T-SDAA 0079-2024 混合型饲料添加剂 葡萄糖氧化酶

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由山东省畜牧协会标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：山东省饲料兽药质量检验中心、山东隆科特酶制剂有限公司、青岛蔚蓝生物股份有限公司、济南百斯杰生物工程有限公司、临沂大学、鲁东大学、山东新希望六和集团有限公司、临沂布恩生物科技有限公司、山东和美集团有限公司、济南百鸣生物制药有限公司、山东久隆恒信药业有限公司、安池（山东）动物营养研究院有限公司、山东省蛋鸡技术创新中心。本文件主要起草人：汤文利、张建龙、钱娟娟、赵旭、冯涛、李有志、张法玲、邵静、刘延杰、孙春华、于娟、陈学华、韩克学、殷习栋、刘晓辉。本文件是首次发布。混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶本文件规定了混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶的术语和定义、产品分类、技术要求、取样、试验方法、检验规则、标签、包装、运输、贮存和保质期。本文件适用于饲料添加剂葡萄糖氧化酶与载体、稳定剂或稀释剂混合制成的固态或液态混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶产品。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5749生活饮用水卫生标准GB/T5917.1饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法GB/T6435饲料中水分的测定GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T6684-2002化学试剂30%过氧化氢GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB10648饲料标签GB13078饲料卫生标准GB/T13079饲料中总砷的测定GB/T13080饲料中铅的测定原子吸收光谱法GB/T13081饲料中汞的测定GB/T13082饲料中镉的测定GB/T13091饲料中沙门氏菌的测定GB/T14699饲料采样GB/T18869饲料中大肠菌群的测定GB/T30956饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法NY/T2071饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法JJF1070定量包装商品净含量计量检验规则饲料原料目录（中华人民共和国农业农村部公告第1773号）饲料添加剂品种目录（中华人民共和国农业农村部公告第2045号）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1葡萄糖氧化酶glucoseoxidase2一种催化葡萄糖与氧反应生成葡萄糖酸和过氧化氢的氧化还原酶。3.2葡萄糖氧化酶产品的酶活力glucoseoxidasepreparationsactivity1g固体葡萄糖氧化酶产品（或1mL液体葡萄糖氧化酶产品）含有的酶活力单位，以U/g或U/mL表示。3.3葡萄糖氧化酶活力单位glucoseoxidaseactivityunit在37℃、pH5.5的条件下，每分钟从浓度为1mol/Lβ-D-葡萄糖溶液中释放1µmol过氧化氢所需要的酶量，为1个葡萄糖氧化酶活力单位，以U表示。4产品分类4.1混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶4.2液态混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶5技术要求5.1载体、稳定剂或稀释剂应为《饲料原料目录》或《饲料添加剂品种目录》规定品种，固体剂型可使用无水葡萄糖、玉米淀粉、玉米芯粉、沸石粉、硫酸钠等，液体剂型可使用去除微生物的饮用水、丙二醇、丙三醇、氯化钠等，应符合GB13078要求，饮用水应符合GB5749要求。5.2感官指标5.2.1固体剂型色泽均一，无潮解、无霉变、无结块，有固有的发酵气味，无异味。5.2.2液体剂型色泽均一，允许有少量的凝聚物、絮状物或沉淀，有固有的发酵气味，无异味。5.3理化指标理化指标应符合表1的规定。表1理化要求]水分—3粒度（通过0.425mm孔径试验筛）/%—5.4卫生指标卫生指标应符合表2的规定。表2卫生要求6取样按GB/T14699规定执行。7试验方法7.1感官检验7.1.1固体剂型取适量试样置于洁净的白色盘中，在自然光下观察。7.1.2液体剂型摇匀，取适量试样置于干净器皿中，静置10min,在自然光下观察。7.2酶活力按附录A规定执行。7.3水分4按GB/T6435规定执行。7.4粒度按GB/T5917.1规定执行。7.5pH量取25mL～50mL液体剂型试样置于100mL烧杯中，按照pH试纸或pH计说明书进行测定。7.6总砷按GB/T13079规定执行。7.7铅按GB/T13080规定执行。7.8汞按GB/T13081规定执行。