DBXM126-2021牛出血性败血病防治技术规范

ICS FORMTEXT11.220FORMTEXTCCSB41FORMTEXT     DBFORMTEXT22DBFORMTEXT22/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT     FORMTEXT牛出血性败血病防治技术规范FORMTEXTTechnicalspecificationsforpreventionandcureofbovinehaemorrhagicsepticaemiaFORMTEXT点击此处添加与国际标准一致性程度的标识FORMDROPDOWNFORMTEXT（本稿完成日期：2021-11-20）FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施FORMTEXT吉林省市场监督管理厅   发布DBXX/XXXXX—XXXXI前  言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由吉林省畜牧管理局提出并归口。本文件起草单位：吉林省动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：吴丹、于钦磊、白翠、马晓媛、胡泽宇、曹东阳、杨金鑫、朱奕霏、刘冬冬、李伟。牛出血性败血病防治技术规范范围本文件规定了牛出血性败血病的诊断、防治措施、疫情报告、疫情处置、档案管理的技术要求。本文件适用于牛出血性败血病的诊断和防治。规范性引用文件下列文件中的内容通过中文的规范性引用而构成本文件的必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅注日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T27530牛出血性败血病诊断技术NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T3075畜禽养殖场消毒技术NY/T3445畜禽养殖场档案规范NY/T3467牛羊饲养场兽医卫生规范NY/T5030无公害食品畜禽饲养兽药使用准则DB22/T3137动物疫情报告管理规范农医发〔2017〕25号病死及病害动物无害化处理技术规范定义和术语下列术语和定义适用于本文件。牛出血性败血病bovinehaemorrhagicsepticaemia又名牛巴氏杆菌病，由多杀性巴氏杆菌某些血清型引起的一种牛的高度致死性、急性败血性传染病，发病率与死亡率都极高，主要发生在亚洲、非洲、中东及南欧的一些地区。诊断流行病学特点传染源该病的传染源为多杀性巴氏杆菌（pasteurellamultocida），为革兰氏阴性球杆状或短杆状菌，两端钝圆，无鞭毛，不形成芽孢。根据其荚膜抗原和菌体抗原区分血清型，前者可分为A、B、D、E、F5个血清型，后者可分为16个血清型。引起牛出血性败血病的多杀性巴氏杆菌以血清型6：B和6：E为主。传播途径主要通过病牛或带菌牛（包括健康带菌牛和病愈后带菌牛）的排泄物、分泌物经消化道和呼吸道传播。多杀性巴氏杆菌进入动物体内后大量寄生在牛的上呼吸道和消化道黏膜上，各种诱因使牛机体抵抗力降低时，发生内源性感染。外源性传染多经消化道，偶尔可经皮肤黏膜的损伤或吸血昆虫的叮咬而传播。不良因素（如饲养管理不良、气候突变、长途运输、饥饿、寒冷等）可诱发该病。易感动物各年龄的牛均易感，无明显的品种、日龄和性别差异。潜伏期潜伏期一般为2d~5d。发病季节发病无明显季节性，但冷热交替、气候剧变的时候多发，也可呈地方流行性。发病率与病死率不同毒株致病性有所差异，如在感染初期不采取治疗措施，强毒力毒株导致的病死率可接近100%。在地方性流行地区，死亡病例主要为较大犊牛和青年牛。临床表现败血型病牛体温升高，高达41℃～42℃，随后出现全身症状，轻症病牛表现为腹痛、开始下痢，粪便初为粥样，后呈流状，其中混有粘液，粘膜片及血液，恶臭，有时鼻孔内和尿中有血。下痢开始后体温下降，迅速死亡。病程多为12h～24h，最急性病例中，可发生突然死亡，无明显临床症状。浮肿型病牛体温升高，颈部、咽喉部及胸前部皮下出现迅速扩展的炎性水肿，同时伴有舌及周围组织的高度肿胀，舌伸出齿外，呈暗红色。呼吸高度困难，皮肤和粘膜普遍发绀，也有下痢和某一肢体发生肿胀者，常因窒息而死。病程多为12h～36h。肺炎型病牛体温升高,呼吸困难,干咳,流泡沫样鼻液,后鼻液呈脓性。胸部叩诊有痛感。病初便秘，后腹泻，粪便恶臭并混有血液。病程一般3d～7d左右。病理变化多数牛呈现由严重充血水肿引起的颈部明显肿胀。败血型呈一般败血症变化，内脏器官出血，淋巴结显著水肿，胸腹腔有大量渗出液；浮肿型在咽喉或颈下有浆液浸润，切开浮肿部流出深黄色透明液体，间或杂有出血，咽周组织和会咽软骨韧带呈黄色胶样浸润，咽淋巴结和颈前淋巴结高度急性肿胀；肺炎型主要表现为胸膜炎和格鲁布氏性肺炎，胸腔中有大量浆液性纤维素性渗出，肺切面呈大理石状，心包与胸膜粘连，内有干酪样坏死物。实验室诊断样品采集病牛或病死牛应按NY/T541要求采集鼻腔拭子、抗凝全血或病变组织。病原分离鉴定按照GB/T27530执行。聚合酶链式反应参见附录A。

