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第第页ELISA试验标准曲线的技术疑难解读标准曲线法也称为外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法，在ELISA试验中比较常用的一种分析方法。标准曲线做的好与坏会直接影响到试验的结果，甚至是关系到试验的成败。那么在ELISA试验中，这一方面该如何处理呢？一、ELISA试验标准曲线的技术解答内容：1.设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，而且要能涵盖你所要检测试验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包含上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使试验样品的浓度在中心坡度*陡段，即曲线将近成直线的范围内。2.采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会显现较大的偏离。3.样品的浓度等指标是依据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式试验还要紧要的一件事，否则后面的试验结果无从谈起。4.做出的标准曲线相关系数因试验要求不同而有所更改，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些试验，至少要0.99甚至是0.999、6.检测标准样品时，应按浓度递增次序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。7.标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。标准曲线浓度得到后，可通过计算器、Excell或SPSS统计软件进行绘制，并得到相关的回归方程（即计算公式）和相关系数（回归系数）。二、选择什么方程去拟合用于免疫检测的所谓“标准曲线"其实称为拟合曲线比较合适。免疫检测时标准点（可以是倍比稀释的，也可以不是）浓度假如和相应的吸光度（OD）值假如能够呈现直线关系当然是理想的了，这时可以通过EXELL等方便的获得拟合曲线，进而推算出样品的浓度值。但我们做免疫检测很少有时候能够有这么理想的情况，标品浓度和相应OD值往往是"S"型的曲线关系，这时就不能用直线拟合的方式了，而对拟合方法进行选择就是必需的了。关于标准曲线的拟合方式，直线、二次曲线、三次曲线、指数、对数等虽都可用于ELISA及其它生物学反应中的曲线拟合，但都只适用于曲线的一部分，有的适用于前半段，有的适用于后半段，有的适用于中心一段，而Logistic曲线则对曲线的全部都有较好的适用性。当然，假如用于定量，还是在中心一段较好。这些方法虽然没有一种方法可以通用，但也都可以用。关键在于你的标准曲线做到了S形的哪一部分，你想检测的样品浓度在曲线的哪一部分。在S曲线的低浓度部分可以用乘幂方程特别好的拟合，中低浓度部分可以用直线方程，中心部分可用对数方程，而中后段可用四参数。目前国际上流行的免疫检测拟合方式是“四参数逻辑拟合"，用这种拟合方式往往能够比较精准明确的反映浓度和吸光度的曲线关系，从而进一步比较正确的获得样品中待测物质的浓度值。其实，在一个长的区间内，Logistic应当都能拟合得较为理想。但并不是说它就是万能的。事实上不但是ELISA，其它很多生物学反应都是S形曲线，也都可以用Logistic曲线拟合。但建模型

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