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文档简介
PAGE6-动物细胞工程(15分钟50分)1.(12分)(2024·中原名校质量考评)英国科学家格雷戈里·温特以及美国科学家乔治·史密斯因在肽类和抗体的噬菌体展示技术等领域的巨大成就而获2024年诺贝尔化学奖。该技术是将编码多肽或蛋白质的基因插入噬菌体外壳蛋白基因,然后让该噬菌体感染宿主细胞,成熟的噬菌体从宿主中释放出来,成熟噬菌体表面就会出现对应的多肽或蛋白质。请回答下列问题:(1)若利用噬菌体展示技术获得人抗体,应首先从人的________(填“B”“T”或“体”)细胞中获得mRNA,通过____________________________,再合成目的基因(人抗体基因)。然后通过PCR技术扩增目的基因,此过程中,须要的物质除模板链、四种脱氧核苷酸外,还须要__
__。
(2)如图所示为利用细胞杂交技术制备单克隆抗体的过程,A细胞为小鼠黑色素瘤细胞,B细胞为小鼠巨噬细胞(免疫细胞的一种),C为融合细胞或杂交细胞。从A、B细胞到C细胞的过程中,所形成的C有________种(仅考虑两两融合),用特定的选择性培育基筛选后得到的D细胞应当是____________,D细胞还需进行________________________________,就可获得能够分泌所需抗体的细胞。
(3)利用噬菌体展示技术生产单克隆抗体与利用细胞杂交技术生产单克隆抗体的过程相比,噬菌体展示省去了______________________(步骤),使制备更简洁易行。
【解析】(1)抗体基因在B细胞中表达,在T细胞、体细胞中均不表达,因此只能从B细胞中获得人的抗体基因的mRNA。通过逆转录过程获得cDNA片段,再合成目的基因。采纳PCR技术扩增目的基因的过程中,须要的物质除模板链、四种脱氧核苷酸外,还须要引物和热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。(2)图中从A、B细胞到C细胞的过程中,所形成的C有AA型、BB型、AB型3种(仅考虑两两融合),用特定的选择性培育基筛选后得到的D细胞应当是融合的杂交瘤细胞,D细胞还需进行克隆化培育和专一抗体检测,就可获得能够分泌所需抗体的细胞。(3)由于噬菌体可以侵染宿主细胞,将重组DNA分子注入宿主细胞中,因此利用噬菌体展示技术获得单克隆抗体无须进行动物细胞融合,使制备更简洁易行。答案:(1)B逆转录过程获得cDNA片段引物和热稳定DNA聚合酶(Taq酶)(2)3杂交瘤细胞克隆化培育和专一抗体检测(3)动物细胞融合2.(14分)(2024·大同模拟)如图是利用现代生物工程技术治疗遗传性糖尿病的过程图解。请据图回答:(1)②所示的生物技术名称是______________。重组细胞A培育过程中所用培育液除一些无机盐和有机盐类外,还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等成分以及____________________等物质,并且用肯定的方法激活其完成细胞分裂和发育进程。该过程通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的缘由除了它体积大、易操作、养分物质丰富外,还因为它含有____________________的物质。
(2)图中③所示的结构名称是____________。若实现重组细胞B定向诱导分化,须要在培育基中加入________________________。
(3)④所示的生物技术名称是______________,若想得到大量健康的胰岛B细胞基因,可利用________技术。
(4)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是________________。
【解析】(1)①是从体细胞分别出来的细胞核,与去核的卵母细胞进行②核移植。动物细胞培育时,培育液的成分包括无机盐、有机盐类、维生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清等物质。该过程通常用去核的卵母细胞作为受体细胞的缘由除了它体积大、易操作、养分物质丰富外,还因为它含有促进细胞核全能性表达的物质。(2)胚胎干细胞可通过定向诱导分化形成相应的组织细胞,所以③是从早期胚胎中分别的干细胞(内细胞团)。要实现重组细胞B定向诱导分化,须要在培育基中加入分化诱导因子。(3)④是将目的基因导入受体细胞,属于基因工程技术。若想得到大量健康的胰岛B细胞基因,可利用PCR技术。(4)由于细胞核来自患者自身的体细胞,所以与异体移植相比最大的优点是不发生免疫排斥反应。答案:(1)核移植技术血清促进细胞核全能性表达(2)内细胞团(胚胎干细胞)分化诱导因子(3)基因工程(转基因技术、DNA重组技术)PCR(4)没有免疫排斥反应【易错警示】关注动物细胞培育与核移植中四个问题(1)动物细胞培育和植物组织培育都存在细胞的培育过程,但植物细胞可以先分裂再分化,而动物细胞不分化只分裂。(2)区分原代培育和传代培育的关键为是否分瓶培养。贴壁生长到肯定程度须要用胰蛋白酶处理,然后再分瓶培育,原代培育结束,起先了传代培育。(3)经植物组织培育成的植株与供应外植体的植株完全相同,而动物细胞核移植形成的个体与供体大部分性状相同,也有少部分性状与供应去核卵母细胞的个体相同。(4)核移植过程中供体理论上是供应细胞核,但操作过程中可以把整个细胞注入去核的卵母细胞中,缘由是体细胞体积相对较小,取核难度较大,另外细胞膜对核融合的障碍性较小。3.(10分)(2024·哈尔滨模拟)如图为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图。据图回答下列问题:(1)图中向小鼠注射抗原后,所获得的免疫抗血清事实上是含有______________________的混合物,这种方法制备的抗体不仅产量低,而且纯度低。
