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实验六、微生物的分离与纯化

自然界中各种微生物混合生活在一起，即使取得很少量的样品也是许多微生物共存的群体。人们要研究某种微生物的特征，首先须使该微生物处于纯培养状态。微生物的平板分离技术为人类获得丰富的微生物资源以及在工、农、医、环境、动植物细胞培养等方面做出了巨大贡献。一、实验目的：1、掌握倒平板的方法2、掌握常用微生物分离纯化技术3、学习平板菌落计数的基本方法

二、实验原理采用适宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法分离细菌用牛肉膏培养基，分离放线菌用高氏培养基，分离真菌用马丁氏-孟加拉红培养基。依据一个单细胞在固体培养基上培养后可以长成一菌落，从而推算样品中含有多少细菌、放线菌以及真菌的活菌数目土壤是微生物生存的大本营，种类和数量及其丰富三、实验步骤：从土壤中稀释分离微生物的方法如下：（一）土壤悬液的制备准备1瓶土壤悬液：称0.5克土壤放入4.5ml无菌水中，手摇振荡(5-10min)，使土样分散。（二）倒固体琼脂培养基平板：取一瓶牛肉膏蛋白胨培养基熔化后，待冷至55-60℃时，倒平板。(三-1)稀释平板分离法1、悬液稀释：（本实验取0.5g放入4.5ml无菌水中稀释）2、悬液涂布(演示):无菌操作(从稀至浓将菌液涂布均匀)采用10－6，10－7，10－8稀释液各0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板平板涂布(三-2)划线分离法——平皿划线（演示）每人用1个牛肉膏蛋白胨平板做划线分离，从上次实验室环境生长的单菌种挑取划线分离平皿划线分离法结果分析:1.计数：（牛肉膏平板取单菌落数目在30～300个左右的稀释度来计数)我所计数的平板稀释度是：

单菌落数目：

、

。2.计算：活菌数目/每克土壤＝

（计算过程）＝

菌落形成单位(CFU)/每克土壤[每克土壤中菌落形成单位数＝同一稀释度2次重复的平均菌落数×稀释倍数×10]3.对你和同伴的细菌计数结果进行分析思考题1.你所做的涂布平板和划线平板是否较好的得到了单菌落，如果不是，请分析原因；2.怎样判断稀释涂布平板记数数据是否可靠？需要掌握哪几个关键？3.平板菌落记数法中，为什么熔化后的培养基要冷却至

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