DB34∕T 1535-2011 乳制品中恩诺沙星、麻保沙星、二氟沙星残留量测定 液相色谱-串联质谱法　　

DB34/T1535—2011留量测定液相色谱-串联质谱法安徽省质量技术监督局发布IDB34/T1535—2011本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省质量技术监督局、安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会提出。本标准由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家农副加工食品质量监督检验中心、安徽国家农业标准化与监测中心。本标准主要起草人：顾亮、徐彦辉、丁磊、陶运来、罗亮、王苏红、刘坤、彭涛。1DB34/T1535—2011乳制品中恩诺沙星、麻保沙星、二氟沙星残留量测定液相色谱-串联质谱法件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。3原理用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲液(pH=4.0)提取乳制品中的喹诺酮类抗生素，经离心后，上清4试剂4.4柠檬酸。4.9磷酸氢二钠溶液(0.2mol/L):称取71.63g磷酸氢二钠，用水溶解，定容至1000mL。4.10柠檬酸溶液(0.1mol/L):称取20.01g柠檬酸，用水溶解，定容至1000mL。4.11Mcllvaine缓冲液：将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液(4.10)与625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液(4.9)混合，用盐酸或氢氧化钠调节pH至4.0±0.05。4.12EDTA-Mcllvaine缓冲液(0.1mol/L):称取60.5g乙二胺四乙酸二钠(4.8)放入1625mLMcllvaine缓冲液(4.11)中，振摇使其溶解。4.13甲醇水溶液：5%(体积分数)。2DB34/T1535—20114.14甲酸水溶液：0.1%(体积分数)。5.2电子天平：感量0.0001g和感量0.01g。5.4高速冷冻离心机(转速10000r/min)。称取约5.0g(精确至0.01g)试样于50mL聚丙烯离心管中，加入40.0mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲液(4.12),漩涡混匀，超声提取10min,10000r/min离心5min(温度低于5℃),取上清液(上清液若除脂不完全，可加5mL正己烷除脂，离心分层取下层清液过柱)。HLB固相萃取柱(200mg,6mL),使用前依次用6mL甲醇、6mL水活化。将6.1提取的溶液以2～3mL/min的速度过柱，弃去滤液，用2mL5%甲醇水溶液(4.13)淋洗，弃去称取与试样基质相应的阴性样品5.0g,按照6.1、6.2与试样同时进行提取和净化，用系列标准溶液3DB34/T1535—2011e)流动相：流动相A(0.1%甲酸)+流动相B(乙腈),参考梯度条件见表1。时间(min)流速(μL/min)流动相A(0.1%甲酸)流动相B(乙腈)055655a)离子源：电喷雾离子源(ESI);c)检测方式：多反应监测(MRM);d)雾化气(NEB)、气帘气(CUR)、碰撞气(CAD)均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以f)定性离子对、定量离子对、碰撞电压和碰撞能量等参数见表2。名称母离子(m/z)子离子(m/z)碰撞电压(V)碰撞能量(V)恩诺沙星316.1麻保沙星363.25二氟沙星400.2382.1356.1各检测目标化合物以保留时间和两对离子的(特征离子对/定量离子对)所对应的LC-MS/MS色谱一致(偏差±0.5%),同时要求被测试样中目标化合物的两对离子丰度比与标准溶液中目标化合物的丰度比一致，相对丰度>50%、20～50%、10～20%、<10%时，允许偏差分别为±20%、±25%、士30%和±50%。4按以上步骤，对同一试样进行平行测定。8结果计算测定结果按式(1)计算：.......................................(1)式中：X——样品中目标化合物含量，单位为微克每千克(μg/kg);C——测定浓度，单位为微克每升(μg/L);V样品定容体积，单位为毫升(mL);W——样品称样量，单位为克(g)。9方法回收率和精密度9.1回收率本方法在0.50μg/kg～100.0μg/kg添加浓度范围内，用阴性样品进行添加回收试验，恩诺沙星、