7.9镉按GB/T13082规定执行。7.10黄曲霉毒素B1按NY/T2071规定执行。7.11玉米赤霉烯酮按NY/T2071规定执行。7.12脱氧雪腐镰刀菌烯醇按GB/T30956规定执行。7.13沙门氏菌按GB/T13091规定执行。7.14大肠菌群按GB/T18869规定执行。7.15净含量按JJF1070规定执行。8检验规则8.1组批以相同原料、相同的生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批混合型饲料添加剂葡萄糖氧化酶。58.2出厂检验固体剂型产品出厂检验项目为感官、葡萄糖氧化酶酶活力、水分、粒度；液体剂型产品出厂检验项目为感官、葡萄糖氧化酶酶活力、pH。8.3型式检验型式检验的项目为本文件第5章规定的所有项目，在正常生产情况下，每年至少进行一次型式检验。在有下列情况之一时，亦应进行型式检验：a)产品定型投产时；b)更改关键配方、工艺或生产设备时；c)原辅材料有较大变化，可能影响产品质量时；d)停产3个月以上，重新恢复生产时；e)出厂检验结果与上次型式检验结果有较大差异时；f)饲料行政管理部门提出检验要求时。8.4判定规则8.4.1检验项目全部符合本文件规定时，判定该批次产品合格。8.4.2检验结果中有任何指标不符合本文件规定时，可从同批次产品中重新加倍取样进行复检。若复检结果有一项指标不符合本文件规定，则判定该批次产品不合格。微生物指标不得复检。8.4.3各项目指标的极限数值判定按GB/T8170中全数值比较法执行。9标签、包装、运输、贮存和保质期9.1标签按GB10648规定执行。9.2包装包装材料应无毒、无害、防潮。包装容器应符合国家标准和行业标准及相关规定。9.3运输运输过程中应有遮盖物，避免日晒雨淋，不得与有毒、有害、有腐蚀性物质混放、混运，运输工具应清洁、无毒、无污染。9.4贮存产品应贮存于清洁、阴凉、干燥、通风的环境中，避免受热、受潮，不得与有毒、有害、有腐蚀性物质混放。9.5保质期在规定的运输和贮存条件下，原包装自生产之日起固体剂型保质期为12个月，液体剂型保质期为6个月。6葡萄糖氧化酶酶酶活力测定邻联茴香胺法A.1原理在规定的温度和pH条件下，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖和氧反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢。反应生成的过氧化氢在辣根过氧化物酶的作用下与邻联茴香胺反应，生成氧化型邻联茴香胺。氧化型邻联茴香胺在540nm波长处的吸光度值与反应过程生成的过氧化氢量成正比，而过氧化氢的生成量又与反应液中葡萄糖氧化酶的活力成正比。用分光光度法测定，计算葡萄糖氧化酶活力。本方法定量限：固体剂型50U/g，液体剂型50U/mL。A.2试剂或材料除特殊说明外，所用的试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的三级水。A.2.130%过氧化氢溶液：优级纯。含量按照GB/T6684-2002中5.1规定进行标定。临用现配。A.2.2磷酸缓冲溶液（0.1mol/L，pH5.5分别称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）3.50g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）26g于1000mL烧杯中，加入900mL水溶解，调节pH至5.50±0.02再转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。A.2.3邻联茴香胺储备溶液（10mg/mL避光操作。准确称取邻联茴香胺100mg（CAS号：119-90-4，含量≥98%精确至0.1mg，置10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。4℃避光密封保存，有效期1个月。注：国际癌症研究中心(IARC)认定邻联茴香胺为可疑致癌A.2.4邻联茴香胺工作溶液：移取邻联茴香胺标准储备液（A.2.3）0.1mL，加入磷酸缓冲液（A.2.1）12mL，临用现配。A.2.5葡萄糖底物溶液（1.0mol/L称取经103℃±2℃干燥至恒重的D（+）-无水葡萄糖（CAS号：50-99-7，含量≥99.5%）约18g，精确至1mg，置100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，摇匀。4℃保存，有效期5天,如变色，不能使用。A.2.6辣根过氧化物酶溶液（100U/mL称取适量辣根过氧化物酶（250U/mg,CAS号：9003-99-0相当于辣根过氧化物酶2500U，置25mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。4℃保存，有效期为7天。-18℃冷冻保存，有效期42天。使用前4℃条件下解冻，不可反复冻融。A.2.7硫酸溶液（稀释V1→V2移取10mL浓硫酸（纯度≥98%缓慢注入80mL水中，充分搅拌，冷却，转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。