结果判定临床疑似病例符合牛出血性败血病的流行病学特点、临床表现和病理变化，判定为临床疑似疫情。确诊病例对临床疑似病例，经上述任一实验室诊断方法检测，结果为阳性的，判定为确诊疫情。防治措施免疫免疫接种应选择符合《兽药管理条例》，且具有生产许可证和批准文号的牛多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗。免疫时间及程序散发地区一年免疫1次，多发地区每年免疫2次，具体免疫时间根据各地区牛出血性败血病流行情况而定。发生疫情时，应对同群的假定健康牛进行紧急接种。接种方法免疫方法依据疫苗使用说明。注意事项免疫操作后应及时收集和消毒免疫器械（针头、注射器、包装盒等）和残余疫苗，防止被牛只误食，防止具有毒力的疫苗菌毒株扩散。治疗抗菌消炎疗法使用青霉素、链霉素、四环素族抗生素、磺胺类药物以及新上市的有关疗抗菌药物进行治疗。兽药的使用应符合NY5030的规定。选用药敏试验敏感的药物进行治疗，不应使用国家违禁药物，并有完整的兽药使用记录，包括药品来源、使用时间和用量，有休药期规定的，应按规定执行。对症辅助疗法在应用抗菌消炎疗法的同时，再结合解热、镇痛、补液、解毒、强心的对症辅助疗法。中药疗法大黄60g、薄荷60g、玄参60g、柴胡60g、板蓝根60g、桔梗60g、连翘60g、荆芥60g、酒黄芩30g、甘草30g、马勃30g、牛蒡子30g、青黛30g、陈皮30g、滑石120g、酒黄连25g、升麻20g。水煎候温灌服（成牛用量）或使用国家批准的其他中草药制剂。加强营养治疗期间应适当补充维生素，并给予易消化饲料，饲料应符合NY/T5032的要求。饲养管理养殖场应按照NY/T815要求保证牛的营养需要，并符合NY/T3467要求。饲养人员应定期观察牛只的采食情况和精神状态。当牛处于妊娠期、周边场发生疫情等高风险状态时，应提高观察频率，及时发现生产异常和疑似病牛。当有异常疾病发生或牛只死亡时，应聘请当地具有执业兽医资质的人员进行诊断和治疗。消毒养殖场应根据NY/T3075定期对牛舍及周边环境进行消毒，消毒药应经常更换。一旦发生牛出血性败血病，应对感染和发病牛及其污染物、病死牛及其污染物、被污染环境、无害化处理环节等实行有效实时消毒。疫情报告发现该病疑似病例的单位和个人，应按DB22/T3137规定报告疫情，不得出售、转移该场所动物，不得抛弃死亡动物。报告者在报告疫情的同时，应及时将染疫、疑似染疫牛与其他牛隔离，并保存好病死牛，以便动物疫病预防控制机构进行处置。疫情处置确诊后应立即对隔离的病牛进行药物治疗，并对同群假定健康牛进行观察、测温，可用磺胺类药物或其他抗生素进行做紧急药物预防。进行疫源分析和流行病学调查，并详细记录。紧急免疫接种，禁止在污染的草场上放牧。所有病死牛及可能被污染的产品严格按照病死及病害动物无害化处理技术规范进行无害化处理。档案管理所有记录应按照NY/T3445进行管理，并保证准确、可靠、完整。

（规范性附录）多杀性巴氏杆菌荧光PCR检测方法仪器设备高速冷冻离心机（最高离心速度不低于12000r/min）。生物安全柜。-20荧光PCR仪。微量移液器（0.5μL〜10μL、2μL〜20μL、20μL〜200μL、200μL〜1000μL）。耗材滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）。Eppendorf管（1.5mL、0.5mL、0.2mL）。PCR管（0.2mL）。质控品阳性对照，含多杀性巴氏杆菌菌株的培养液。阴性对照，无核酸酶水。试剂DNA提取试剂盒。荧光PCR预混液。引物与探针，见表A.1。引物与探针序列及浓度名称序列浓度上游引物F5’-GCCACCTGCCATAAGATGAGC-3’10pmol/µL下游引物R5’-CGTAGGAGTCTGGACCGTGTC-3’10pmol/µL探针5’-FAM-GCCTACCAAGCCTGCGATCTCTAGC-TAMRA-3’5pmol/µL操作步骤核酸提取按DNA提取试剂盒方法或其他等效方法提取DNA模板。荧光PCR扩增体系在试剂准备区打开和配制试剂，配制完毕后应及时将剩余试剂放回贮存区域。取0.2mLPCR反应管，在冰浴条件下配制20µL反应体系，按照表A.2依次加入以下成分，同时设阴性、阳性对照。加完后盖紧盖子。样品反应体系体系组分用量2╳PCR预混液10.0µL无酶核酸水5.9µL上游引物F0.8µL下游引物R0.8µL探针溶液0.5µLDNA模板2.0µL总量20.0µL荧光PCR的扩增条件设置在核酸扩增区将PCR管置荧光PCR仪上按如下程序扩增：95℃预变性30s；95℃变性15s，60℃退火1min，共40结果分析条件设定试验检测结束后，根据生成的荧光曲线和Ct值直接读取检测结果，Ct值为每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。原则上可设定仪器自动模式分析确定阈值基线，特殊情况下阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品扩增曲线的最高点，不同仪器可对阈值线的位置进行调整，然后读取检测结果。质控标准阴性对照无Ct