病防治具有重要意义。非人灵长类动物与人类在遗传和生理上存在高度的相似性，能表现出类似的胰岛素抵抗、脂质代谢异常等特征，可以很好地模拟人类代谢性疾病的病理生理过程。本标准由国家重点研发计划项目《基于非人灵长类的人类疾病动物模型创建及关键技术研究》（2021YFF0702200）和广东省重点领域研发计划项目《灵长（2009A081000002）资助开展，通过给予高脂膳食方式诱导代谢综合征猴模型，优选代谢综合征相关的评价指标，同时结合模型应用的实践，建立代谢综合征动物模型制备技术规范。（二）协作单位标准牵头单位为广东省实验动物监测所，协作单位为广东省人民医院、深圳市人民医院、深圳市药品检验研究院（深圳市医疗器械检测中心）、广州华珍生物科技有限公司。（三）主要工作过程1.起草阶段并结合具体临床应用的实际需求为主要参考依据，提出制定团体标准《高脂膳食诱导食蟹猴代谢综合征模型制备规范》的计划。本标准由广东省精准医学应用学会组织，广东省实验动物监测所牵头制定，其它单位共同参与起草，于2023年11月提交团体标准《高脂膳食诱导食蟹猴代谢综合征模型制备规范》的立项申请同日在全国团体标准平台发布立项公示。立项公示后，起草工作组开展标准的编制工作并组织多次起草工作组的会议讨论。经过多轮研讨和修改，标准起草工作组于2024年9月完成了标准编写及标准内容的审核和格式重排，并启动发布征求意见公示工作。2.征求意见阶段2024年11月学会标委会秘书处将标准编制说明和征求意见稿通过全国团体标准平台发布公示，面向相关行业的单位和个人征求意见。截至到2024年12月，共收集到？条征求意见，经标准起草工作组讨论，采纳？条，不采纳？条。3.审查及报批阶段标准起草工作组将收集到的意见进行认真分析和处理，对征求意见稿进行最后修改，形成标准送审稿。由学会标委会秘书处组织技术审查。标准起草工作组根据审查意见修改整理后，最终形成标准草案报批稿，报广东省精准医学应用学会报批。（四）起草组成员及其工作主要起草人：陈洪毅、蔡磊、周丹、罗淞元、金毅、刘炜、黄忠强、李韵峰、关雅伦、杜卓君、臧德跃、刘尧、巢琳琳、杨涵、刘文亮、陈小曲、潘金春、李舸、张钰。主要起草成员皆参与了本标准的研究、讨论和不同章节的编二、标准编制原则和确定标准主要内容（一）标准编制原则标准制定遵守国家和地方相关法律、法规、方针、政策，在广东省精准医学学会章程规定的业务范围内，符合精准医学相关技术标准制定范围，是学会疾病动物模型分会发展规划内容。2.公正性原则标准制定遵循开放、透明、公平、公正的原则，本着动物模型制备需要满足相似性、重复性、可依性、适用性和可控性、易行性和经济性的原则，吸纳医疗机构、检测机构、实验动物研究机构代表参团体标准制定。3.先进性原则按照有利于科学合理利用资源，有利于提高经济效益、社会效益、生态效益的原则，做到技术上先进、经济上合理，有利于精准医学行业发展。4.正确性原则标准编写依据国家重点领域研发项目研究结果，编写过程中，对技术方法、评价参数等内容进行核验，保证其正确性。通过使用精准的描写词汇、紧凑严密的语句结构来准确表达目的，力求让不同知识水平不同专业背景的人充分理解标准所述内容。5.简明性原则标准编写时注意标准内容简洁明了，力求让标准内容通俗易懂，并通过使用大众化语言使使用者在参照本标准时能够正确理解和执行。6.本标准规定了高脂膳食诱导食蟹猴代谢综合征模型制备的制备方法、评价方法和结果判定。本标准适用于高脂膳食诱导食蟹猴代谢综合征模型的制备及应用评价。（二）标准主要内容本标准由范围、规范性引用文件、术语和定义、模型制备、模型评价和模型判定共6部分组成。主要技术内容如下。本标准规定了食蟹猴代谢综合征模型制备、模型评价方法和模型判定方法。