(2)图中选用B细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞,说明细胞膜具有________。
(3)图中两次筛选的目的不同,其中筛选①的目的是筛选出____________,筛选②的目的是筛选出__________________________________。
(4)科学工作者正在探讨的用于治疗癌症的“生物导弹”就是__,
请指出一种用“生物导弹”治疗癌症的方法较一般化疗的优点
__。
【解析】(1)据图可知,向小鼠注射包含多种抗原确定簇的抗原后,所获得的免疫抗血清事实上是含有Ab1、Ab2、Ab3、Ab4的混合物,这种方法制备的多克隆抗体不仅产量低而且纯度低。(2)B细胞和骨髓瘤细胞融合体现了细胞膜的结构特性——流淌性。(3)图中两次筛选的目的不同,其中筛选①的目的是筛选出杂交瘤细胞,筛选②的目的是筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。(4)科学工作者正在探讨的用于治疗癌症的“生物导弹”,注入体内,借助单克隆抗体的导向作用,将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置,在原位杀死癌细胞。用“生物导弹”治疗癌症和一般化疗相比优点是不损伤正常细胞,且用药剂量少,毒副作用小。答案:(1)Ab1、Ab2、Ab3、Ab4(2)流淌性(3)杂交瘤细胞能产生所需抗体的杂交瘤细胞(4)单克隆抗体上连接抗癌药物不损伤正常细胞,且用药剂量少,毒副作用小4.(14分)如图表示动物细胞培育程序图,请据图回答下列问题:①取动物组织块↓____②____↓③处理组织分散成单个细胞↓④制成________↓⑤转入培育液中进行培育↓⑥处理贴壁细胞分散成单个细胞,制成________↓⑦转入培育液中进行培育(1)过程②表示____________。
(2)过程____________用胰蛋白酶处理组织块或贴壁细胞使其分散成单个细胞,这样做的目的是__
__。
(3)过程⑤进行的细胞培育是____________,细胞适于____________生长增殖。
(4)过程⑦进行的细胞培育是____________,一般传至10代后就不易传下去了,传至10~50代左右时,增殖会渐渐缓慢,以至于完全停止,部分细胞的____________会发生变更。接着培育时,少部分细胞发生了__________,朝着等同于____________的方向发展。
(5)⑤和⑦过程都要放在____________中培育。
【解析】(1)动物细胞培育时,先将组织剪碎。(2)依据动物细胞培育的操作流程并结合图示可知,须要用胰蛋白酶使动物细胞分散成单个细胞,过程是③和⑥,其目的是解除由于接触对细胞生长和增殖的抑制。(3)悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁,以后,细胞进行有丝分裂,数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制,人们通常将动物组织消化后的初次培育称为原代培育。(4)贴满瓶壁的细胞须要重新用胰蛋白酶等处理,然后分别接着培育,让细胞接着增殖,这样的过程称为传代培育;一般传至10代后就不易传下去了,传至10~50代接着培育时,增殖会渐渐缓慢,以至于完全停止,部分细胞的细胞核型会发生变更;接着培育时,少部分细胞发生了突变,朝着等同于癌细胞的方向发展。(5)动物细胞培育的⑤和⑦过程都要放在恒温的二氧化碳培育箱中培育。答案:(1)剪碎组织(2)③和⑥解除由于接触对细胞生长和增殖的抑制(3)原代培育贴壁(4)传代培育细胞核型突变癌细胞(5)二氧化碳培育箱【加固训练】狂犬病病毒的核酸是RNA,G蛋白和N蛋白是狂犬病病毒的主要抗原,它们刺激人体后可诱导人体产生相应的抗体和细胞免疫反应。如图表示用生物工程制备抗狂犬病病毒单克隆抗体的过程。请回答下列问题:(1)制备该单克隆抗体的技术属于生物技术的细胞工程。图中细胞1是小鼠体内注入____________后而获得的________细胞,细胞2为__________细胞。细胞1具有产生______________的功能,细胞2的突出特点是__________________。诱导细胞1和2融合的方法许多,常用的诱导因素有聚乙二醇、______________、电激等。
(2)若细胞1基因型为HH,细胞2基因型为SS,在两两融合后的众多细胞中,基因的组合类型可能有________________________________________________(填基因型)。
(3)动物培育基的配方通常含有糖、氨基酸、无机盐、微量元素等,与植物细胞培育基有所不同的是,还含有__________________。
【解析】(1)首先应给小鼠注射特定抗原(灭活的狂犬病病毒或G蛋白或N蛋白),使小鼠产生相应的免疫反应,然后从小鼠的脾脏中取得已免疫的B淋巴细胞或浆细胞(细胞1),该细胞能够产生特异性抗体。用聚乙二醇、电激、灭活的病毒(或仙台病毒)等方法诱导B细胞(细胞1)和骨髓瘤细胞(细胞2)融合。(2)若细胞1基因型为HH,细胞2基因型为SS,在两两融合后细胞有三种状况:①B细胞(细胞1)自身融合的细胞,基因型为HHH
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