TSATA 068-2024 动物源性食品中氯霉素和甲硝唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法

ICS75.160.20CCSE30Determinationofchloramphenicolandmetronidazoleresiduesinporkandbeefbyliquidchromatography-tandemmassspectIT/SATA068—2024前言 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试剂 6仪器 27试样制备与保存 2试样的的制备 2试样的的保存 28测定步骤 2提取 2净化 2测定条件 29结果计算 410测定低限 411精密度和回收率 4附录A（资料性）氯霉素（CAP）、D5-氯霉素（D5-CAP）、甲硝唑（MDZ）和D4-甲硝唑（D4-MDZ）多反应监测（MRM）色谱图 5附录B（资料性）氯霉素和甲硝唑在不同基质中的平均回收率和精密度 6T/SATA068—2024本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本标准可能涉及某些有危险性的材料、操作和设备，但是并未对与此有关的所有安全问题都提出建议。因此，使用者在应用本标准前应建立适当的安全和防护措施，并确定相关规章限制的适用性。本文件由深圳市分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：深圳市龙华区疾病预防控制中心，深圳市疾病预防控制中心，深圳市南山区疾病预防控制中心，深圳市罗湖区疾病预防控制中心。本文件主要起草人：罗兰，秦威振，王甫，黄承鹏，钟宝辉，熊韦，任燕，曹赫，林启辉，刘红河，姜杰，刘桂华，曾宪东，柳洁，朱波，赖少阳，叶敏。1T/SATA068—2024动物源性食品中氯霉素和甲硝唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法本方法适用于液相色谱-串联质谱对氯霉素和甲硝唑抗生素残留量的同时测定。本标准适用于猪、牛、鸡、鸭、鱼、虾、贝类中氯霉素和甲硝唑抗生素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留测定液相色谱-质谱/质谱法GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理采用乙酸乙酯提取试样中氯霉素和甲硝唑药物残留，经低温离心，正己烷除油，氮吹、定容后，用液相色谱-串联质谱测定目标物，内标法定量。5试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。正己烷（C6H14）：色谱纯。乙腈（C2H3N）：色谱纯。乙酸铵（C2H7NO2）：色谱纯。氢氧化铵（NH3OH，浓度为25%~28%）。无水硫酸钠（Na2SO4使用前经马弗炉550℃灼烧2h，冷却后密封保存。5mmol/L乙酸铵溶液：称取0.39g乙酸铵，用水稀释至1000mL，混匀。CAS:443-48-1）、D4-甲硝唑（C6H5D4N4O3，CAS:1261392-47-5）标准物质：纯度≥98%标准储备液：1000mg/mL。分别准确称取氯霉素、甲硝唑、D5-氯霉素、D4-甲硝唑标准品10.0mg（按照纯度示值折算），用甲醇溶解并定容至10mL，配成1000mg/mL的标准储备液，-20℃以下避光保存，保存期为12个月。混合标准储备液：分别准确吸取100μL氯霉素、甲硝唑标准储备液，用甲醇定容至10mL，配成浓度为10mg/L的混合标准储备液，-20℃以下避光保存，保存期为6个月。2量浓度为0.05mg/L,4℃保存，保存期为7天。3T/SATA068—2024c)柱温：40℃;d)进样量：5μL。8.3.2质谱条件a)进样离子源：ESI源，离子源温度550℃。b)扫描模式：氯霉素、D5-氯霉素为负离子扫描模式，甲硝唑、D4-甲硝唑为正离子扫描模式。c)监测模式：多离子反应监测（MRM）。d)喷雾电压：4.5kV。e)源内气：55psi。f)辅助气：55psi。g)气帘气：30psi。h)其他质谱参数见表2：表2监测离子对D-氯霉素D-甲硝唑注：对不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。8.3.3定性测定将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中，测得其峰面积，以保留时间（偏差在±2.5%之内）和监测离子的相对丰度比（监测离子相对丰度的最大允许偏差见表3）定性。根据标准曲线得到待测试样溶液中氯霉素和甲硝唑的质量浓度。平行测定次数不少于两次。表3定性时相对离子丰度的最大允许偏差8.3.4定量测定在仪器最佳工作条件下，对混合标准工作液（4.16）进样，以标准溶液中被测组分峰面积和氘代内标峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中被测组分浓度与氘代内标浓度的比值为横坐标，绘制标准曲线，用标准曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。内标法定量。氯霉素（CAP）、D5-氯霉素（D5-CAP）、甲硝唑（MDZ）和D4-甲硝唑（D4-MDZ）的多反应监测(MRM)色谱图参见图A.1。4T/SATA068—20249结果计算试样中各目标化合物的含量按公式（1）计算：式中：X——试样中目标化合物的含量，单位为微克每千克(µg/kgc——根据标准曲线计算得到的试样中目标化合物的浓度，单位为微克每升(µg/Lv——定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样的取用量，单位为克（gf——稀释倍数。10测定低限本标准对氯霉素、甲硝唑的测定低限均为0.05µg/kg。11精密度和回收率本标准的精密度数据是参考GB/T27404附录F有关规定而确定的，参见附录B。5图44443.43.3404244484s6