本标准适用于食蟹猴代谢综合征模型制备及应用评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB14922实验动物微生物、寄生虫等级及监测GB14925实验动物环境及设施GB/T35892实验动物福利伦理审查指南SN/T1784猕猴属实验动物人工饲养繁殖技术及管理标准中国脂肪性肝病诊疗规范化的专家建议(2019年修订版)中国2型糖尿病防治指南（2020年版）中国心血管病一级预防指南（2020版）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1代谢综合征Metabolicsyndrome是指由多种代谢异常聚集而成的综合征，主要包括肥胖（尤其是中心性肥胖）、高血糖、高血压、血脂异常等。这些代谢异常相互关联，共同增加心血管疾病和糖尿病的风险。dysfunction-associatedsteatoticliverdisease(MASLD)是基于肝细胞内脂肪沉积以及与之相关的多系统代谢功能紊乱的疾病。3.3代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎Metabolicdmetabolicdysfunction-associatedsteatohepatitis(MASH)是一种与代谢功能障碍密切相关的肝脏疾病。主要表现为肝脏内脂肪的过度积累，并伴有显著的肝细胞损伤和炎症，这种损伤和炎症并非由过量饮酒引起，而是与代谢功能障碍密切相关。3.42型糖尿病Type2diabetes指因为遗传、环境因素引起胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗，导致血糖水平增高的一种慢性疾病。指代谢异常（如肥胖、糖尿病、血脂异常等）与心血管损害之间的因果关系，并导致动脉粥样硬化性心血管病的发生和发展。3.6身体质量指数Bodymassindex(BMI)反映身体的匀称程度，且与体脂的含量密切相关，是国际上常用的衡量身体胖瘦程度以及是否健康的一个标准。食蟹猴的BMI≥40kg/m2为肥胖。3.7肝活体组织检查Liverbiopsy肝活体组织检查，也叫肝穿刺检查，是一种直接采取病人的肝组织进行病理学和病原学检查的方法。Fraction(MRI-PDFF)一种无创、安全且客观准确的检测方法，可以用来测定肝脏脂肪含量。3.9心脏超声检测Cardiacultrasounddetection也称为超声心动图，是一种无创的医学检查方法，通过超声波技术来检查和评估一个人的心脏结构、功能和血流动力学。4模型制备4.1实验猴筛选高脂膳食诱导代谢综合征模型制备的食蟹猴，一般选择10岁以上，雄性，BMI>30kg/m2，精神状态良好，被毛光亮，发育炎性肝胆或肠道疾病等病史；微生物、寄生虫等级满足GB149224.2实验猴饲养环境饲养环境满足GB14925的要求；每笼饲养1只动物，充分保障环境丰富度；房间和笼具每天冲洗一次，每周彻底刷洗一次，消毒一次等。4.3高脂膳食成分高脂膳食饲料须保证基础营养，粗蛋白（干物质）含量不低于15%，尽量保证多源化的脂肪添加，粗脂肪含量不低于20%，胆固醇含量不低于1%。每天按照食蟹猴体重3%-5%（干重）的食物量进行定时投喂。4.4高脂膳食饲喂方法每日投喂分3次，早餐100g普通饲料，午餐150g水果，晚5模型评价方法5.1检测指标食蟹猴饲喂高脂膳食0月、6月、12月、18月进行BMI、体脂、心脏B超等指标检测。5.2检测方法5.2.1BMI检测定期测定实验猴体重和冠臀长度计算BMI。食蟹猴的BMI（kg/m2）=体重/冠臀长度2。5.2.2血常规检测定期采集外周血，进行血常规和血液生化指标检测。血脂指高密度脂蛋白（HDL-C）；肝功能指标包括丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)等；血糖指标包括葡萄糖（GLU）和糖化血红蛋白（HbA1c）等。必要时开展炎症指标检测包括C-反应蛋白素8（IL-8）、脂联素（ADPN）、瘦素（LEPTIN）和CXC趋化因子配体10（CXCL10）等。5.2.3肝活体组织检查通过肝穿活体诊断技术进行肝组织病理诊断，包括肝细胞脂肪变(≥5%）、炎细胞灶以及纤维化程度，对每只猴作出组织病理评分。