检验科血清载脂蛋白A测定标准操作规程

玉环县人民医院检验科文件编号：JYK-3-SH-029版本/修订号：C/0主题内容生化室作业指导书生效日期：20110701第6页共6页编写制定日期审核审核日期：核准执行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林华2011-07-01血清载脂蛋白A1测定标准操作规程1检验申请单独检验项目申请：血清载脂蛋白A1(缩写apoA1)测定；组合项目申请：血脂测定，血载脂蛋白测定。临床医生根据需要提出检验申请。2标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定1天，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。-20℃可保存数月；-70℃至少可保存半年；应避免标本反复冻溶。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛和空腹状态。抽血前3天内避免高脂饮食，24小时内不饮酒。2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。EDTANa2(1mg／mL)抗凝。2.1.5抽血前最好停用影响血脂的药物（如调脂药、避孕药、某些降压药、激素等）数天或数周，否则应记录用药情况。3方法原理透射免疫浊度法。APOA-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm测定该不溶性复合物的浊度。通过测定标准品，建立一个吸光度对APOA-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APOA-1浓度。4试剂及其他用品4.1试剂：血清载脂蛋白A（APOA1）免疫比浊法测定试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。4.2试剂盒保存：未启封试剂盒在2～8℃保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定14天。开盖后避免污染。当试剂变混浊，或空白吸光率>0.1时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.3试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4试剂盒主要成分：组成混合后的浓度R1:聚乙二醇<4%氯化钠106mmol/LTris/HCL缓冲液15mmol/LR2:抗人APOA-1抗体表面活性剂5校准品与校准模式5.1校准品：与试剂盒配套的北京利德曼生化技术有限公司校准液。5.2校准类型和校准点数目：非线性模式，5个校准点。5.3校准周期：校准间隔时间不限。但在：①更换试剂或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准。5.4校准液重建方法：上海申峰生物试剂有限公司校准液为干粉，加入1.0ml生理盐水复溶，室温放置30分钟，混匀后倍比稀释成5个浓度（其中最后一管为生理盐水空白管）即可使用。6质控品与室内质控规则6.1质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。6.5如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。7适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器全自动生化分析仪器。8标本检测步骤装载试剂→进行校准→进行质控→输入标本检测项目→加载标本→标本测定→结果复核→报告。主要分析参数参见说明书。10结果计算仪器根据非线性校准曲线自动给出每个标本测定结果。11检验结果的报告及范围11.1结果的报告11.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围：0.00～2.40g/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12操作性能12.1精密度：批内CV<5.0％，批间CV<6.0％；12.2灵敏度：载脂蛋白A1浓度为：1.1g/L时，浊度吸光度A340nm约1.151~1.256。12.3线性范围：0.00～2.40g/L。12.4方法的有限性及干扰因素：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。13参考范围及医学决定水平参考范围：1.01-1.98g/L14临床意义14.1APOA1是高密度脂蛋白HDL的主要结构蛋白，约占HDL蛋白质的65%～70%，而其他脂蛋白中APOA1极少，故APOA1是HDL的特征性载脂蛋白，血清APOA1水平反映HDL的水平，与HDL-C呈明显的正相关。但HDL是一系列颗粒与组成不均一的脂蛋白，当HDL亚类与组成有变化时，APOA1不一定相应变化，所以同时测定APOA1和HDL-C有助于对病理生理状态的分析。14.2冠心病患者APOA1偏低，脑血管患者APOA1也明显低下。家族性高TG血症患者HDL-C往往偏低，但APOA1不一定低，不增加冠心病危险；但家族性混合型高脂血症患者APOA1与HDL-C都会轻度下降，冠心病危险性高。APOA1缺乏（如Tangier病，是罕见的遗传性疾病）、家族性低α脂蛋白血症、鱼眼病等血清中APOA1与HDL-C极低。15结果审核以及分析与相关项目的联系15.1由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3相关项目：审核与血脂其他指标和与载脂蛋白等的关系，apoA1一般与HDL-C浓度呈正相关，与APOB常成负相关。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16威胁生命的“紧急值”及报告规定通常无威胁生命的“紧急值”。17有关引用程序与文件17.1Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生化检验室内质控标准操作程序。17.3检验结果