A.2.8过氧化氢标准溶液（1mg/mL准确称取30%过氧化氢（A.2.1）适量（约相当于过氧化氢0.1g精确至0.1mg，置100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。临用现配。7A.2.9过氧化氢系列标准工作液：分别精密量取0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL和0.9mL过氧化氢标准溶液（A.2.8）于10mL容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，摇匀，配制成过氧化氢系列标准溶液，浓度分别为：50µg/mL、60µg/mL、70µg/mL、80µg/mL和90µg/mL。A.3仪器设备A.3.1天平：感量0.0001g。A.3.2可见光分光光度计：波长400nm~800nm。A.3.3pH计：精确至0.01pH。A.3.4漩涡混合仪。A.3.5恒温水浴锅：精度±0.1℃。A.3.6移液器：5mL、2.5mL、1mL和200µL。A.3.7玻璃试管：φ18mm×150mm。A.3.8离心机：转速≥4000r/min。A.3.9磁力搅拌器。A.3.10计时器：精度≤5s/h。A.4样品A.4.1固体剂型按照GB/T14699的规定进行采样，选取有代表性的样品，用四分法缩分至250g，装入密封容器中，备用。A.4.2液体剂型按照GB/T14699的规定进行采样，选取有代表性的样品，混匀后，取250mL，装入密封容器中，备用。A.5试验步骤A.5.1空白溶液的制备取1支玻璃试管，加入邻联茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根过氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混匀，置于37℃恒温水浴锅（A.3.5）中平衡5min；加入三级水0.1mL，37℃准确反应3min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，摇匀，制成空白溶液。A.5.2标准曲线的绘制取5支玻璃试管，加入邻联茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根过氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混匀，置于37℃恒温水浴锅（A.3.5）中平8衡5min；分别加入过氧化氢系列标准工作液（A.2.9）0.1mL，37℃准确反应3min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，摇匀。以空白溶液（A.5.1）为参比，用1cm比色皿，在540nm波长处测定各溶液的吸光度，以过氧化氢浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，R2≥0.998。A.5.3试样溶液的制备A.5.3.1固体剂型试样溶液的制备平行做两份试验。方法一：准确称取1g试样，精确至0.1mg,置100mL烧杯中，加入磷酸缓冲溶液（A.2.2）50mL，在磁力搅拌器(A.3.9)上搅拌30min，转移至100mL容量瓶中，用磷酸缓冲溶液（A.2.2）定容至刻度（V定容），摇匀。静置5min,移取适量上清液按照附录B表B.1中建议的稀释倍数进行稀释。方法二：准确称取1g试样，精确至0.1mg,置碾钵中充分碾磨，加入磷酸缓冲溶液（A.2.2）溶解，转移至100mL容量瓶中，用磷酸缓冲溶液（A.2.2）定容至刻度（V定容摇匀。静置5min,移取适量上清液按照附录B表B.1中建议的稀释倍数进行稀释。A.5.3.2液体剂型试样溶液的制备平行做两份试验。精密量取1.00mL试样，置100mL容量瓶中，用磷酸缓冲溶液（A.2.2）定容至刻度（V定容），摇匀。静置5min,移取适量上清液按照附录B表B.1中建议的稀释倍数进行稀释。A.5.4试样溶液的测定A.5.4.1试样空白溶液的测定取1支玻璃试管，加入邻联茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根过氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混匀，置于37℃恒温水浴锅（A.3.5）中平衡5min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，混匀，加入待测试样溶液（A.5.3）0.1mL，混匀，37℃准确反应3min。以空白溶液（A.5.1）为参比，用1cm比色皿，在540nm波长处测定试样空白溶液的吸光度（A0）。A.5.4.2试样溶液的测定取1支玻璃试管，加入邻联茴香胺工作溶液（A.2.4）2.5mL、葡萄糖底物溶液（A.2.5）0.3mL、辣根过氧化物酶溶液（A.2.6）0.1mL，混匀，置于37℃恒温水浴锅（A.3.5）中平衡5min；加入待测试样溶液（A.5.3）0.1mL，混匀，37℃准确反应3min；加入硫酸溶液（A.2.7）2.0mL，混匀。以空白溶液（A.5.1）为参比，用1cm比色皿，在540nm波长处测定试样溶液的吸光度（A试样）。通过标准曲线计算出（A试样-A0）对应的试样溶液中过氧化氢浓