5.2.4肝脂肪定量检测通过磁共振成像质子密度脂肪分数(MRI-PDFF)进行肝脏脂肪定量检测。通过MRI扫描获取肝脏高质量图像，扫描结构定位和多回波脂肪成像等，使用成像数据分析软件，进行肝脏脂肪含量检测。5.2.5心脏超声检测通过心脏超声仪检测心脏四个腔室的大小、容积及室壁厚度，二尖瓣、主动脉瓣及肺动脉瓣的流速，利用超声心动图计算左室射血分数(LVEF,%)、左室心输出量(SV,ml)、左心室每博输出量(CO,ml)、左心室收缩末期内径(LVESD,cm)、左心室收缩末容积(LVESV,cm)、左心室舒张末期内径(LVEDD,cm)、左心室舒张末容积(LVEDV,ml)、室间隔舒张末径(IVS,cm)、左心室后壁舒张末径(LVPW,cm)、左心房前后经（LAD，cm）、左心房容积（LAV，ml）、二尖瓣舒张早期血流速度（E，m/s）、二尖瓣舒张晚期血流速度（A，m/s）、二尖瓣环舒张早期心肌运动速度LVM=[（LVEDD+IVS+LVPW）3-(LVEDD)3]×0.8×1.04+0.6。6模型判定6.1食蟹猴代谢综合征模型需至少符合以下4项指标中的3项：1)肥胖：BMI≥40kg/m2。2)高血糖：空腹血糖值≥5.5mmol/L。3)高血压：收缩压≥140或舒张压≥90。4)血脂紊乱：空腹TG≥1.7mmol/L，TCHO≥6.2mmol/L，LDL-C≥4.1mmol/L。6.2代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎需符合以下要求：2)肝活体组织检查：肝脏穿刺活检病理学诊断，随着高脂膳食干预时间增加，5%以上肝脏细胞中可见明显脂滴空泡、出现炎细胞浸润灶，以及肝纤维化病变。根据表1进行病变评分，肝细胞脂肪变，肝小叶内出现炎症灶可判定为代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎。3)肝脂肪含量：MRI-PDFF定量评价代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎脂肪含量>5%。和CXC趋化因子配体10（CXCL10）显著升高。表1肝组织病理学诊断评分表数坏死灶）6.3代谢综合征相关的糖尿病需符合以下要求：1)符合6.1的要求，且动物出现多饮、多尿、多食、体重减少现象。2)空腹血糖≥7.0mmol/L。3)糖化血红蛋白≥6.0%。6.4代谢综合征相关的心血管病风险需符合以下要求：2)B超检查心脏结构和功能发生改变，常见心肌肥厚特征。3)冠脉造影评估管腔狭窄程度。三、主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果本标准的编写由国家重点研发计划项目《基于非人灵长类的人类疾病动物模型创建及关键技术研究》（2021YFF0702200）和广东省重点领域研发计划项目《灵长类动物模型基因组评价以及在药物研发中的应用》（2009A081000002）资助开展。在国家和省重大课题的支持下，标准编制小组基于广东省华珍动物养殖场和来宾市新桂生物科技有限公司食蟹猴繁殖群体，建立86只10-20岁雄性食蟹猴临床指标和心脏B超基础生物学数据。利用35只食蟹猴通过高脂膳食干预构建代谢综合征模型，先后获取了造模前、造模6个月、12个月和18个月临床指标、心脏B超和肝活体组织等相关数据。1.BMI值。我们对2家实验猴饲养繁殖场10-20岁86只实验雄性猴进行检测，一般BMI值＜40，高脂膳食干预后6个月BMI值出现显著上升，普遍BMI值＞40。已发表文献显示，实验猴因此，本标准制定BMI≥40为肥胖猴，基本符合实际情况。表1-1实验猴BMI基础值（n=86）注：#为95%置信区间上下限。表1-2食蟹猴高脂膳食干预BMI值~~~~~~~~图1食蟹猴高脂膳食干预BMI变化2.血压值。我们对2家实验猴饲养繁殖场10-20岁86只实验雄性猴进行检测，收缩压和舒张压基础值见附表2-1，高脂膳食干54.3[2];247只猴子中8-20岁食蟹猴（雌雄均有）SBP、DBP均值 为107.67、54.73[3]。