细胞培养优点与基本要求汇集

第第页细胞培养优点与基本要求聚集细胞常规培养是在细胞房中进行，在超净工作台或生物安全柜中，把细胞处理好，依据需要加入细胞培养基，放入细胞培养瓶/皿或细胞培养板中，再放到带有5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。细胞培养的优点：1.研究的对象是活细胞在试验过程中，依据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包含活细胞的形态、结构、生命活动等。2.研究条件可以人为掌控pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以依据实际需要进行人为的掌控，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行试验察看，这些因素同样可以处于严格掌控之下。3.研究的样本可以实现比较均一性通过细胞培养肯定代数后，所得到的细胞系则可以实现均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞实现纯化。4.研究内容便于察看、检测和记录采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。5.研究的范围比较广泛应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。6.研究的费用相对较经济可供应大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相像的试验对象。细胞培养基的基本要求：体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。一、营养成分维持细胞生长的营养条件一般包含以下几个方面：1、氨基酸：是细胞合成蛋白质的原材料。全部细胞都需要12种必需氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸。另外还需要谷氨酰胺，它在细胞代谢过程中有紧要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的来源，同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物质。体外培养的各种培养基内都含有必需氨基酸。2、单糖：培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解，六碳糖是重要能源。另外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原材料。细胞对葡萄糖的汲取本领最高，半乳糖低。体外培养动物细胞时，将近全部的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。3、维生素：重要扮演辅酶、辅基的角色。生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12都是培养基常有的成分。4、无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。二、促生长因子及激素已证明：各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分紧要的作用。有些激素对很多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。三、渗透压细胞必需生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有肯定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg,可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260—320mOsm/kg的范围都适合。四、pH气体也是细胞生存的必需条件之一，所需气体丰要是氧和二氧化碳。氧参加三羧酸循环，产生能量供应细胞生长、增殖和合成各种成分。一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可取得能量，但多数细胞缺氧不能生存。在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它重要与维持培养基的pH有直接关系。动物细胞大多数需要细小的碱性条件，pH值约在7．2～7．4℃在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不绝被释放，培养液变酸，PH值发生变动。由于NaHCO3容易分解为二氧化碳，很不稳定，致使缓冲系统难以精准明确地掌控。故这一缓冲系统适合密闭培养。HEPES结合碳酸氢钠使用，可供应更有效的缓冲体系，重要是防止pH值快速更改，但最大缺点是在开放培养或察看时难以维持正常的pH值。造成pH波动重要是代谢产生的CO2，在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，培养基pH很快下降。为解决这一问题，合成培养基中使用了NaHCO3—CO2缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调整温箱中CO2浓度（5％），与培养基中的NaHCO3处于平衡状态。五、无毒、无污染体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有防范本领，因此培养基应实现无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