因此，本标准血压异常范围：收缩压≥140 或舒张压≥90，基本符合实际情况。表2-1实验猴血压基础值（n=86）表2-2食蟹猴高脂膳食干预血压值（n=35）~~~~~~~~~~~~~~~~图2食蟹猴高脂膳食干预血压变化3.血脂4项值。我们对2家实验猴饲养繁殖场10-20岁86只实验雄性猴进行检测，血脂4项指标见表3-1。高脂膳食干预食蟹猴血脂4项指标变化见表3-2。干预6个月，血脂4项指标明显TCHO升高4.5倍，HDL-C升高2.3倍，LDL-C升高6.0倍。均值为0.63，215只13-15岁雄性食蟹猴TG均值为0.81，66只15岁以上雄性食蟹猴TG均值为0.94[4]；11只16-20岁雄性食蟹猴TG均值为0.34；5只11-13岁和5只17TCHO：198只10-12岁雄性食蟹猴TCHO均值为2.61，215只13-15岁雄性食蟹猴TCHO均值为2.72，66只15岁以上雄性食蟹猴TCHO均值为2.71[4]；128只4岁以上雄性食蟹猴TCHO均值为2.53[6]；5只11-13岁和一般小于4.5[1]。不同文献测定的正常猴TCHO均值都＜4.5。食蟹猴HDL-C均值为1.43[4]；11只16-20岁雄性食蟹猴HDL-C均值为1.47；5只11-13岁和5只17-18岁雄性食蟹猴HDL-C值一般小于2[1]。6只16-20岁雄性食蟹猴高脂膳食干预8个月后HDL-C均值为1.62[5]，比正常范围高，不同文献测定的正常猴HDL-C均值都＜2。食蟹猴LDL-C均值为1.11[4]；11只16-20岁雄性食蟹猴LDL-C均值为0.82；5只11-13岁和5只17-18岁雄性食蟹猴LDL-C值一般小于2.4[1]。6只16-20岁雄性食蟹猴高脂膳食干预8个月后LDL-C均值为3.16[5]，比正常范围高，不同文献测定的正常猴LDL-C均值都＜2.4。因此，本标准血脂紊乱范围：空腹TG≥1.7mmol/L，TCHO≥6.2mmol/L，LDL-C≥4.1mmol/L，基本符合实际情况。表3-1食蟹猴血脂基础值（n=86，雄性）表3-2食蟹猴高脂膳食干预血脂4项值（n=35，雄性）图3食蟹猴高脂膳食干预血脂4项值4.血糖值。我们对2家实验猴饲养繁殖场10-20岁86只实验雄性猴进行检测，GLU基础值见表4-1，高脂膳食干预GLU值变化见表4-2。干预6个月，血糖值明显升高，以平均值比较，GLU值增加1.57倍。已发表文献显示，11只16-20岁雄性食蟹猴血糖均值为3.85；17只9-11岁雄性食蟹猴血糖均值为4.02，24 岁雄性食蟹猴血糖均值为4.23，215只13-15岁雄性食蟹猴血糖均值为3.85，66只15岁以上雄性食蟹猴血糖均值为4.38[4]。6 只16-20岁雄性食蟹猴高脂膳食干预8个月后GLU均值为6.22[5]，比正常范围高，因此，本标准血糖异常范围：空腹高血糖值≥5.5mmol/L，糖尿病血糖值≥7.0mmol/L，基本符合实际情况。表4-1食蟹猴GLU基础值（n=86）表4-2食蟹猴高脂膳食干预GLU值（n=35）/mmol·L-1图4食蟹猴高脂膳食干预GLU变化5.糖化血红蛋白值。我们对实验猴饲养繁殖场1152只实验猴进行检测，71.4%的实验猴HbA1c值＜6.0%，高脂膳食干预后18个月35只猴中5只猴的HbA1c值＞6.0%。已发表文献显示，5只13-15岁食蟹猴（雌雄均有）HbA1c均值为4.60,糖尿病后9只糖尿病猴HbA1c最低值为9.4，有7只大于13[9]）。因此，本标准具有糖尿病风险的糖化血红蛋白范围≥6.5%，基本符合实际情况。表5食蟹猴高脂膳食干预HbA1c值HbA1cx±s/%IVSd/mmx±s6.心肌肥厚相关B超值。我们对2家实验猴饲养繁殖场10-20岁86只实验雄性猴进行检测，与心肌肥厚相关的B超数值见表6-1。高脂膳食干预后引起心肌肥厚相关的B超数值见表6-2。干预18个月，以平均值比较，IVSd增厚，增加1.11倍，倍，EF未见明显变化，E/A有下降趋势。已发表文献显示，IVSd：247只8-20岁食蟹猴（雌雄均有）IVSd均值为4.70[3];108只2岁以上雄性食蟹猴IVSd均值为4.00[[10]。LVPWd：247只8-20岁食蟹猴（雌雄均有）LVPWd均值为4.50[3];108只猴子中2岁以上雄性食蟹猴LVPWd均值为3.90[10]。LAD：16只6-12岁雄性食蟹猴LAD均值为0.72[2]；247只8-20岁食蟹猴（雌雄均有）LAD均值为1.41[3];108只2岁以上雄性食蟹猴LAD均值为0.99[10]。EF：247只8-20岁食蟹猴（雌雄均有）EF均值为73.58[3]。E/A：247只猴子中8-20岁食蟹猴（雌雄均有）E/A均值为1.26[3]。未查到LAV相关数值。表6-1食蟹猴心肌肥厚B超检测相关基础值（n=86）表6-2食蟹猴高脂膳食干预心肌肥厚B超相关指标（n=35）/%1.18±0.39图6食蟹猴高脂膳食干预心肌肥厚B超相关指标变化7.肝活检病理评分。食蟹猴高脂膳食干预肝活检组织病理主要表现为肝脏细胞脂滴空泡、炎细胞浸润灶，以及肝纤维化病变。饲喂前肝细胞病变极少数出现肝脏炎细胞浸润灶，但基本不会同时出现5%肝脏细胞脂滴空泡现象。高脂膳食干预后6个月，5%肝脏细胞脂滴空泡逐渐增多，干预后18个月，在脂肪变性基础上，明显出现炎细胞浸润灶及纤维化变（表7、8，图7）。表7食蟹猴高脂膳食干预肝活检病理评分~~~~图7食蟹猴高脂膳食干预肝活检病理评分表8食蟹猴高脂膳食干预肝活检病理评分（总分）0447009图8食蟹猴高脂膳食干预肝活检病理评分（总分）四、标准涉及的相关知识产权说明1.没有违反相关法律法规及强制性标准，目前暂无相关的国家标准、行业标准。2.参考的实验动物的饲养管理相关标准，与制定的团体标准不冲突。GB14922实验动物微生物、寄生虫等级及监测GB14925实验动物环境及设施GB/T35892实验动物福利伦理审查指南SN/T1784猕猴属实验动物人工饲养繁殖技术及管理标准中国脂肪性肝病诊疗规范化的专家建议(2019年修订版)中国2型糖尿病防治指南（2020年版）中国心血管病一级预防指南（2020版）五、采用国际标准的程度与水平的简要说明食蟹猴高脂膳食干预的代谢综合征可表现为肥胖、高血压、糖代谢及血脂异常等症状。模型制备主要沿用国外文献报道的评价方法，且国内外尚未针对相关制备和评价方法建立统一的标准。本标准国家重点研发计划项目《基于非人灵长类的人类疾病动物模型创建及关键技术研究》（2021YFF0702200）研究，结合临床诊断指南指导编制完成。通过国家标准文献共享服务平台美国食品药品监督管理局（FDA）、美国环保局(EPA)、美国材料测试协会（ASTM）、世界经济合作组织（OECD）等机构，目前国际、国家、行业、地方和团体标准中均无类似标准。六、重大意见分歧的处理经过和依据七、其他应予说明的事项[1]WuD,YueF,ZouC,etal.Analysisofglucosemetabolismincynomolgusmonkeysduringaging.Biogerontology.2012,13(2):147-55.[2]WeingandKW,ClarksonTB,AdamsMR,etal.Effectsofageand/orpubertyoncoronaryarteryatherosclerosisincynomolgusmonkeys.Atherosclerosis.1986,62(2):137-44.[3]NakayamaS,KoieH,PaiC,etal.Echocardiographicevaluationofcardiacfunctionincynomolgusmonkeysoverawideagerange.ExpAnim.2020,69(3):336-344.[4]LingX,LuoT,HuangQ,etal.EstablishmentofHematologicalandSerumBiochemicalParametersin4,834HealthyCynomolgusMonkeys(Mac